滋陰補陽中藥序貫對PCOS患者卵泡液SCF的影響及其與卵細胞質量相關性的研究

趙 娟，談 勇，鄒奕潔

（江蘇省中醫院，江蘇南京210000）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是一種好發于育齡期女性常見的生殖功能障礙與糖代謝異常并存的內分泌紊亂綜合征，以持續性無排卵、雄激素過多和胰島素抵抗為重要特征，發病率約為6%～15%。筆者前期研究提示干細胞因子（SCF）與PCOS的卵巢多囊樣變、持續無排卵密切相關。本研究觀察滋陰補陽中藥序貫對PCOS患者卵泡液SCF的影響及其與卵細胞質量的相關性，旨在探討滋陰補陽中藥序貫對提高PCOS妊娠率的可能作用機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

1.1.1 研究對象 40例病例來源于2012年2月-2013年2月就診于江蘇省中醫院生殖醫學科門診接受IVF治療的PCOS患者，隨機分為兩組，每組20例。兩組患者一般情況、年齡、不孕年限、不孕類型及血基礎內分泌水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。結果見表1、表2。

表1 兩組患者一般情況比較 （±s）

表1 兩組患者一般情況比較 （±s）

組別 例數 年齡（歲）不孕年限（年）不孕類型（原發性）不孕類型（繼發性）對照組 2 0 2 9.5 7±2.8 3.2 4±2.1 9 1 1治療組 2 0 2 9.9 5±2.6 2.8 5±1.1 1 1 9 P 0.7 2 4 0.4 6 9 0.5 2 7

表2 兩組患者血基礎內分泌激素水平比較 （±s）

表2 兩組患者血基礎內分泌激素水平比較 （±s）

組別例數T（n g/d L）E 2（n g/L）L H（m I U/m L）F S H（m I U/m L）對照組 2 0 4 6.5 8±1 5.4 5 0.7 7±2 2.9 7 6.1 4±3.2 2 6.4 9±1.4 2治療組 2 0 4 1.5 4±1 2.6 2 6 5.4±2 5.2 8 4.6 9±3.2 2 7.9 4±1.6 2 P 0.5 8 1 0.7 8 1 0.2 9 5 0.5 0 8

1.1.2 診斷標準 ①PCOS診斷標準：參照2011年7月中華人民共和國衛生行業標準：PCOS診斷標準［1］。②不孕癥診斷標準：參照全國醫藥院校教材《婦產科學》［2］：凡婚后有正常性生活未避孕，同居一年未受孕者稱不孕癥。從未妊娠者稱原發性不孕；曾有過妊娠而后未避孕連續1年未孕者稱繼發性不孕。③體外受精-胚胎移植（IVF-ET）適應癥及禁忌癥：參照《衛生部關于修訂人類輔助生殖技術與人類精子庫相關技術規范、基本標準和倫理原則的通知》（衛科教發［2003］176號）。

1.1.3 病例選擇標準 納入標準：①年齡25～35歲；②符合PCOS診斷標準；③符合不孕癥診斷標準；④男方精液常規正常；⑤擬行短效長方案超促排卵者。排除標準：①排除甲狀腺功能異常、高催乳素血癥、遲發型先天性腎上腺皮質增生、柯興氏綜合征、低促性腺激素低性腺激素閉經、卵巢或腎上腺分泌雄激素腫瘤等疾病；②子宮及附件有器質性病變者；③合并有心、肝、腎、腦等嚴重疾病患者；④無法進行療效判定、安全性判斷者。

1.2 治療方法

治療組給予滋陰補陽中藥序貫聯合西藥治療，對照組給予西藥治療。

1.2.1 試驗藥物 中藥：滋陰補陽中藥序貫，藥材由江蘇省中醫院藥劑科提供。滋陰方藥物組成：當歸 10 g，白芍 12 g，熟地黃 15 g，山茱萸 12 g，菟絲子10 g，紫河車（先煎）10 g。補陽方藥物組成：川斷 15 g，巴戟天 12 g，山藥 10 g，淫羊藿 10 g，補骨脂12 g。控制性超促排卵西藥：達必佳（GnRHa，德國輝凌公司）；注射用人絨毛膜促性腺激素（HCG，麗珠集團珠制藥廠）；果納芬（r-FSH，瑞士Serono公司）；注射用尿促性素（HMG，麗珠制藥）。

