提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性的措施

◎ 夏 星

（桃江縣食品藥品工商質(zhì)量監(jiān)督管理局，湖南 益陽 413400）

食品添加劑能夠提高食品的防腐能力，提升食品的品質(zhì)與口感。因此，在很多食品生產(chǎn)加工中，都會(huì)添加一種或幾種食品添加劑，如脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精鈉和安賽蜜等。這些食品添加劑根據(jù)實(shí)際需求，可發(fā)揮增稠、增甜、防腐、乳化、著色、護(hù)色、膨松、增味、漂白、消泡及抗結(jié)等多種作用。但是，一些不法生產(chǎn)商為了獲取更大的利益，不惜違法添加食品添加劑，嚴(yán)重影響了食品安全，威脅人們的健康。對(duì)此，需要準(zhǔn)確檢驗(yàn)食品中的食品添加劑。通常采用液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，不過，在實(shí)際檢測(cè)當(dāng)中，可能會(huì)由于一些原因影響最終的檢測(cè)結(jié)果。對(duì)此，應(yīng)采取有效的措施，提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑的準(zhǔn)確性，從而確保食品安全。

1 做好檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作

1.1 流動(dòng)相過濾脫氣處理

采用液相色譜法檢測(cè)食品中的添加劑，首先應(yīng)進(jìn)行流動(dòng)相過濾脫氣處理。通常，樣品溶液及流動(dòng)相中，會(huì)存在直徑超過0.45 μm的細(xì)小顆粒。而檢測(cè)中使用的色譜柱，其內(nèi)腔極小，填充物很細(xì)，樣品溶劑中存在的細(xì)小顆粒可能對(duì)毛細(xì)管、色譜柱造成堵塞。所以，在檢驗(yàn)之前，必須充分過濾處理所有樣品溶劑，將其中的雜質(zhì)顆粒清除。流動(dòng)相的脫氣處理十分重要，可避免系統(tǒng)中產(chǎn)生氣泡并溢出，防止對(duì)泵的工作運(yùn)行造成影響，確保HPLC檢測(cè)器良好的極限靈敏度與穩(wěn)定性，使檢測(cè)順利完成[1]。對(duì)于低沸點(diǎn)溶劑，利用抽氣法、煮沸法處理過程中，需要關(guān)注溶劑揮發(fā)引起的組成變化情況。一般利用超聲脫氣的方法處理樣品，可以避免影響溶劑組成，超聲脫氣處理流程可在20～30 min完成，處理過程中要注意避免溶劑瓶接觸超聲槽底部與側(cè)壁，進(jìn)而造成溶劑瓶破裂損壞。此外，要注意合理控制容器內(nèi)液面，不要高出水面太多。

1.2 HPLC柱壓檢測(cè)與排氣泡處理

對(duì)HPLC柱壓檢測(cè)，保證其運(yùn)行狀態(tài)正常。如果柱壓發(fā)生異常情況，將造成檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。一般來說，HPLC發(fā)生柱壓過高的情況比較多見。對(duì)此，應(yīng)將保護(hù)柱拆下并觀察柱壓。如果柱壓下降則確定保護(hù)柱出現(xiàn)故障；如果柱壓未下降，需進(jìn)一步檢測(cè)。將色譜柱從HPLC中取下，再觀察柱壓，如果柱壓仍未下降，判斷可能是管路阻塞所致，徹底清洗后繼續(xù)檢查。對(duì)色譜柱進(jìn)出口反向連接，使用超過柱體積10倍的流動(dòng)相對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗，再觀察柱壓，如果柱壓沒有下降，繼續(xù)后續(xù)檢查。將色譜柱入口篩板更換后再觀察柱壓，如果此時(shí)柱壓下降，則說明受到了樣品溶劑中雜質(zhì)顆粒的影響，造成入口篩板堵塞。如果柱壓仍在下降，就需要聯(lián)系生產(chǎn)廠家維修。可以將在線過濾器安裝在HPLC進(jìn)樣器和保護(hù)柱之間，以有效防止柱壓過高。此外，需要及時(shí)排除輸液管路中的氣泡，以進(jìn)一步提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。如果泡存在于管道中，將會(huì)影響分析過程中柱壓的穩(wěn)定性，圖譜基線穩(wěn)定性不足，可能產(chǎn)生假峰，進(jìn)而影響最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3 色譜柱及樣品處理

除上述準(zhǔn)備工作之外，為了保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，還需要做好其他方面的準(zhǔn)備，如檢查室內(nèi)的溫度變化，了解并控制電壓波動(dòng)情況，同時(shí)確保流動(dòng)性過濾頭、保護(hù)柱、泵密封墊、單向閥、比例閥等儀器設(shè)備處于良好狀態(tài)。檢驗(yàn)前需要充分清洗色譜柱，并保證色譜柱平衡。在清洗過程中，首先使用80%的乙腈、甲醇的純水溶液進(jìn)行30 min左右的沖洗，然后使用乙腈、甲醇再行沖洗30 min，最后使用流動(dòng)相對(duì)色譜柱調(diào)節(jié)平衡，使其達(dá)到基線平穩(wěn)狀態(tài)。應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求處理樣品，如果樣品處理不合格，將可能造成結(jié)構(gòu)相似于待測(cè)組分的雜質(zhì)組分，無法徹底分離，導(dǎo)致最終檢測(cè)結(jié)果偏高，或是無法徹底分離和提純待測(cè)組分，造成最終檢測(cè)結(jié)果偏低。對(duì)此，在樣品處理過程中，需要嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求，合理控制樣品處理的溫度、時(shí)間，以及試劑加入的量及方式等，對(duì)平行樣的處理也應(yīng)嚴(yán)格按照相同條件完成。

