microRNA-96在泌尿系三大腫瘤中的表達及對臨床診療作用的研究進展

唐 建，羅紅梅，黃 果，譚華俊，汪 翼

1microRNA概述

MicroRNAs(miRNAs)是一種內源性非編碼短RNA，長度約20-24個核苷酸。miRNAs在進化上高度保守，參與多細胞生物體基因表達的轉錄后調控。它由基因組DNA的內含子或其他非編碼區編碼。目前已在人體內發現超過700 多種miRNAs，在人類疾病發生中扮演著重要角色。Calin等[1]于2002年首次報道了microRNAs在腫瘤組織中表達異常。與正常組織相比，miRNAs在不同臨床分期或不同分化狀態的腫瘤組織中表達明顯異常，有的miRNAs表達上調，有的則表達下調。其表達水平與人類多種惡性腫瘤的發生、發展、診斷、預后相關，已成為腫瘤防治研究的熱點。

2microRNA-96概述

MiRNA-96屬于miR-183基因家族，與miRNA-183和miRNA-182共用轉錄起始位點[2]，miR-183-96-182簇位于染色體7q32。它們可能協同作用參與腫瘤細胞的生物學行為。miRNA-96形成過程如下[3]：首先miRNA-96被RNA聚合酶II轉錄，生成初級miRNA-96轉錄物(pri-miRNA-96)，然后被Drosha核糖核酸酶III酶切割以產生大約70-nt的莖環前體miRNA(pre-miRNA)，其進一步被細胞質Dicer核糖核酸酶切割以產生成熟的miRNA-96。 成熟miRNA-96被并入RNA誘導的沉默復合物(RISC)，其通過與miRNA-96的不完全堿基配對來識別靶mRNA，導致靶mRNA的翻譯抑制或不穩定[4]，進而調節細胞發育、分化、增殖、凋亡等過程。miRNA-96也可以調控多個靶基因的表達，由此形成分子調控網絡，在個體發育、正常生理以及包括腫瘤等多種疾病的病理過程中發揮重要作用[5]。隨著人們對miRNA-96的研究不斷深入，miRNA-96在腫瘤發生發展中的作用也逐漸被揭示出來。比如，研究表明miRNA-96在肝癌，前列腺癌中均呈高表達，其分別通過抑制FOXO3，RECK表達發揮著致癌作用[6-7]。miRNA-96在胰腺癌細胞中也呈高表達，可通過抑制癌基因HERG1的表達抑制胰腺癌細胞的增殖、促進細胞凋亡[8]。研究還發現，miRNA-96在一些腫瘤中表達下降，起抑制腫瘤的作用。Guo等[9]研究表明，通過RT-PCR法檢測miRNA-96在膀胱移行細胞癌組織中較正常組織表達下調，可靶向調控抑癌因子FOXO1來促進腫瘤細胞的凋亡。

3microRNA在泌尿系三大腫瘤中的表達與臨床意義

3.1膀胱癌 膀胱癌是泌尿系的常見腫瘤，其發病率呈現逐年增長趨勢。有報道，近十年間，膀胱癌的發病率已超過腎癌發病率，成為泌尿系最常見的腫瘤[10]。SiegelRL等[11]預計2017年美國約有79,030例膀胱癌新發病例，并有16,870例患者死于膀胱癌。目前尚未找到特異性的膀胱癌標記物。研究表明，miRNA-96在膀胱癌組織中呈高表達，起到致癌基因的作用。Han等[12]通過對膀胱尿路上皮癌組織深度基因測序，發現在膀胱尿路上皮癌中miRNA-96表達顯著上調。WuZ等[3]運用qRT-PCR技術檢測了60例膀胱癌組織和40例正常膀胱組織中miR-96的表達水平，發現miR-96在人膀胱癌組織中和T24細胞系中顯著升高，并且發現miRNA-96主要通過結合CDKN1AmRNA3'UTR中的特定區域，顯著降低CDKN1A蛋白的表達水平，從而促進膀胱癌的增殖、侵襲等生物學行為。近來研究表明，miRNA-96不僅在膀胱癌組織中高表達，其在尿液中也呈高表達。Yamada等[13]通過分析100例膀胱尿路上皮癌患者的尿液樣本，發現在膀胱癌患者尿液中miRNA-96表達明顯高于健康者，認為miRNA-96在尿液中的表達可以作為臨床上診斷膀胱上皮細胞癌的潛在腫瘤標記物。EissaS等[14]進一步研究發現，膀胱癌患者尿液中miR-96的表達水平不僅升高明顯(P<0.001)，而且其對于區分膀胱癌患者和非BC患者的敏感性和特異性均較高(miR-96,76.6和89.4%)。以上研究表明，檢測患者尿中的miRNA-96有望成為臨床上診斷膀胱癌的有效途徑。

