中華鱉虹彩病毒感染的臨床病理學(xué)觀察

陳銘，潘延樂(lè)*，伍洋，張璐璐，胡積霞，徐華，彭燕

（1.信陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 信陽(yáng) 464000；2.宜賓市翠屏區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心, 四川 宜賓 644000）

中華鱉(Trionyx)隸屬爬行綱、龜鱉目（Testudinata）、鱉科（Trionychidae）、鱉屬（Trionyx），是一種珍貴的、經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的水生動(dòng)物。中華鱉在野外廣泛分布于除寧夏、新疆、青海和西藏外的我國(guó)大部分地區(qū)，尤以湖南、湖北、江西、安徽、江蘇等省產(chǎn)量較高，另外在日本、朝鮮、越南等地也有分布。

近幾年來(lái)，特種水產(chǎn)養(yǎng)殖尤其是養(yǎng)鱉業(yè)迅猛發(fā)展，高密度人工養(yǎng)殖中鱉病頻頻發(fā)生，在全國(guó)許多省份暴發(fā)流行，養(yǎng)鱉業(yè)遭受慘重的經(jīng)濟(jì)損失。每年初春和夏末，中華鱉有2次發(fā)病高峰期，死亡率極高，經(jīng)濟(jì)損失慘重[1]。張奇亞，李正秋從患有典型病癥（中華鱉紅脖子病）、瀕于死亡的病鱉中，首次分離出了1種病毒，即虹彩病毒（Iridovirus,TSV）。虹彩病毒病的危害較大，且在全世界水生動(dòng)物中廣泛流行。因此，國(guó)內(nèi)外學(xué)者也進(jìn)行了廣泛而深入的研究，主要集中在以下幾個(gè)方面：魚(yú)和蛙虹彩病毒的比較研究，虹彩病毒基因組及基因的測(cè)序研究，虹彩病毒基因與細(xì)胞基因的同源性研究。但對(duì)于中華鱉感染虹彩病毒的病理學(xué)研究較少。且近日在德陽(yáng)某養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)現(xiàn)大量中華鱉感染虹彩病毒的狀況。為了解病毒對(duì)中華鱉的致病作用及其致病機(jī)理，總結(jié)特征性病變?yōu)榕R床治療作指導(dǎo)，本實(shí)驗(yàn)擬用疑似虹彩病毒感染的病鱉進(jìn)行解剖學(xué)和組織病理學(xué)觀察，總結(jié)其病理變化，為研究其致病機(jī)理等后續(xù)研究提供依據(jù)，奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物材料

德陽(yáng)某中華鱉養(yǎng)殖場(chǎng)提供的中華鱉，經(jīng)PCR診斷為虹彩病毒感染。

1.1.2 主要儀器設(shè)備

101-2 型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海)；FEICA RM2315切片機(jī)(德國(guó))；HH數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇）；OLYMPS CH2OBIMF200光學(xué)顯微鏡（日本）

1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑

10%福爾馬林、各濃度梯度酒精、二甲苯、石蠟、蘇木紫、伊紅、鹽酸酒精

1.2 方法

觀察病鱉外部病理變化（出血點(diǎn)及潰瘍?cè)畹龋瑢⒉△M迅速處死后隨即解剖、染色，進(jìn)行病理觀察。

2 結(jié)果

2.1 剖解變化

病鱉背甲或腹甲上有小出血點(diǎn)，各部位均有出血性潰瘍，隨病情加重，潰瘍由小變大，數(shù)量增多，并向體內(nèi)發(fā)展，甚至出現(xiàn)穿孔等癥狀（見(jiàn)圖1）。經(jīng)解剖觀察發(fā)現(xiàn)：病鱉的肝，脾，腸等充血，在肝的被膜下有大小形狀不一出血區(qū)；肝、脾、膽明顯腫大（見(jiàn)圖2）。腫大充血的肝、脾、腎等組織失去彈性，易碎。腸腔中空無(wú)食物，亦無(wú)黃色粘液。

2.3 病理組織學(xué)觀察

肝臟：病鱉肝細(xì)胞廣泛性顆粒變性和空泡變性(見(jiàn)圖3)；細(xì)胞腫脹，使肝血竇受壓萎縮消失；局部出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞；在部分肝小葉內(nèi)大量增多；病變嚴(yán)重區(qū)域肝細(xì)胞核溶解，細(xì)胞崩解形成局灶性壞死灶。肝小葉靜脈淤血及大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（見(jiàn)圖4）。

脾臟：病鱉脾內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著減少，白髓萎縮甚至消失成為壞死灶；紅髓內(nèi)有淤血，并有大量巨噬細(xì)胞增生，嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)有大量含鐵血黃素沉積（見(jiàn)圖6）；脾被膜出血（見(jiàn)圖5），被膜水腫增寬。

