葛根通脈飲調控BIP蛋白表達抗動脈粥樣硬化的作用

韓芬

AS是一種臨床常見的心血管疾病, 現已將AS產生及發展過程的關鍵環節公認為血管平滑肌細胞增生遷移、脂質代謝紊亂以及血管內皮細胞損傷。相關研究表明, 葛根中的葛根素對心肌血液循環可以起到促進作用, 從而對可以抑制血栓形成, 發揮對動脈血管內皮細胞的保護作用, 還可以對產生及釋放炎性介質起到抑制、改善微循環等保護心臟的作用［1］。本研究對葛根通脈飲對AS的作用機制做進一步研究分析, 對心血管疾病采用此藥進行防治提供實驗依據, 并將結果做如下匯報。

1 材料與方法

1.1 材料 日本大耳白兔28只, 普通級, 雄性, 兔齡5個月,體質量2.5～3.0 kg。由山東百德生物科技有限公司提供, 動物合格證號YXQG(魯)2011-0002。

1.2 藥品及試劑 葛根通脈飲基本組方：葛根30 g, 太子參12 g, 山楂15 g, 淫羊藿、川芎、當歸尾、赤芍、甘草各6 g。膽固醇(成都普斯生物科技股份有限公司, 批號：57885)、蛋氨酸(河北冀榮氨基酸公司, 批號：990325)；蘇木素、伊紅由廣州深達生物制品技術有限公司提供。

1.3 儀器 PathVision病理成像系統(美國Faxitron公司),DYCZ-24F垂直電泳儀(背景中西遠大科技有限公司),HM560MV冷凍切片機, 貝克曼AU5800全自動生化分析儀,PYX-DH50A恒溫箱(上海璽恒實業有限公司), HOTE777X轉膜儀(中西遠大科技有限公司), ZF-Ⅱ紫外線成像儀(上海嘉鵬科技有限公司)BDI-100倒置生物顯微鏡(上海研潤光機科技有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 分組及制備模型 將28只白兔隨機分為正常組、高脂組、葛高組以及葛低組, 每組7只。正常組以普通飼料飼養；高脂組將0.02%蛋氨酸及1%膽固醇加入普通飼料中喂養；葛高組及葛低組在喂養高膽固醇飼料基礎上分別加喂10 g/(kg·d)及5 g/(kg·d)的葛根通脈飲。

1.4.2 血脂檢測及病理組織檢驗 抽取空腹血并分離血清,利用全自動生化分析儀檢測Hcy含量；取上段兔胸主動脈后實施常規的脫水、包埋、浸臘、染色等步驟, 并提取總蛋白質,檢測其蛋白濃度。

1.5 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 四組Hcy水平及BIP 蛋白表達情況 高脂組的Hcy水平和BIP蛋白表達均高于正常組, 差異有統計學意義(P＜0.05)；高脂組BIP蛋白表達為(1.18±0.15)β-actin,Hcy水平為(21.37±0.14)μmol/L, 高于葛高組的(0.59±0.13)β-actin、(11.03±0.13)μmol/L 和葛低組的 (0.62±0.14)β-actin、(13.23±0.10)μmol/L，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 四組Hcy及BIP水平情況比較( ±s)

表1 四組Hcy及BIP水平情況比較( ±s)

注：與高脂組比較, aP＜0.05

組別 只數 BIP蛋白表達(β-actin) Hcy水平(μmol/L)正常組 7 0.22±0.10a 5.32±0.11a高脂組 7 1.18±0.15 21.37±0.14葛低組 7 0.62±0.14a 13.23±0.10a葛高組 7 0.59±0.13a 11.03±0.13a

2.2 病理組織學檢查結果 正常組內皮細胞完整, 動脈內膜光滑；高脂組動脈內膜出現增厚且粗糙, 內膜下聚集大量的脂質和泡沫細胞, 存在AS斑塊, 內皮細胞受損, 可見增殖并向膜遷移的正平滑肌細胞(VSMC)；葛低組與葛高組的內皮細胞個別受損, 泡沫細胞量少, 且不存在明顯的AS斑塊。