1.2.2 常規控制性超促排卵（COH）方案 采用短效長方案超促排卵方案。患者于ART周期前1個月經周期的第4天開始口服短效避孕藥預處理（媽富隆或者達英-35），1片/d，連續服用 21 d，于月經周期第21天開始皮下注射達必佳0.05～0.1 mg/d，直至HCG日；ART周期月經第3天空腹檢測血清E2、LH水平，同時B超監測子宮內膜及雙側卵巢竇卵泡情況，若 E2＜50 ng/L、LH＜5 mIU/mL、子宮內膜厚度＜5 mm、雙側卵巢卵泡直徑均＜5 mm表示達到降調節標準，開始皮下注射r-FSH 150～225 IU/d，于月經周期第8天開始陰道B超監測卵泡發育。超促排卵期間密切監測血清E2、LH、P水平、卵泡大小變化，根據患者卵巢反應酌情調整用藥，給予適量r-FSH、HMG；陰道B超連續監測卵泡發育情況；當雙側卵巢有2個直徑在17 mm以上卵泡時停藥，當晚20：00肌肉注射HCG 5 000～10 000 IU。注射HCG 36 h后在行陰道超聲引導下取卵。選取優質胚胎2枚行宮腔內胚胎移植（ET）。取卵當天予足量黃體酮和（或）HCG黃體支持治療。ET后14 d行血β-HCG檢測，陽性者診斷為生化妊娠；ET后35 d陰道B超提示宮腔內孕囊及原始心管搏動者為臨床妊娠。治療組行COH同時聯合滋陰補陽中藥序貫，于ART周期第5天起口服滋陰方，日1劑，取卵后改服補陽方，日1劑，直至月經來潮或妊娠。采用湯劑劑型，每日1劑，取頭煎、二煎。先用300 mL水浸泡藥 0.5 h，煮沸，20 min后，取汁 200 mL，再加水200 mL，煎煮 20 min，取汁 150 mL，兩煎和勻，早晚分服。對照組行COH。

1.2.3 取卵、體外受精、培養 HCG注射36 h后行陰道超聲引導取卵；將卵細胞按3～4個/孔，放入培養皿中，置于5%CO2、37℃培養箱中培養；采用梯度法處理精液；取卵后4～6 h加入處理后的精子行常規體外受精；受精后18～22 h，觀察受精情況；受精卵體外培養48～72 h。

1.3 標本采集與測定

1.3.1 血清激素測定 本研究中所有患者均于ART前1個月經周期第3天檢測血基礎內分泌水平，包括 T、LH、FSH、E2值；HCG 注射日測血E2、LH、P水平。測定均取空腹肘靜脈血。

1.3.2 卵泡液SCF測定 取卵日在陰道B超引導下取卵，留取第一管直徑≥18 mm、成熟的、清亮、無血染的卵泡液，常溫下3 000 r/min離心10 min后取上清液，-20℃冰箱保存后酶聯免疫分析法（ELISA，Mekivh公司產品）測定卵泡液SCF水平。

1.4 統計學方法

數據資料采用SPSS15.0統計學軟件包進行處理，計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者HCG日E2、LH、P比較

兩組患者HCG日血LH、E2、P水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。結果見表3。

表3 兩組患者 HCG 日 E2、LH、P 比較 （±s）

表3 兩組患者 HCG 日 E2、LH、P 比較 （±s）

組別例數E 2（n g/L）L H(m I U/m L)P（n g/m L）對照組 2 0 2 7 5 2 6±1 0 3 3 6 1.8 1±1.0 3 2.0 4±0.7 7治療組 2 0 2 8 2 6 7±1 3 6 6 8 1.8 0±1.0 4 2.2 1±0.7 5 P 2 0 0.5 0 9 0.9 8 7 0.8 3 2