腎臟：腎小管上皮細(xì)胞腫脹，可見(jiàn)廣泛性顆粒變性與空泡變性，胞漿可見(jiàn)透明滴狀變（見(jiàn)圖7），滴狀物大小不等、半透明、紅染，嚴(yán)重時(shí)充滿(mǎn)胞漿；有紅染漿液滲出；局灶性腎小管上皮細(xì)胞壞死解體（見(jiàn)圖8）；腎小球變性萎縮；組織間可見(jiàn)紅細(xì)胞滲出和大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。

心臟：主要表現(xiàn)為心肌纖維腫脹，橫紋模糊消失，出現(xiàn)顆粒變性和空泡變性；局部肌纖維扭曲斷裂或溶解消失（見(jiàn)圖9）；纖維間有滲出的紅細(xì)胞和紅染漿液，可見(jiàn)有微血栓形成（見(jiàn)圖10）。

腸道：腸組織切片中，粘膜下層肌纖維腫大，斷裂扭曲，細(xì)胞腫脹變性，結(jié)構(gòu)混亂，模糊不清（見(jiàn)圖11）。

肺臟：上皮細(xì)胞核碎裂，細(xì)胞腫脹或壞死萎縮；局部肺泡腔萎縮消失；肺泡隔淤血，伴有淋巴細(xì)胞增生（見(jiàn)圖12）；并有紅色血栓與含鐵血黃素沉積（見(jiàn)圖13）。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)經(jīng)與正常中華鱉組織進(jìn)行比較，病鱉的肝、脾、腎、心、腸、肺及體表等組織均不同程度的受到損害。其中肝臟，脾臟和腎臟的病變較嚴(yán)重。這說(shuō)明肝，脾及腎可能是中華鱉虹彩病毒（TSV）主要靶器官。國(guó)內(nèi)外有關(guān)虹彩病毒感染中華鱉及兩棲類(lèi)魚(yú)類(lèi)的病理學(xué)研究，多認(rèn)為肝，脾嚴(yán)重變形壞死及皮膚肌肉的潰爛為病毒感染的主要標(biāo)志[2]。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腎臟亦有嚴(yán)重顆粒變性、空泡變性直至細(xì)胞萎縮壞死，腎小球上皮細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)透明滴變現(xiàn)象，心腔、肺臟內(nèi)出現(xiàn)紅色血栓。因此，可認(rèn)為表皮肌肉潰瘍，肝、脾和腎的嚴(yán)重病變，腎小球上皮細(xì)胞的透明滴變，心腔肺臟形成微血栓，為虹彩病毒感染的主要病理學(xué)變化。

中華鱉虹彩病毒可能首先入侵肝和脾內(nèi)，在其細(xì)胞中大量繁殖，擴(kuò)增出的病毒經(jīng)過(guò)血液循環(huán)，再轉(zhuǎn)移到其他器官中，造成多個(gè)器官的損害。各個(gè)器官多出現(xiàn)出血與水腫，則由于病毒入侵，在宿主細(xì)胞里增殖，破壞了宿主細(xì)胞，細(xì)胞出現(xiàn)腫大和壞死。侵入毛細(xì)血管，則毛細(xì)血管細(xì)胞腫大，血管壁受損。血管壁的損傷進(jìn)一步激活凝血系統(tǒng)，出現(xiàn)彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC）。血管內(nèi)堆積大量微血栓，血栓的頭部、體部進(jìn)一步增大并順血流方向延伸，當(dāng)血管腔大部分或完全被阻塞后，則其下游血流近于停止，血液發(fā)生凝固，形成暗紅色的血凝塊，即紅色血栓。在凝血因子大量消耗的同時(shí)，出血?jiǎng)t會(huì)更加普遍和嚴(yán)重，循環(huán)血量不足，全身血液循環(huán)功能下降，各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不能運(yùn)進(jìn)組織，組織代謝產(chǎn)生的各種代謝產(chǎn)物也不能運(yùn)出，使正常代謝出現(xiàn)障礙，器官出現(xiàn)梗死或壞死，喪失功能，最終病鱉急性死亡。而脾的感染，一方面使得本身的造血功能下降，不能有效補(bǔ)充循環(huán)血量的流失；另一方面，作為重要的免疫器官，不能對(duì)入侵的病毒迅速產(chǎn)生有效的免疫反應(yīng)，且阻礙了體液免疫信息傳遞，使得病鱉免疫力下降甚至喪失。所以被感染病鱉，很有可能同時(shí)被其它微生物混合感染，且造成在水體中的大量流行，出現(xiàn)中華鱉的大規(guī)模死亡。

虹彩病毒在上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)可形成嗜酸性包涵體，本實(shí)驗(yàn)中在腎臟可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞漿內(nèi)嗜酸性滴狀物，其是否為包涵體或是由于腎小球炎癥引起的透明滴變有待進(jìn)一步研究。

[1]錢(qián)明明,宋杰,物斌,王海靜,趙寶華.中華鱉常見(jiàn)疾病的診斷及其綜合防治[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2009,30(4):103-107.

[2]Youhua Huang,Xiaohong Huang,Hong Liu. Complete sequence determination of a novel reptile iridovirus isolated from soft-shelled turtle and evolutionary analysis of Iridoviridae [J]. BMC Genomics,2009,10:224.