保泰松糖衣片劑中保泰松含量測(cè)定的高效液相色譜法改進(jìn)

孫婷，張菁

（河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北石家莊050011）

保泰松又名布他酮，屬非甾體抗炎藥[1]，主要用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及痛風(fēng)，也可用于治療絲蟲病急性淋巴管炎。保泰松通過(guò)肝內(nèi)代謝，代謝產(chǎn)物為羥基保泰松，仍有活性。保泰松的不良反應(yīng)發(fā)生率較高[2－4]，其中還出現(xiàn)了服用保泰松導(dǎo)致兒童中毒的實(shí)例[5]，其代謝產(chǎn)物羥基保泰松也曾在英國(guó)被吊銷生產(chǎn)許可執(zhí)照[6]。而保泰松片劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)多年未提高，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中保泰松片的含量測(cè)定方法仍為易受包衣顏色、檢測(cè)環(huán)境干擾的酸堿容量分析法[7]。文獻(xiàn)[8－16]報(bào)道，要保證質(zhì)量，既要考慮避免對(duì)色譜柱造成損害，又要保證能檢測(cè)到保泰松的已知雜質(zhì)，以及已知雜質(zhì)和保泰松主峰是否能有效分離。本研究中選擇乙腈－乙酸鈉緩沖液系統(tǒng)作為流動(dòng)相，可有效檢測(cè)保泰松的已知雜質(zhì)，且已知雜質(zhì)和保泰松主峰能有效分離，能準(zhǔn)確地檢測(cè)保泰松的有效含量。該方法靈敏度強(qiáng)，專屬性好，精密度高，重復(fù)性良好，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括G1311C四元泵，G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，G1314紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，Agilent 1260 EZChrom化學(xué)工作站（美國(guó)Agilent公司）；XS105型電子天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；KQ5200DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

保泰松對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100481－200601，含量為99.9%，使用前不需干燥)；保泰松雜質(zhì)B(批號(hào)為160523)、C(批號(hào)為160527)對(duì)照品(TPC公司)；保泰松原料藥(JH公司，批號(hào)為BTZ2016490)；保泰松片（廠家A，批號(hào)為16080921，16100621，16111121，規(guī)格為每片0.1 g）；乙腈為色譜純(Fisher Scientific公司）；水為超純水，冰醋酸為分析純，均由天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司提供；醋酸鈉（分析純，天津市贏達(dá)稀貴化學(xué)試劑廠）。

2 方法及結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：AgilentEclipseXDB－C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相：醋酸鈉緩沖液（取醋酸鈉2.72 g，加水700 mL溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4.1，加水至1 000 mL，搖勻）－乙腈（30∶70，V／V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL／min；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液：取保泰松對(duì)照品100 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加乙腈溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為10 g／L的對(duì)照品貯備液。精密量取上述貯備液1 mL，置100 mL容量瓶中，加乙腈溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取本品20片，去糖衣，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于保泰松0.1 g），置10 mL容量瓶中，加乙腈適量，振搖使其溶解，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，得供試品貯備液。精密量取供試品貯液5 mL，置500 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

空白輔料溶液：取生產(chǎn)廠家處方中的所有輔料適量，精密稱定，按供試品溶液的制備方法操作，制備，即得。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取保泰松雜質(zhì)B、雜質(zhì)C各5 mg，精密稱定，精密量取供試品貯備液0.5 mL，置50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液2.5 mL，置10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液及空白輔料溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，見圖1。可見，保泰松峰保留時(shí)間約為24 min，雜質(zhì)B峰保留時(shí)間約為13 min，雜質(zhì)C峰保留時(shí)間約為18 min。保泰松與雜質(zhì)C、雜質(zhì)C與雜質(zhì)B相互之間的分離度均大于2.0，理論板數(shù)按保泰松峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。在該色譜條件下，待測(cè)成分峰與溶劑及其他雜質(zhì)峰分離良好，輔料對(duì)測(cè)定無(wú)影響。

線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液0.10，0.25，0.50，1.00，2.00，3.00 mL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（X，g／L）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝160 007 176 X＋445 888，r＝0.999 9（n＝6）。結(jié)果表明，保泰松檢測(cè)質(zhì)量濃度在0.01～0.30 g／L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果保泰松峰面積的RSD為0.41%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取供試品溶液（批號(hào)為16080921）適量，分別于室溫下放置，于0，1，2，4，6，8 h時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果保泰松峰面積的RSD為0.67%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為16080921）樣品適量，共6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量。結(jié)果保泰松的平均含量為97.69%，RSD為0.88%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為16080921）100 mg，精密稱定，共9份，各置10 mL容量瓶中，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的保泰松對(duì)照品，依法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 保泰松加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

2.4 樣品含量測(cè)定

各取3批樣品適量，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算保泰松的含量。結(jié)果批號(hào)分別為16080921，16100621，16111121的樣品中保泰松的平均含量分別為97.71%，97.80%，97.32%，RSD分別為0.46%，0.51%，0.62%（n＝3）。

3 討論

3.1 含量測(cè)定

隨著藥品檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，方法適用性指標(biāo)越來(lái)越受到關(guān)注，越來(lái)越多的不良反應(yīng)事件也讓公眾的目光聚焦到藥品安全性指標(biāo)的控制是否完善上。2015年版《中國(guó)藥典（二部）》中質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在含量測(cè)定項(xiàng)下增加了系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。是否能檢測(cè)出已知雜質(zhì)，且主成分是否能與已知雜質(zhì)達(dá)到良好的分離效果，最能表明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否對(duì)安全性指標(biāo)有良好把控。因此，含量測(cè)定的檢測(cè)方法不應(yīng)僅停留在檢測(cè)出主成分上。本研究中改進(jìn)了保泰松含量測(cè)定的檢測(cè)方法，能夠更加準(zhǔn)確、有效地檢驗(yàn)保泰松片劑的主成分。采用高效液相色譜法，保泰松含量結(jié)果較原酸堿滴定容量法測(cè)定結(jié)果略高2%，也驗(yàn)證了原酸堿滴定容量法易受包衣顏色干擾，而使突躍終點(diǎn)觀察前置，造成檢測(cè)結(jié)果不夠準(zhǔn)確。本研究中方法分離效果良好，能夠滿足檢驗(yàn)需求，靈敏度高，準(zhǔn)確度好。

3.2 耐用性考察

曾考察4種不同廠家的色譜柱對(duì)保泰松片樣品進(jìn)行耐用性試驗(yàn)。結(jié)果顯示，采用4種不同廠家的色譜柱，主峰與已知雜質(zhì)分離度均大于1.5，且按保泰松峰計(jì)，理論板數(shù)均大于3 000，峰純度良好。經(jīng)方法學(xué)考察表明，擬訂色譜條件具有良好的系統(tǒng)適用性，適合測(cè)定保泰松片中保泰松的含量，且能較好地控制其質(zhì)量。

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