益生菌對老年人口腔念珠菌的影響

何 云，葛家華

念珠菌是一種常見的條件致病菌，主要存在于人體口腔、陰道、皮膚等處[1]，當(dāng)人體免疫力降低或者是發(fā)生微生態(tài)環(huán)境紊亂時，比如老年人、兒童、艾滋病患者、長期服用抗生素患者等[2]，易導(dǎo)致機(jī)體感染念珠菌。念珠菌作為一種共生菌，在老年人口腔中檢出率可達(dá)20%～65%，并隨著年齡的增加而提高[3-4]。益生菌是一類對機(jī)體有益的活性微生物，主要包括酪酸梭菌、乳酸菌、雙歧桿菌等，能通過調(diào)節(jié)宿主微生態(tài)平衡而促進(jìn)機(jī)體健康。有研究顯示，規(guī)律適量的服用益生菌制品，可以調(diào)節(jié)胃腸道和陰道的菌群平衡，從而降低機(jī)體致病微生物的感染率[5]。Mendonca等[6]也證實，益生菌可以降低口腔念珠菌感染。目前大部分的研究主要集中在益生菌對幼兒和重病患者念珠菌感染上，對于益生菌對老年人口腔念珠菌的影響還鮮有報道。本研究就益生菌含片對老年人口腔念珠菌的影響進(jìn)行了觀察。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2013年6月～2015年6月醫(yī)院門診老年患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡＞65歲；（2）能配合完成口腔檢查及唾液樣本采集。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有嚴(yán)重的慢性疾病或腫瘤；（2）使用免疫抑制劑或抗生素；（3）有精神疾病或認(rèn)知障礙；（4）患有口腔干燥綜合癥。共納入對象168例：年齡65～94（75.48±5.60）歲；男性 66 例，女性 102 例；文化程度：大專及以上34例，高中以下134例；城市戶口57例，農(nóng)村戶口111例；上頜牙：義齒88例；無齒23例；＜6顆 27例，＞6顆 30例；下頜牙：義齒 88例；無齒18例；＜6顆20例，＞6顆42例。按照病例入組順序編號，采用奇偶數(shù)法將患者隨機(jī)分為試驗組和對照組，各84例，兩組間基線資料比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。本研究方案得到醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者本人及家屬均對本研究知情同意。

1.2 研究方法 試驗組每天含服含有活菌的益生菌含片 （BLIS K12口腔益生菌含片，新西蘭），2片/次，2次/d，早晚含服。每片含羅伊乳桿菌（菌株號DSM17938）108個活菌。指導(dǎo)研究對象正確含服的方法，使藥片在口腔完全融化，避免嚼服或吞服。同時指導(dǎo)研究對象或其家人每天記錄服用情況，并由試驗者每周電話跟蹤監(jiān)督研究對象的服用情況。對照組按同樣的方式服用安慰劑含片，其大小、顏色、味道、質(zhì)地等與益生菌含片相同，只是不含有活菌。兩組均連續(xù)服藥3個月。

1.3 檢測指標(biāo)

1.3.1 口腔檢查 在試驗開始前和3個月后試驗結(jié)束時，研究對象在醫(yī)院門診接受口腔檢查，常規(guī)對其口腔衛(wèi)生情況、牙齒數(shù)目、義齒、牙齦炎癥等進(jìn)行檢查。同時檢查牙菌斑情況，以“可見”或“未見”進(jìn)行記錄。讓研究對象咀嚼一塊經(jīng)過預(yù)熱的石蠟（約2 g），用塑料吸管收集約1 ml唾液，用探針在上下前牙收集菌斑約30 mg。