3.2前列腺癌 前列腺癌是泌尿系三大腫瘤之一，在歐美國家，前列腺癌的發病率及死亡率均居前列。雖然我國的發病率低于歐美國家，但隨著人口老年化的到來，其發病率呈明顯上升趨勢。目前，前列腺癌的篩查、診斷主要通過前列腺特異性抗原(PSA)及前列腺核磁檢查，晚期前列腺癌的治療都是通過手術去勢或者藥物去勢達到阻斷雄激素的目的。近年來對前列腺癌研究越來越深入，但其發生發展的分子機制仍有待發現。近期研究表明，MicroRNA(miRNA)與前列腺癌的起始和進展有密切關系，其中miRNA-96與前列腺癌的發生發展最為密切。研究表明，在前列腺癌中miRNA-96呈高表達，可通過不同的途徑參與到前列腺癌的發生發展過程中。YuJJ等[15]以前列腺癌細胞(PC3)為研究對象，通過改變miRNA-96表達水平，發現miRNA-96與PC3細胞的增殖、分化及遷移呈正相關，并且發現miRNA-96主要是通過抑制基因FOXO1的表達影響PC3細胞上述生物學行為。TsaiYC等[16]研究表明，miRNA-96可通過下調ETV6從而促進前列腺癌的進展。miRNA-96也可以通過轉化生長因子-β(TGFβ)-SMad的介導，促進前列腺癌中的骨轉移。越來越多的證據表明，miRNA-96參與了細胞自噬過程。MaY等[17]發現miRNA-96具有雙向調控機制，當前列腺癌細胞缺氧時，會刺激miRNA-96過表達，并通過抑制MTOR刺激細胞自噬作用，而當miRNA-96過表達超過某一閾值時，則主要通過抑制ATG7(一種關鍵的自噬相關基因)來抑制自噬。此研究結果提示我們可以通過操縱miRNA-96的表達來治療前列腺癌或許是一種新的可靠的方法。WangY[18]等人研究發現，miR-96可以通過抑制兩個重要的DNA修復基因(RAD51andREV1)的表達來調節DNA修復和化學敏感性，可以作為前列腺癌潛在的化學敏感劑治劑，提高前列腺癌術后治療效果。SungGuKang等[19]發現miR-96表水平與前列腺特異性抗原(PSA)表達水平，前列腺癌Gleason評分或前列腺癌術后病理分期無相關性(P=0.367,0.157和0.962)，提示miR-96表達水平可能對前列腺臨床診斷價值有限。上述研究成果與相關前列腺癌體外實驗研究結果不同，可能與體內實驗所處的微環境不同有關，因為微環境的改變很有可能影響miR-96的功能及表達水平，導致細胞表性的發生變化，影響實驗結果。因此需要更多的體內成瘤實驗進行更深入的研究。

3.3腎癌 腎細胞癌(RenalCellCarcinoma,RCC)，簡稱腎癌，其發病率在泌尿系惡性腫瘤中呈逐漸增長趨勢。腎癌的生物學行為極為多變，至今尚未明確闡明其發生發展及轉移的機制，同時放療、化療以及激素治療對于腎癌的效果均不能讓人滿意。目前對于腎癌的治療方法主要是腎癌根治術，但局部晚期和轉移性腎細胞癌(RCC)的預后仍然很差[20]。因此，找到與腎癌侵襲性和轉移性相關的潛在分子是至關重要的，這可能為干預治療提供新的靶標。檢索國內外相關數據庫發現，miR-96與肝癌、胃癌、肺癌等腫瘤的關系研究較多，但關于miR-96與腎癌關系的研究文獻鮮有報道。只檢索到YuN等[21]發表了關于miR-96與腎癌侵襲、轉移關系的研究報告，其研究發現miR-96通過下調Ezrin表達抑制腎細胞癌侵襲，miR-96可視為腎細胞癌的潛在標記物，可能成為腎癌治療與判斷預后新靶標。鑒于目前關于miR-96與腎癌關系的研究成果較少，需要今后更多的研究來闡明miR-96對腎癌的影響。

4microRNA-96總結與展望

隨著對泌尿系腫瘤的不斷深入研究，人們認識到microRNA與泌尿系腫瘤的發生發展有著密切的關系。與正常細胞相比，腫瘤細胞某些microRNA表達的變化表現為特異的增高或降低，無論增高或降低，其變化對腫瘤的診斷和預后都有一定的意義，其差異表達可作為腫瘤早期診斷、病情監測、療效、預后評估的指標，并可作為腫瘤治療的新靶點，對新型腫瘤特異性治療藥物的開發有著重要的臨床意義。miR-96參與了泌尿系三大腫瘤的發生發展，其高表達對多種腫瘤具有潛在的治療作用，并且在泌尿系腫瘤的早期診斷、腫瘤分期分級方面也有一定的意義。然而，miR-96 及其相關通路在泌尿系腫瘤中的作用機制尚未完全明確，進一步闡明其作用機制并作為泌尿系腫瘤治療靶點的研究對其臨床應用具有重要的作用。

[1]CALINGA,DUMITRUSD,SHIMIZUM,etal.FrequentdeletionsandDownregulationofmicro-RNAgenesmiR15aandmiR16at13q14inchroniclymphocyticleu-kemia[J].ProcNatlAcadSci,2002,99(24):524-529.

