王桂煥
(東港市中心醫院檢驗科,遼寧 東港 118300)
血培養是血液感染診斷的金標準,近幾年,隨著置留導管及各種侵入性診療手段的普遍展開,菌血癥的發生率呈現逐年遞增的趨勢,及時分離出致病菌對改善患者的預后具有十分重要意義。目前臨床主要采用全自動血培養儀,該設備可以根據不同菌株適宜生長條件設置相應的報警時間機制,既能保證在有效時間內提升微生物的檢出率,又能第一時間分析推測出所培養的致病菌株的主要成分和種類,為臨床醫師提供寶貴的選擇用藥時間,為患者遠期療效保駕護航。為進一步明確血培養報警時間設定與培養陽性菌株不同種類之間的關系,本研究回顧性分析了2015年1月至2016年12月本院Bact/A-lert240檢測出的血培養陽性標本致病菌種類及其陽性報警時間,以為患者的診療及監測提供指導依據。
1.1 標本來源:回顧性分析了2015年1月至2016年12月本院Bact/A-lert240檢測出的血培養陽性標本。
1.2 儀器與試劑:法國梅里埃Bact/A-lert240全自動血培養儀及各種配套的厭氧血培養瓶和需氧血培養瓶。VITEK2-Compact全自動微生物鑒定儀及配套的鑒定卡。
1.3 方法
1.3.1 血培養處理:根據無菌操作原則,采集成人5~10 mL靜脈血至血培養瓶中,并即刻送至細菌室,根據說明書放置在血液培養儀中進行培養。同時使用儀器進行自動監測,當檢出陽性時則報警,記錄該樣本的陽性報警時間。未報警的樣本繼續檢測5 d,仍未報警時可記為陰性。對于報警標本,立即取出并使用1 mL無菌注射器將瓶內培養液抽取出來,進行革蘭染色后分別轉種至巧克力培養基、哥倫比亞血培養基和麥康凱培養基,懷疑為念珠菌的則接種至沙保羅培養基,接種后放置在37 ℃環境進行18~24 h的孵育,若有菌生長,可將其分離培養,并進行藥敏試驗;若革蘭染色未發現細菌,且轉種仍未有細菌生長則記為假陽性。通過VITEK2-Compact微生物細菌鑒定儀對分離好的病原菌進行細菌種屬的鑒定。質控菌株:ATCC25923、ATCC27853、ATCC25922。
1.3.2 血培養陽性病原菌的判斷標準:血培養報警陽性且檢出分離株的患者,如果其被診斷為菌血癥則可認為是病原菌,如果其未被診斷為菌血癥則可認為是污染菌。
171例血培養陽性標本中,腸桿菌科細菌72株,占42.11%;葡萄球菌屬47株,占27.49%;其他52株,占30.41%。腸桿菌科的大腸埃希菌平均陽性報警時間最短,為13 h;其中最早報警時間為2 h;假絲酵母菌屬的平均陽性報警時間最長,為84 h。陽性報警時間在0~12 h內的病原菌中,大腸埃希菌占86.49%(32/37),與其他菌株相比檢出率最高;陽性報警時間在12~48 h內時,葡萄球菌屬檢出比率達65.31%(64/98),明顯比其他菌株檢出率高;均有P<0.05。
致病菌株不同其生長習性也大不相同,菌株在培養基生長代謝過程中可以通過分解糖類或中間代謝產物的方式分解產生CO2氣體,因為不同菌株生長代謝中產生的CO2氣體含量不同,因此以此為依據培養瓶會根據CO2量不同進行相應的顏色變化,利用計算機對因CO2氣體產生量不同而發生顏色變化的信息,并通過計算機運算其CO2信息變化速度、CO2產生的初始值及加速度3種方式對培養瓶中初始CO2濃度與產生的CO2濃度對比觀察,并以此為依據作為培養結果是否為陽性的標準,一旦計算機將結果判定為陽性,則可以通過報警器發出警報聲,同時提示該菌株的生長曲線信息[1]。因此,通過出陽性警報聲的時間,結合微生物獨特的生長特點,可對微生物的類型進行初步的推斷。大部分腸桿菌科細菌對營養條件的要求并不是很高,且其生長速度也較快,可在短時間內產生較大量的CO2,這使得該菌株的報警時間較其他病原體顯著減少[2]。相反許多鏈球菌多為兼性厭氧,少部分為專性厭氧,因此培養過程中對外界環境要求比較苛刻,在培養基培養過程中菌株生長緩慢,并且生長代謝時對糖類及代謝基質的分解能力也不恒定,這些均會導致CO2的產生少而慢,因此鏈球菌陽性報警時間也相對較長。葡萄球菌為兼性厭氧或需氧菌,其對外界培養條件談不上苛刻,對營養物質要求也不高,通常在肉湯類營養基質內生長迅速,但對碳水化合物形成的發酵反應為不規則形,因此與腸桿菌科菌株相比其CO2產生的能力及產生速度均明顯不及,因此其陽性報警時間要慢于腸桿菌屬[3]。
綜上可知,通過血培養陽性病原菌的報警時間可初步判斷病原菌的種類,為指導臨床醫師合理選擇抗菌藥物提供了重要的指導依據。