絨毛染色體檢測在稽留流產原因探討中的應用

廖翠 唐曉惠

稽留流產屬于婦產科常見病, 還可稱之為死胎不下或者過期流產。通常胚胎死亡后依舊在宮腔內稽留, 孕產物常在出現癥狀后的30～60 d內排出, 但胚胎發育停止后60 d內依舊未自然排出即稱之為稽留流產［1］。文獻記載, 孕婦出現先兆流產癥狀或者未出現癥狀, 仍繼續妊娠, 但子宮未長大,逐漸減少, 同時早孕反應消失, 患病原因與遺傳因素有一定的關系［2］。為明確稽留流產與絨毛染色體之間的關系, 現就本院2016年1月～2017年12月收集的81例稽留流產患者絨毛組織實施絨毛細胞培養及檢測的結果進行分析, 陳述如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月～2017年12月于本院婦科住院排胎的81例孕早期稽留流產患者作為研究對象, 年齡最小19歲, 最大42歲, 平均年齡(31.60±3.61)歲；孕周最短6周, 最長14周, 平均孕周(8.41±2.59)周；13例初次妊娠, 8例有自然流產史, 7例有稽留流產史；46例合并陰道出血, 出血時間最短1 d, 間斷出血時間最長31 d, 平均出血時間(7.15±8.34)d, 35例無陰道出血。

1.2 納入標準 ①患者存在停經史, 血尿人絨毛膜促性腺激素(HCG)顯陽；②經B超檢查提示宮腔內能見胚胎樣組織或胚芽或空孕囊, 未見胎心；③保留患者知情權, 由其自愿簽訂同意書；④本研究得到醫院倫理委員會批準。

1.3 方法 所選患者住院期間, 均在藥流排胎后有菌條件下對其絨毛進行采集, 其后在無菌離心管50 ml中放置, 將適量的無菌生理鹽水放入其中, 擰緊蓋后密封, 送至實驗室檢驗。本次需對采集到的絨毛組織進行短期培養法或直接法。①短期培養法：于倒置顯微鏡下對絨毛組織進行挑選, 一般為10～20 mg, 主要選取顏色透明, 乳白色或者白色絨毛, 將其漂洗之后剪碎, 放入離心管(10 ml)中, 每管均加入1 ml 1%胰酶以及8滴酶解液, 放置在37℃水浴5 min, 充分搖勻, 以2000轉/min離心10 min, 將上清去除, 加入8 ml的培養液,待其吹打均勻, 再依次加到2個培養瓶(50 ml)中, 放置在CO2培養箱中進行為期1 d的培養, 于倒置顯微鏡下仔細觀察,若能見克隆形則提示能換液, 可繼續培養過液。將秋水仙素35 μl加入, 同樣在37℃溫度下水浴5 min, 去除上清 , 每一瓶中均可加入5 ml 1%枸櫞酸鈉低滲液, 放置在水浴箱(37℃)中40 min, 加入1 ml預固定液, 即 3∶1的冰醋酸∶甲醇, 在37℃下水浴2 min, 將培養瓶取出, 上清液去除, 每瓶中均加入固定液1.5 ml, 待細胞表面平鋪后將上清液去除；每瓶均加入固定液4 ml, 于37℃下水浴20 min, 將上清液去除, 每瓶加入預冷固定液4 ml, 在37℃下水浴10 min；將上清液去除,每瓶加入固定液4 ml, 水浴(37℃)10 min, 去除上清液, 最后制片。②直接方式：首先, 選取10～15 mg的絨毛組織, 將預溫比例為1∶1的8 ml氯化鈉混合低滲液與0.4%檸檬酸鈉加入, 在37℃下水浴25 min, 將固定液1 ml加入預固定, 將上清液去除, 加入5 ml固定液, 固定0.5 h后離心, 將固定液去除, 將上述操作重復2次。其次, 將1 ml 60%冰醋酸加入,時間為1 min, 再將3 ml甲醇加入, 使其混勻 , 將較大的絨毛枝去除, 再離心, 將上清液去除, 將新鮮配制的固定液加入,最后滴片。烤片75℃烤箱1 h, 實施G顯帶和吉姆薩染色。

2 結果

2.1 制片情況 81例標本中, 74例能用于核型分析, 染色體標本成功培養制片的幾率為91.4%, 7例失敗, 其中無細胞生長7例。

2.2 絨毛染色體異常核型 74例成功制片的絨毛標本中,出現52例(70.3%)染色體異常, 其中35例(47.3%)常染色體三體, 6例(8.1%)多倍體, 7例(9.5%)性染色體單體, 4例(5.4%)結構異常。絨毛染色體異常核型：數目異常分別為47,XN, +16有 7例 (13.5%)；47, XN, +22有 6例 (11.5%)；47,XN, +21有5例(9.6%)；47, XN, +15有4例(7.7%)；47, XN, +18有3例(5.8%), XN, +17有2例(3.8%)；47, XN, +2有2例(3.8%)；47, XX, +5、47, XY, +7、47, XX, +11、47, XY, +12、47, XX, +13、47, XY, +14各有1例(1.9%)；69, XXN有6例(11.5%)；45, X只有1條X染色體有7例(13.5%)。結構異常4例(7.7%), 分別為46, XY, 21q22.3×321號染色體部分三體；47, XY, +5, 7q36.3×35三體合并7號染色體部分三體；45,XY, -21 21單體；46, XY, 6p25-p23×3。

3 討論

在臨床診斷胚胎停止發育的諸多方法中, B超檢查能夠了解胚胎存活情況, 因此這種診斷方式對臨床盡早發現胚胎停止發育極為有利, 能為治療方案的制定提供可靠依據。另外, 孕婦進行血常規檢查時, HCG指標亦能夠對胚胎發育的情況進行評估［3］, 若血常規檢查時顯示與妊娠相關的激素不逐漸升高或降低等情況, 則提示可能出現胚胎停止發育, 特別是對于伴有陰道出血的患者, 需加強重視, 以便于早期確診, 減少宮內稽留的時間［4-6］, 減少手術并發癥。

資料顯示, 絨毛染色體異常檢驗是否成功與檢測手段［7-9］、樣本采集有密切的關系, 另外, 與稽留時間也有重要關系, 在檢測時, 不管是采取短期培養法或是直接法, 均是應用有生命力的細胞, 若用時過久, 造成組織細胞死亡或不新鮮, 會對檢測的結果帶來影響［10-12］。本研究81例稽留流產患者的絨毛樣本中, 7例失敗, 其中4例患者絨毛因稽留時間過長, 所采集的絨毛顯示黃褐色, 無光澤且暗淡, 因而檢測失敗。81例中染色體異常52例, 其中其中35例(47.3%)常染色體三體, 6例(8.1%)多倍體, 7例(9.5%)性染色體單體,4例(5.4%)結構異常, 出現上述異常的原因主要為核內復制、雙雄受精以及雙雌受精等。

綜上所述, 導致稽留流產的原因諸多, 絨毛染色體檢測在稽留流產患者中的可行性高, 有助于積極指導患者再次妊娠。