3 討論

蛋氨酸代謝所產生的中間產物就是Hcy, 其在血漿濃度過高而產生的高Hcy血癥, 對AS是一個獨立的危險因素。有相關研究表明, 脂質過氧化的出現也與Hcy有關, 能夠使血管內皮細胞受到損傷, 對增殖血管平滑肌細胞起到促進作用, 從而使血小板進一步增加了其聚集性和粘附性, 進而引起AS［2］。同時內質網的穩定會因為高Hcy血癥而被破壞,使蛋白質折疊出現錯誤或障礙, 內質網應激(ERS)由此觸發,導致脂質出現異常沉積, 最終引發AS［3］。BIP是應激蛋白的一種, 在早期ERS時, 其表達量就迅速增加。并且在蛋白質的糖基化折疊、修飾以及轉運過程中, 其都會作為分子伴侶而參與到全過程中, 對變性蛋白的重新折疊并恢復正確構象起到幫助作用, 對ERS起到緩解作用［4］。同時能夠降解或轉移無法恢復的蛋白質, 避免進一步損害細胞。而當ERS時間過程, 內質網就會失去其代償功能, 就會使BIP表達出現下降, 并且細胞將相關于內質網的凋亡程序進行起到, 造成細胞死亡［5］。本次研究中以加入了蛋氨酸與膽固醇的高脂飼料飼養兔子, 持續9周后, 高脂組兔子的Hcy水平升高, 并且其主動脈能夠在鏡下觀察到AS典型的病理變化, 均提示AS模型成功建立。并且與正常組的BIP蛋白表達量相比, 高脂組增加更為顯著, 表明AS的發病機制中, ERS發揮著重要作用。

葛根中一個重要的有效成分就是葛根素, 在相關研究中發現血管內皮細胞在因為Hcy而出現損傷時, 葛根素能夠對其起到保護作用［6］。而淫羊藿能夠對由Hcy誘導而出現VSMC過度增殖起到拮抗作用, 并對其死亡起到促進作用,同時能夠發揮降血脂、對血管內皮細胞進行保護的作用［7］。本研究所用的葛根通脈飲是中藥復合制劑, 其主要為葛根及淫羊藿。組方中的君藥為葛根, 其具有升陽解痙、通利血脈的功效；臣藥為川芎、山楂以及赤芍, 具有舒筋通絡以及活血化瘀的功效；佐藥為可以起到溫腎助陽功效的淫羊藿與太子參；甘草能夠對諸藥起到調和的作用, 具有補脾益氣、清熱解毒的功效［8］。從本次的研究結果中發現, 高葛組與低葛組的Hcy水平與高脂組相比明顯低。因此葛根通脈飲對AS的治療作用得到證實。且其BIP蛋白表達量與高脂組相比顯著低, 表明葛根通脈飲能夠對兔主動脈組織由Hcy而引發的ERS起到抑制作用, 進而到達抗AS的作用, 葛根通脈飲抗AS的作用靶點之一可能是BIP蛋白表達。

［1］ 呼海濤, 徐學琴, 沈曉君.葛根通脈飲調控BIP蛋白表達抗動脈粥樣硬化的作用.中國實驗方劑學雜志, 2015, 21(1):150-153.

［2］ 趙君玫, 張娜, 王建新, 等.葛根通脈飲對兔動脈粥樣硬化模型內質網應激信號轉導通路相關分子表達的調控作用.中國全科醫學, 2014(27):3269-3273.

［3］ 潘海敏.葛根素對動脈粥樣硬化兔的作用機制研究.環球中醫藥, 2015(s1):56-57.

［4］ 魏述永.葛根素心血管保護作用及其機制研究進展.中國中藥雜志, 2015, 40(12):2278-2284.

［5］ 程遠渡, 易有金, 易傳祝, 等.植物甾醇酯和葛根素聯合使用對高脂血癥小鼠降血脂作用研究.中國油脂, 2015, 40(4):64-68.

［6］ 陳敬博.葛蘭心寧軟膠囊治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病不穩定型心絞痛臨床觀察.中醫學報, 2015(4):598-599.

［7］ 梁藝.葛根素對急性冠狀動脈綜合征患者炎性因子的影響.西南國防醫藥, 2016, 26(10):1196-1197.

［8］ 陸麗萍, 陳素珍.葛根注射液對腦動脈硬化癥患者血液流變學的影響.上海中醫藥雜志, 2015(1):44-46.