2 嚴(yán)格規(guī)范樣品的分析過程

2.1 定性分析過程

定性分析過程相對(duì)簡(jiǎn)單，是通過對(duì)同類樣品的加標(biāo)實(shí)現(xiàn)。選擇不含待測(cè)組分的同類樣品，將一定濃度標(biāo)樣加入，比較與樣品的保留時(shí)間，實(shí)現(xiàn)定性分析檢測(cè)。若二者具有相似的保留時(shí)間，將含量和樣品待測(cè)組分相同的等體積標(biāo)液加入待測(cè)樣品中完成定性。如果加標(biāo)樣品待測(cè)組分出現(xiàn)了叉峰，可排除待測(cè)組分的可能。如果加標(biāo)樣品待測(cè)組分未出現(xiàn)叉峰情況，利用HPLC對(duì)待測(cè)組分標(biāo)樣、樣品、含量加以測(cè)量，通過混合計(jì)算，如果得出結(jié)果顯示具有基本相同的含量，則判定為待測(cè)組分，如果相差較大，則不是待測(cè)組分。

2.2 定量分析過程

特定條件下，將同體積標(biāo)樣加入可獲取相應(yīng)的響應(yīng)值。對(duì)響應(yīng)值及標(biāo)樣含量校準(zhǔn)曲線加以繪制。對(duì)于待測(cè)樣品檢測(cè)，通過校準(zhǔn)曲線，找到對(duì)應(yīng)待測(cè)組分響應(yīng)值的組分含量。如果檢測(cè)過程中待測(cè)組濃度比檢測(cè)低限更低，利用標(biāo)準(zhǔn)方法未成功濃縮，結(jié)果即為檢出。如果可以濃縮，則濃縮后再行檢測(cè)。如果樣品量可增加，則增加后再行檢測(cè)。如果待測(cè)組分濃度比校準(zhǔn)曲線上限更高，則適當(dāng)稀釋后再行檢測(cè)[2]。例如，在對(duì)苯甲酸、糖精鈉、山梨酸檢驗(yàn)的過程中，苯甲酸檢驗(yàn)可能出現(xiàn)安賽蜜的峰，糖精鈉前可能出現(xiàn)脫氫乙酸的峰，同時(shí)此類峰較為接近，難以徹底分離，容易形成饅頭峰、叉峰，進(jìn)而對(duì)樣品定性定量檢測(cè)產(chǎn)生影響。通過樣品標(biāo)簽信息，如果可以對(duì)添加劑加以確定，則可直接完成定性。而待測(cè)組分如果超標(biāo)，需將流動(dòng)相極性降低，實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)峰的徹底分離，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。如果樣品中添加劑成分無法確定，需要采用樣品加標(biāo)的方式定性，然后定量。在標(biāo)準(zhǔn)中如果聲明了禁止添加，但在待測(cè)峰附近發(fā)現(xiàn)相應(yīng)添加劑的峰，可采用樣品加標(biāo)完成定性，然后定量。觀察雜質(zhì)峰、待測(cè)峰是否徹底分離，如未分離，需將流動(dòng)相極性降低，徹底分離雜質(zhì)峰后完成定量檢測(cè)。

3 檢驗(yàn)后做好相關(guān)設(shè)備的處理工作

在檢驗(yàn)完成之后，將HPLC色譜柱徹底清洗干凈，使用80%濃度的乙腈、甲醇的純水溶液沖洗，使柱壓恢復(fù)到檢驗(yàn)之前。利用相同方法沖洗色譜柱的柱壓狀態(tài)。通常情況下，流動(dòng)性過濾頭、保護(hù)柱、泵密封墊單向閥等部件較為容易堵塞，因此每個(gè)月至少清洗1～2次，而且需要用純水，現(xiàn)過濾并現(xiàn)用[3]。清洗用純水過濾后，可以將10%濃度的乙腈、甲醇溶劑加入其中，避免滋生細(xì)菌，延長(zhǎng)純水的使用時(shí)間。

4 結(jié)語

對(duì)于食品中食品添加劑的檢測(cè)，相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)較高，采用高效液相色譜儀分析技術(shù)，具有較好的定量精度、分辨率、靈敏度，可廣泛應(yīng)用于食品檢測(cè)領(lǐng)域。為了進(jìn)一步達(dá)到較高的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑的準(zhǔn)確性，可在檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作、樣品分析過程、檢驗(yàn)后的處理等方面入手，以取得更為準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果。

[1]蔡 曦，丁堅(jiān)強(qiáng)，鐘良康，等.固相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定飲料中10種食品添加劑[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015（12）：1910-1912.

[2]陳妙瑞.提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性策略分析[J].中國(guó)新技術(shù)新產(chǎn)品，2017（9）：50-51.

[3]李 婷，區(qū)碩俊，王 強(qiáng)，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中15種食品添加劑的含量[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2016（9）：3788-3793.