2.2 取卵日卵泡液內SCF水平的比較

治療組取卵日卵泡液中SCF水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結果見表4。

表4 取卵日卵泡液內SCF水平的比較 （±s）

表4 取卵日卵泡液內SCF水平的比較 （±s）

組別 例數 S C F（p g/m L）對照組 2 0 4 9 7.0 3±2 1.3 1治療組 2 0 5 2 8.6 9±2 7.2 9 P 0.0 0 8

2.3 兩組患者獲卵數、受精率、卵裂率、優質胚胎率、妊娠率比較

治療組受精率、優質胚胎率明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），兩組患者取卵數、卵裂率、妊娠率差異均無統計學意義（P＞0.05）。結果見表5。

表5 兩組患者獲卵數、受精率、卵裂率、優質胚胎率、妊娠率比較 （±s）

表5 兩組患者獲卵數、受精率、卵裂率、優質胚胎率、妊娠率比較 （±s）

組別 例數 取卵數 受精率 卵裂率 優質胚胎率 妊娠率對照組 2 0 7.8 9±2.3 6 6 0.8 6 7 2 5 3 3 5治療組 2 0 8.3 5±2.5 1 7 2.5 9 8 1 6 4 4 0 P＞0.0 5 ＜0.0 5 ＞0.0 5 ＜0.0 5 ＞0.0 5

2.4 妊娠組和非妊娠組卵泡液內SCF水平與妊娠結局的關系

妊娠組卵泡液SCF水平高于未妊娠組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結果見表6。

表6 妊娠組和非妊娠組卵泡液SCF水平與妊娠結局的關系 （±s）

表6 妊娠組和非妊娠組卵泡液SCF水平與妊娠結局的關系 （±s）

組別 例數 S C F（p g/m L）妊娠組 1 5 5 3 6.6 6±2 2.4 3非妊娠組 2 5 4 9 9.2 3±2 0.1 2

3 討論

本研究顯示治療組HCG日血清LH、E2、P水平與對照組比較差異均無統計學意義，但是治療組E2數值高于對照組，提示SCF可能促進顆粒細胞-卵泡膜細胞的增殖和分化，增加甾體激素的合成分泌。因此，SCF可能參與了優勢卵泡的選擇，進而調控卵泡發育。我們推測滋陰補陽中藥序貫可能激活體內內分泌免疫系統，SCF可能是其效應的一種中介物質。滋陰補陽中藥序貫改善卵巢局部微環境，參與了SCF的誘導，刺激了卵泡甾體激素產生，提高優勢卵泡選擇。有大量研究表明在妊娠過程中SCF也起到重要作用。在體外培養過程中，發現SCF可保護精細胞免遭調亡，SCF通過與c-kit相互作用的方式對胚細胞的移行、黏附、增生及存活產生保護作用［3］。有學者研究發現，子宮內膜細胞、間質細胞及滋養層細胞均可分泌SCF，在胚胎移植過程中SCF以自分泌/旁分泌的方式促使滋養層細胞增殖，為胚胎著床提供有利條件［4］。在蛻膜和胎盤組織均可測得SCF及c-kit受體，在早孕的蛻膜中SCF mRNA的表達高于分泌期內膜的3倍，在胎盤中的表達高于蛻膜 4～8倍［5］。本研究結果顯示妊娠組卵泡液中SCF濃度均顯著高于未妊娠組，進一步提示SCF可能參與了妊娠過程。

［1］崔琳琳，陳子江.多囊卵巢綜合征診斷標準和診療指南介紹［J］.國際生殖健康計劃生育雜志，2011（5）：405-408.

［2］樂杰.婦產科學［M］.7版.北京：人民衛生出版社，2008：351.

［3］Yan W，Suominen J，Toppari J.Stem cell factor protects germ cells from apoptosis in vitro［J］.J Cell Sci，2000（113）：161-168.

［4］Mitsunari M，Harada T，Tanikawa M，et al.The potential role of stem cell factor and its receptor c-kit in the mouse blastocyst implantation［J］.Mol HumReprod，1999，5（9）：874-879.

［5］Kauma S，Huff T，Krystal G，et al.The expression of stem cell factor and its receptor c-kit in human endometrium and placental tissues during pregnancy［J］.Clin Endocrinol Metab，1996，81（3）：1 261-1 266.