雞馬立克氏病毒感染對雞腦部神經系統損傷的研究

張孝清

摘要：選取4日齡無特定病原雞分析雞馬立克氏病毒感染對雞腦部神經系統損傷的影響，根據不同毒力特征（814、rMS、WC1203、Ms5、BS）MDV-1毒株感染，對不同接毒時間（接毒后1、3、5、7、10、14、21、28 d）動態檢測病毒載量變化情況進行有效記錄，對不同毒株感染后雞腦部組織病理學檢查結果進行分析。結果表明，不同毒力MDV-1毒株在無特定病原雞腦部存在不同的復制規律，其中強毒自身的復制能力明顯高于弱毒，而特超強病毒株早期復制速度最快;感染早期，強毒對無特定病原雞腦組織神經系統損傷程度更高，與弱毒相比存在明顯差異;感染21 d，強毒所造成的腦部損傷明顯更強。說明不同毒株對無特定病原雞所產生的腦神經系統損傷程度不同，毒株毒性越強損傷越重。

關鍵詞：雞馬立克氏病;病毒感染;神經系統

中圖分類號：S858.31? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2018）11-0006-02

雞馬立克氏病屬于雞常見疾病，主要由雞馬立克氏病毒血清1型（MDV-1）引發，可對神經系統造成嚴重損傷，也會導致免疫抑制，屬于接觸性傳染性疾病，對雞飼養造成明顯影響[1，2]。神經系統癥狀在馬立克氏病毒感染的雞群中不僅發病早，同時雞只淘汰率較高。為進一步掌握雞馬立克氏病毒感染情況，試驗對不同毒力MDV-1感染對神經系統損傷程度進行詳細分析，并研究其結果，現做詳細報道。

1? 材料與方法

1.1? 材料

雞：無特定病原雞，購自國內某獸醫研究所實驗中心;病毒株：MDV-1毒株，購自世界生物資源中心（ATCC），由本實驗室進行保存。

試劑、儀器：分子生物水、DNA提取試劑盒、PBS。

FQ-PCR引物：①檢測基因為MDV-1特異基因Meq;②內參基因為雞的管家基因Ovo。

1.2? 方法

取180羽無特定病原4日齡雞，隨機分組，每組30羽，采用負壓隔離器對其進行飼養。6組雞分別采用腹腔接種方法，以1 000 PFU/羽劑量將814、rMS、WC1203、Ms5、BS病毒株注射給6組試驗雞，病毒接種后，對其不同時間段腦部情況進行分析。

1.3? 組織病理檢查

對上述不同組別雞腦部組織進行收集，然后進行病理切片檢查。采用10%福爾馬林對神經組織進行有效固定，固定24 h后采用乙醇進行脫水處理，并采用二甲苯、無水乙醇的混合液石蠟包埋。制備石蠟切片，做好染色處理，觀察病理變化。

1.4? 觀察指標

對不同毒力MDV-1毒株在無特定病原雞腦部復制規律進行分析和對比，分析不同毒力對無特定病原雞腦組織神經系統損傷程度，做好詳細記錄。

1.5? 統計數據分析

試驗結果用Spss20.0軟件分析，結果用（x±s）表示，用t檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2? 結果與分析

2.1? 病毒復制規律分析

雙重熒光定量檢測方法證實，在不同時段下，不同毒力MDV-1毒株在無特定病原雞腦部，存在不同的復制規律;強毒復制能力明顯高于弱毒（P<0.05），而特超強病毒株早期復制速度最快。觀察結果表明，①感染后5 d，可在BS株感染的雞腦組織中發現病毒，感染7 d后均能檢測出病毒，說明BS株增殖能力最強，與毒力等級呈正比關系;②感染10 d至最后，強毒載量一直高于弱毒（P<0.05），說明感染中晚期，毒力與病毒復制能力呈正相關;③感染10 d及21 d兩個節點上，無論是強毒，還是弱毒，均出現2個復制高峰期。強毒感染17 d時，病毒載量呈現最低表現，弱毒感染14 d時最低，說明兩種毒性在試驗雞腦部潛伏期不同。④接種病毒10 d后，不同弱毒株與其他三種強毒株在病毒載量上已經不存在明顯差異性（P>0.05），說明感染中后期強毒之間的復制能力變化與毒力無明顯關聯（圖1）。

2.2? 腦神經組織病理學變化

感染早期，強毒對無特定病原雞腦組織神經系統損傷程度更高，與弱毒相比存在明顯差異（P<0.05）。研究結果證實，感染5 d時，雖然能夠在BS株感染后的腦組織中檢測出馬立克氏病毒，但是病理切片顯示，感染5 d后，無論是強毒還是弱毒，受到感染的腦組織切片均會發生一定病理改變。強毒感染后，試驗雞腦組織多為局部膠質細胞浸潤，弱毒感染后，試驗雞腦組織膠質細胞浸潤比較有限，說明強毒對腦組織損傷程度更加嚴重。感染21 d，強毒所造成的腦部損傷明顯更強，但是弱毒載量出現第2個高峰值，2種毒力對試驗雞腦部病理損傷程度有明顯的差別。

3? 小結與討論

研究發現，雞馬立克氏病毒感染毒力不斷強化，我國雞馬立克氏病毒感染毒力變化情況與世界公認狀況基本相符[3]。通過多年觀察發現，我國雞馬立克氏病新分離出來的病毒株，在致病特征上出現一定改變，其中BS是我國分離出來的病毒株，毒力比較高，超過一般強毒及超強毒。

結合MDV-1致病性，可將感染分為4種病原型，即溫和型（mMDV）、強毒型（vMDV）、超強毒型（vvMDV）和特超強毒型（vv+MDV）。不同毒力毒株感染后，雞產生的致病特征也不盡相同[4]。

很多研究文獻認為[5，6]，雞馬立克氏病毒血清1型的毒力越強，在病毒感染前期，其在雞體內復制速度越快，同時也會顯著增加病毒載量。通過研究復制動力學，基本上證實了這個規律，即致病性與病毒復制能力呈正相關。

本研究結果顯示，不同毒力 MDV-1 毒株在無特定病原雞腦部，存在不同的復制規律，其中強毒自身的復制能力明顯高于弱毒，而特超強病毒株早期復制速度最快;感染早期，強毒對無特定病原雞腦組織神經系統損傷程度更高，與弱毒相比存在明顯差異;感染21 d，強毒所造成的腦部損傷明顯更強。不同毒株對無特定病原雞所產生的腦神經系統損傷程度不同，毒株毒性越強損傷越重。

參考文獻：

[1] 陳洋宙.雞馬立克氏病病毒Meq蛋白特異性單克隆抗體研制及其初步應用[D].揚州：揚州大學，2018.

[2] 付? 麗，王海秋.雞馬立克氏病的診斷及綜合防治分析[J].吉林畜牧獸醫，2017，38（11）：42.

[3] 朱? 婷.雞馬立克氏病病毒分離株AH1410的致病性與基因序列分析[D].江蘇揚州：揚州大學，2018.

[4] 周忠文，蘇? 帥，崔? 寧，等.整合REVLTR的自然重組馬立克氏病毒GX0101的全基因組序列分析[J].中國獸藥雜志，2017，51（10）：1-10.

[5] 王夢云，周宏達，韋美甜，等.馬立克氏病毒UL36蛋白的表達及其去泛素化酶活性分析[J].畜牧與獸醫，2017，49（5）：77-82.

[6] 王守文.內臟型雞馬立克氏病繼發大腸桿菌病例報告[J].山東畜牧獸醫，2017，38（3）：78-79.