[2]XUS,WITMERPD,LUMAYAGS,etal.MicroRNA(miRNA)transcriptomeofmouseretinaandidentificationofasensoryorganspecificmiRNAcluster[J].JBiolChem,2007，28(2):25053-25066.

[3]WUZ,LIUK,WANGY,etal.UpregulationofmicroRNA-96anditsoncogenicfunctionsbytargetingCDKN1Ainbladdercancer[J].CancerCellInt,2015,Nov14,15:107.

[4]FENGJ,YUJ,PANX,etal.HERG1functionsasanoncogeneinpancreaticCancerandisdownregulatedbymiR-96[J].Oncotarget,2014,5(14):5832-5844.

[5]CHOWC.OncomiRs:thediscoveryandprogressofmicroRNAsincancers[J].MolCancer，2007，6(60)：23-25.

[6]WANGTH,YEHCT,HOJY,etal.OncomiRmiR-96andmiR-182promotecellproliferationandinvasionthroughtargetingephrinA5inhepatocellularcarcinoma[J].MolCarcinog, 2016,55(4):366-375

[7]CHENRX,XIAYH,XUETC,etal.SuppressionofmicroRNA-96expressioninhibitstheinvasionofhepatocellularcarcinomacells[J].MolMedRep.2012,5:800-804.

[8]YUS,LUZ,LIUC,etal.miRNA-96suppressesKRASandfunctionsasatumorsuppressorgeneinpancreaticcancer[J].CancerRes2010,70:6015-6025.

[9]GUOY,LIUH,ZHANGH,etal.miR-96regulatesFOXO1-mediatedcellapoptosisinbladdercancer[J].OncolLett,2012，4:561-565.

[10]趙平, 陳萬青, 孔靈芝.中國癌癥發病與死亡.2003-2007[M].北京：軍事醫學科學出版社,2012:123-134.

[11]SiegelRL,MillerKD,JemalA.CancerStatistics, 2017[J].CACancerJClin,2017 ,67(1):7-30.

[12]HANY,CHENJ,ZHAOX,etal.MicroRNAexpressionsignaturesofbladdercancerrevealedbydeepsequencing[J].PLoSOne,2011,6(3):e18286.

[13]YAMADAY,ENOKIDAH,KOJIMAS,etal.MiR-96andmiR-183detectioninurineserveaspotentialtumormarkersofurothelialcarcinoma:correlationwithstageandgrade,andcomparisonwithurinarycytology[J].CancerSci,2011,102(3):522-529.

[14]EISSAS,MATBOLIM,ESSAWYNO,etal.Ntegrativefunctionalgeneticepigeneticapproachforselectinggenesasurinebiomarkersforbladdercancerdia-gnosis[J].TumourBiol,2015,36(12):9545-9552.

[15]YUJJ,WUYX,ZHAOFJ,etal.miR-96promotescellproliferationandclonogenicitybydown-regulatingofFOXO1inprostatecancercells[J].MedOncol,2014,31(4):910.

[16]TSAIYC,CHENWY,SIUMK,etal.EpidermalgrowthfactorreceptorsignalingpromotesmetastaticprostatecancerthroughmicroRNA-96-mediateddownregulationofthetumorsuppressorETV6[J].CancerLett,2017,384:1-8.

[17]MAY,YANGHZ,DONGBJ,etal.BiphasicregulationofautophagybymRi-96inprostatecancercellsunderhypoxia[J].Oncotarget,2014,5(19):9169-9182.

[18]WANGY,HUANGJW,CALSESP,etal.MiR-96downregulatesREV1andRAD51topromotecellularsensitivitytocisplatinandPARPinhibition[J].CancerRes,2012,72(16):4037-4046.

[19]KANGSG,HAYR,KIMSJ,etal.DomicroRNA96, 145and221expressionsreallyaidintheprognosisofprostatecarcinoma?[J].AsianJAndrol， 2012 ，14(5):752-757.

[20]DUTCHERJP.Recentdevelopmentsinthetreatmentofrenalcellcarcinoma[J].TherAdvUrol,2013,5:338-353.

[21]YUN,FUS,LIUY,etal.miR-96suppressesrenalcellcarcinomainvasionviadownregulationofEzrinexpression[J].JExpClinCancerRes,2015,34:107.