銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉粗黃酮的抗氧化性研究

劉富康，李晞晴，楊 璞，曲映紅

（上海海洋大學(xué)，食品科學(xué)與工程國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306）

銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉含有多種生物活性成分，其中的黃酮類(lèi)化合物具有抗氧化、防止衰老、抑菌抗病毒等功效，且安全可靠，食用健康，可用于加工藥品和保健食品[1-3]。從植物中提取黃酮通常使用的溶劑是水或乙醇水溶液，輔以微波、超聲波等方法能提高黃酮的提取效率[4,5]。有專(zhuān)家分析，黃酮類(lèi)化合物為銀杏葉中重要的生理活性物質(zhì)，具有防治心腦血管疾病、老年癡呆癥、抗氧化等諸多功效[6]。王立等[7]也從烏飯樹(shù)樹(shù)葉中提取出了黃酮類(lèi)色素，并對(duì)這些色素進(jìn)行了分離純化，分析了它們清除活性氧自由基的能力。王芳等[8]通過(guò)對(duì)桑葉中的黃酮類(lèi)化合物的測(cè)定得出，桑葉中的黃酮類(lèi)化合物主要包括蕓香苷、槲皮素、異槲皮素、二氫山萘素等，含量約占干葉重的1.0%～3.0%，是所有植物莖葉中含量較高的一種。

本文以乙醇水溶液浸提銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉中的粗黃酮，并考察其對(duì)DPPH自由基和超氧陰離子自由基的清除能力，旨在為開(kāi)發(fā)綠色安全的天然抗氧化劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗(yàn)材料：干燥的銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉，均購(gòu)于上海。

試劑：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、乙醇、Tris、鹽酸、鄰苯三酚等，所用試劑均為分析純。

儀器：LLJ-306Z粉碎機(jī)，江門(mén)市貝爾斯頓電器有限公司；AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ5200E超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；752N紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 粗黃酮的提取

分別將已干燥的銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉粉碎，過(guò)60目篩。精確稱(chēng)取10.00g碎葉粉末，料液比分別為1:30、1:25、1:20、1:15、1:10。在上述料液比條件下，用 70%乙醇于70℃超聲浸提120min，5000r/min離心5min，上清液即為銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉醇提粗黃酮溶液[9,10]。

1.2.2 DPPH自由基清除率的測(cè)定

將提取得到的粗黃酮按照勾明玥和方敏[11,12]的實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定樣品和空白反應(yīng)混合物在517nm處的吸光度，根據(jù)下列公式計(jì)算清除率，見(jiàn)公式（1）。

式中，K1為樣品對(duì)DPPH自由基的清除率，A1為DPPH溶液加樣品液后的吸光度，A2為樣品液在測(cè)定波長(zhǎng)的吸光度，A0為DPPH溶液不加樣品液的吸光度。

1.2.3 超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定

清除超氧陰離子自由基能力的測(cè)定采用鄰苯三酚自氧化法[13]。取50mmol/L的Tris-HCl（pH 8.2）緩沖液4.6mL于試管中，25℃水浴中保溫15min，加入粗黃酮溶液1mL，10mmol/L鄰苯三酚溶液0.4mL，混勻于25℃恒溫水浴中反應(yīng)4min，立即加入8mol/L的鹽酸1.0mL終止反應(yīng)，以Tris-HCl緩沖液調(diào)零點(diǎn)，325nm下測(cè)其吸光值，即A1'?？瞻讓?duì)照組（A0'）用乙醇1mL代替樣品溶液，樣品對(duì)照組（A2'）用乙醇4mL代替鄰苯三酚溶液，見(jiàn)公式（2）。

式中，K2為樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除率，A1'為超氧陰離子溶液加樣品液后的吸光度，A2'為樣品液在測(cè)定波長(zhǎng)的吸光度，A0'為超氧陰離子溶液不加樣品液的吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉粗黃酮對(duì)DPPH自由基的清除率

圖1 粗黃酮對(duì)DPPH自由基的清除率Fig.1 The scavenging rate of crude flavonoids to DPPH radicals

從圖1可以看出，三種植物葉的醇提粗黃酮對(duì)DPPH自由基的清除率隨料液比的提高而增大，大小順序?yàn)闉躏垬?shù)葉＞桑葉＞銀杏葉。選定的5種料液比條件下，烏飯樹(shù)葉醇提粗黃酮的DPPH自由基清除率都在80%以上，顯示出優(yōu)良的抗氧化活性。隨料液比的增加，桑葉醇提粗黃酮的DPPH自由基清除率快速上升，當(dāng)料液比達(dá)到1:10時(shí)，清除率已上升至近80%。銀杏葉醇提粗黃酮對(duì)DPPH自由基的清除率隨料液比的增加上升緩慢，均為50%以下。

2.2 銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉粗黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除率

圖2 粗黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除率Fig.2 The scavenging rate of crude flavonoids to superoxide anion radicals

圖2顯示了粗黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除率，由圖2可以看出，3種植物葉的醇提粗黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除率隨料液比的提高而增大，大小順序?yàn)殂y杏葉＞桑葉＞烏飯樹(shù)葉。當(dāng)料液比升至1:20時(shí)，銀杏葉醇提粗黃酮的超氧陰離子自由基清除率達(dá)80%以上；料液比繼續(xù)升高至1:15和1:10時(shí)，桑葉和烏飯樹(shù)葉醇提粗黃酮的超氧陰離子自由基清除率也上升至70%以上。

綜上可見(jiàn)，銀杏葉醇提粗黃酮的超氧陰離子自由基清除率高于DPPH自由基清除率，烏飯樹(shù)葉醇提粗黃酮對(duì)DPPH自由基有較強(qiáng)的抑制作用，桑葉醇提粗黃酮對(duì)兩種自由基的清除能力相近。

3 結(jié)論

銀杏葉、烏飯樹(shù)葉和桑葉的醇提粗黃酮均有一定的DPPH自由基和超氧陰離子自由基清除能力，銀杏葉醇提粗黃酮對(duì)超氧陰離子的清除能力較強(qiáng)，而烏飯樹(shù)葉醇提粗黃酮?jiǎng)t顯示了較強(qiáng)的DPPH自由基清除能力。醇提粗黃酮中抗氧化成分的種類(lèi)、數(shù)量有待于進(jìn)一步研究。

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