血清白細胞介素-35水平與急性運動軸索型神經病患者疾病嚴重程度的關系

朱思語，常生輝，丑麗莎，張大啟，李立敏，楊麗

急性運動軸索型神經病（acute motor axonal neuropathy，AMAN）是吉蘭-巴雷綜合征（Guillain-Barre syndrome，GBS）的常見亞型，好發于東亞和南美洲人群，臨床特點是病情急，易迅速出現四肢癱瘓和呼吸肌麻痹，進展快、病殘率高、預后差。目前，研究多認為AMAN是一種繼發于感染后的自身免疫性疾病［1］。白細胞介素-35（interleukin-35，IL-35）是一種由活化的炎癥細胞分泌的負向免疫調節因子，目前其已知的功能包括：維持外周的免疫系統、調控效應T細胞的增殖及抑制Th17細胞的分化和IL-17的合成；其與自身免疫性疾病和感染性疾病密切相關。研究表明，IL-35在自身免疫性疾病的發病機制中起重要作用［2-4］。然而，在AMAN患者中IL-35的作用尚未明確。本研究旨在探討IL-35與AMAN患者疾病嚴重程度、預后及其他相關臨床參數之間的關系，以期為臨床提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2010年7月—2015年7月于天津醫科大學總醫院神經內科住院治療的AMAN患者30例（AMAN組），男15例，女15例，年齡17～75歲，平均（44.43±15.73）歲；均符合1990年Asbury制定的GBS診斷標準中AMAN亞型［5］，且排除高鉀血癥、低鉀血癥、血卟啉病、結締組織病和其他神經系統疾病。同期選取健康對照組（healthy controls，HCs）30例，男8例，女22例，年齡23～65歲，平均（47.63±12.10）歲，均為我院體檢中心選取的健康志愿者，抽血前無感染性疾病、腫瘤、自身免疫性疾病等病史。2組年齡（t=0.883）與性別（χ2=3.455）差異無統計學意義（P＞0.05）。2組血標本收集前患者未接受過皮質類固醇激素、抗炎藥物、血漿交換和免疫球蛋白治療。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 記錄所有研究對象性別、年齡及患者既往感染史、血清抗神經節苷脂GM1/GQ1b抗體、住院期間治療情況等資料。研究對象均自發病起約2周時進行神經電生理檢查。入院2周時采用GBS運動功能缺損評分（GBS disability score，GDS）評估患者的疾病嚴重程度［6］，采用Erasmus吉蘭-巴雷綜合征預后評分（Erasmus GBS outcome score，EGOS）評估患者6個月內的預后［6-7］，其中GDS和EGOS評分由兩位具備資格的神經科醫生獨立完成并校對。

1.2.2 血清IL-35水平檢測 AMAN組于急性期采集空腹靜脈血3 mL，對照組空腹采等量血標本。留取血清標本于-80℃凍存，采用人IL-35酶聯免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（美國Biolegend公司）檢測血清IL-35水平，參照說明書要求應用酶標儀測定在450 nm波長下各底物吸光度值，制作標準曲線，計算各樣本IL-35濃度，本實驗中依標準品對IL-35檢測限度（0.13 μg/L）分為低分泌組（＜0.13 μg/L）和分泌組（≥0.13 μg/L）組，比較2組GDS和EGOS水平差異。

1.2.3 血清抗神經節苷脂GM1和GQ1b抗體檢測 將凍存于-80℃的血清標本分別采用GM1和GQ1b的ELISA試劑盒（中國武漢華美CUSABIO）進行檢測，根據說明書用酶標儀在450 nm波長下測定光密度（OD）值，與臨界值相比較。陽性判斷：樣本孔OD/陰性對照孔OD≥2.1，陰性判斷：樣本孔OD/陰性對照孔OD＜2.1。