1.3.2 念珠菌檢測 將唾液樣本和菌斑樣本分別接種在沙氏培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基中含有氯霉素和慶大霉素抑制雜菌生長，37℃溫浴4 d，用放大鏡觀察并計數(shù)菌落。為避免人為計數(shù)誤差，菌落計數(shù)由兩個人分別計數(shù)，取平均數(shù)。菌落評分標(biāo)準(zhǔn)[7]：0分：未觀察到菌落生長；1 分：1～20 菌落形成單位（cfu）（103cfu/ml）；2 分：21～50 cfu（104cfu/ml）；3 分：＞50 cfu（＞105cfu/ml）。失訪病例菌落評分記為3分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以例和率的形式表示，采用χ2檢驗；計量資料以±s表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組服藥依從性比較 由于研究對象的死亡和其他不明原因，造成試驗組失訪6例，對照組失訪5例。整個試驗過程中沒有病例發(fā)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，其中對照組有2例分別在試驗第1 w和第2 w反映有胃部輕微不適，并終止繼續(xù)試驗。從研究對象記錄的服藥情況來看，都存在未服用或漏服的情況，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，表1）。

表1 兩組服藥依從性比較

2.2 兩組口腔念珠菌菌落評分比較 試驗前，兩組唾液念珠菌菌落評分無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；試驗3個月后，試驗組菌落評分高分比例由47.62%降至26.19%（P＜0.05）；而對照組試驗前后菌落評分無顯著變化（P＞0.05），但試驗后對照組菌落評分高分比例顯著高于試驗組（P＜0.05，表2）。兩組菌斑菌落評分也得到與唾液菌落評分相似的結(jié)果（表3）。

3 討論

口腔正常微生物群是經(jīng)過長期的自然選擇形成的與宿主口腔存在相互受益的微生物群。在不同個體的口腔微生態(tài)環(huán)境中，微生物群的組成種類及數(shù)量處于動態(tài)平衡狀態(tài)。口腔念珠菌也是正常口腔微生物群中的一種，一般不會引起念珠菌口炎。但隨著年齡的增長，人體免疫力降低、機(jī)體出現(xiàn)一系列衰老變化，以及長期持續(xù)或間斷刺激因素對口腔微環(huán)境的影響不斷積累，最終可能導(dǎo)致口腔正常微生物群的動態(tài)平衡狀態(tài)被打破，口腔念珠菌所占比例增高，引發(fā)患者出現(xiàn)口腔念珠菌口炎的風(fēng)險，有研究提示，應(yīng)用口腔益生菌可以顯著降低老年人口腔念珠菌感染風(fēng)險[8]。而國內(nèi)對于應(yīng)用益生菌防治老年人口腔念珠菌感染鮮有研究。

表2 兩組唾液念珠菌菌落評分比較[n(%）]

表3 兩組菌斑念珠菌菌落評分比較[n(%)]

本研究結(jié)果顯示，試驗組規(guī)律的含服口腔益生菌含片，可以顯著降低受試者試驗前后口腔念珠菌菌落數(shù)，與對照組服用安慰劑相比具有統(tǒng)計學(xué)差異，揭示含服益生菌含片可能降低老年人口腔念珠菌感染風(fēng)險。本試驗所采用的菌株（DSM17938）來源于人類，在研究過程中，除了有兩例報告輕微的胃部不適以外，未沒有發(fā)現(xiàn)受試者產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，說明此菌株可以安全應(yīng)用在老年群體中。

關(guān)于益生菌對口腔念珠菌的抑制作用的機(jī)制，有研究證明是因為羅伊乳桿菌通過產(chǎn)生羅氏菌素抑制念珠菌的生長；也有研究發(fā)現(xiàn)，可能是通過調(diào)節(jié)全身免疫系統(tǒng)和增加IgA的分泌而加強(qiáng)口腔黏膜屏障功能[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，益生菌對念珠菌高攜帶量的個體的控制效果更好，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

本研究對益生菌制劑的用量沒有做深入的探討，且樣本量小、隨訪時間不長，試驗結(jié)果還需要更大樣本量和多中心研究結(jié)果加以證實。

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