1.3 統計學方法 采用SPSS20.0統計軟件進行數據分析，計數資料采用例（%）表示，組間比較用χ2檢驗；符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，2組間比較用獨立樣本t檢驗；非正態分布的計量資料以M（P25，P75）表示，組間比較用Mann-Whitney秩和檢驗，相關分析采用Spearman等級相關。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1AMAN組一般資料結果 AMAN組有前驅感染史12例，其中腹瀉8例，上呼吸道感染4例。GDS（3.90±0.80）分，EGOS（4.53±1.07）分；GM1抗體陽性13例，GQ1b抗體陽性2例，雙抗體陽性患者1例。

2.2 2組血清IL-35水平比較 AMAN組（30例中有17例IL-35的值為0）及HCs組血清IL-35水平分別為0（0，0.73）μg/L、0.52（0.24，2.42）μg/L，差異有統計學意義（Z=2.797，P＜0.05）。

2.3 血清IL-35水平與疾病嚴重程度及預后的關系 AMAN患者急性期血清IL-35水平與住院2周GDS和EGOS呈負相關（rs分別為-0.430和-0.523，均P＜0.05）。

2.4 低分泌組和高分泌組GDS和EGOS情況 低分泌組（17例）患者的GDS和EGOS均高于分泌組（13例），差異有統計學意義（GDS：分，4.18±0.81vs.3.54±0.66，t=2.312，P＜0.05；EGOS：分，4.97±1.04vs.3.96±0.83，t=2.872，P＜0.05）。

3 討論

目前研究表明，AMAN的發病機制與抗神經節苷脂抗體及補體介導的對軸突表面細胞膜的攻擊有關，免疫攻擊的對象主要是運動神經軸膜上的神經節苷脂 GM1，GM1b，GD1a和 GalNAc-GD1a［8-9］；而IL-12家族在炎癥的發病過程中起重要作用，是中樞神經系統自身免疫性疾病的潛在治療靶點［10］。作為IL-12家族的成員，IL-12和IL-23在GBS患者中的促炎作用已經被證實［11-12］，而IL-35的作用還未完全闡明。IL-35作為一種抗炎因子，由調節性T細胞（Tregs）和調節性B細胞（Bregs）產生，其通過抑制Th1/Th17細胞來下調免疫反應，在維持免疫穩態中具有重要作用，并且在葡萄膜炎動物模型中已經被證實，IL-35能抑制有害的免疫反應，將重組IL-35轉移到小鼠體內后發現，Bregs誘導產生的IL-35能阻止葡萄膜炎的進展，這提示IL-35為治療自身免疫性疾病提供了一種可能［13］，也被認為是一個很有前景的免疫治療靶點［10］。本研究發現，AMAN組較HCs組IL-35水平偏低，表明IL-35可能參與了AMAN的病理改變，除此之外，AMAN組血清IL-35水平與患者疾病的嚴重程度和預后呈負相關，提示IL-35可能在AMAN患者中起到保護作用。低分泌組GDS和EGOS較分泌組升高，表明低分泌組患者的病情及預后均較重，提示IL-35有希望成為AMAN患者治療的靶點，這為AMAN患者早期病情的評估、預后及對應治療均有重要的指導意義。

目前，相關研究認為IL-35是一種負向免疫調節因子，主要抑制CD4+效應T細胞（Teff細胞、Th1、Th2、Th17）和B細胞的增殖、降低Th1型細胞因子的分泌，以及通過抑制調節性T細胞的轉錄因子Foxp3的表達使IL-35誘導Tregs產生（iTR35細胞）作用，最終維持機體的免疫穩態［12，14-15］。此外，IL-35是調節CD4+T細胞功能及Tregs活性的治療靶點，目前已經證實，GBS患者中IL-35在體外治療CD4+T細胞的療效是通過降低Tregs、Th2細胞的反應來增強Th1和Th17細胞的應答而實現［16］。

綜上所述，IL-35可能參與了AMAN的發病機制，且在疾病的發展過程中起保護作用。血清IL-35的水平可能作為評估患者病情嚴重程度和預后的重要生物學標志物，也有希望成為這一疾病新的治療靶點。

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