1例艾滋病感染早期診斷檢測方法的研究

陶 靜，洪 亮，王緒琴，張 晶，陳 坤，薛以樂

艾滋病病毒Ⅰ型（Human immunodeficiency virus type 1，HIV-1）感染的早發現、早診斷對于艾滋病患者來說是至關重要的。早診斷、早治療可以保持HIV特異性的T細胞免疫應答，而HIV特異性免疫可以阻止疾病的進展，有效遏制體內的病毒載量，降低死亡率，減少機會性感染，提高感染者的生存質量。同時，早發現、早診斷能盡早給予患者心理咨詢輔導、行為指導及臨床干預。早干預還能降低HIV繼續傳播的危險性，有效地減少HIV在人群中的傳播[1]。

但HIV-1感染的早期診斷非常困難。目前，判斷艾滋病感染的主要依據是 HIV-1抗體檢測的結果，但由于在窗口期的感染者體內還沒產生出足夠能檢測出來的抗體，因而在此期的病人可能被誤診[1]。《全國艾滋病檢測技術規范》2015年修訂版（簡稱“規范”）規定，HIV抗體篩查有反應必需進行復檢，復檢有反應需進行“補充試驗”。作為補充試驗主要方法的免疫印跡法（WB），其結果是感染的判斷依據。為了能更準確地做到早發現、早診斷，對WB檢測結果為陰性或不確定但疑似“窗口期”感染的病人，應建議進一步做核酸檢測或2～4周后隨訪[2]。WB因其特異性高、價格低廉、操作簡便，成為 HIV確證檢測的主要手段。同時，核酸檢測由于兼具敏感性高和特異性好的優點，被認為是HIV早期診斷的有力手段，但因其價格昂貴、操作繁瑣，使得不能適用于所有樣本的檢測。如何合理運用這些檢測手段，從而早發現，早診斷窗口期感染者，值得進一步探討。

2018年，上海市發現1例較為典型的早診斷案例，現對其進行分析。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

2018年6月醫療機構出國人員體檢（海員），在病人知情同意下，進行了相關檢測，隨訪并流行病學調查。

1.2 檢測方法

HIV抗體初篩檢測采用化學發光法，復檢采用酶聯免疫吸附實驗及膠體金法，補充試驗包括：WB和病毒載量檢測。所有試劑均在有效期內適用，并嚴格按照試劑說明書操作。

1.3 檢測試劑及儀器

1.3.1 化學發光法

儀器：德國西門子ADVIA Centaur XP。試劑：Siemens Healthcare Diagnostics Inc。判斷標準：臨界值為1，相對光單位（RLU）大于臨界值即為初篩呈陽性反應。

1.3.2 酶聯免疫吸附試驗

儀器：LabsystemsMultiskan III（MK3）。試劑：北京萬泰生物藥業股份有限公司人類免疫缺陷病毒抗原及抗體檢測試劑盒。判斷標準：S/CO比值大于1即為初篩呈陽性反應

1.3.3 膠體金法

儀器：目測。試劑：Standard Diagnostics Inc.（韓國SD）提供的人類免疫缺陷病毒抗原及抗體檢測試劑盒。判斷標準：相應反應區域出現紅色條帶即為初篩呈陽性反應。

1.3.4 全自動免疫印跡法（WB）

儀器：Beeblot20。試劑：MP Diagnostics公司及IMT公司提供的人類免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗體檢測試劑盒。判斷標準：檢測出 2個 ENV（gp160/gp41和 gp120）及任何一個 GAG（p17、p24、p55），或者檢測出2個ENV（gp160/gp41和gp120）及任何一個POL（p31、p51、p66）可判定為HIV-1抗體陽性；出現任何特異性條帶，但不足以被判斷為陽性的可判定為HIV-1抗體不確定。

1.3.5 病毒載量

儀器：COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan48分析儀。試劑：羅氏診斷公司 COBAS Ampli Prep/COBAS TaqMan HIV-1test人類免疫缺陷病毒（Ⅰ型）核酸定量檢測試劑盒（PCR熒光法）v2.0。判斷標準：大于5000 copy/mL即為陽性。

2 結果

2.1 流行病學史調查

患者，男，中年，已婚，漢族，非上海市戶籍。經流行病學調查，在2018年5月下旬有過男男同性無套肛交高危性行為，病人否認吸毒史、輸血史、婚外高危異性性接觸史，否認5月下旬前有高危同性性行為。事后2周有咽喉腫痛、感冒低燒癥狀。6月下旬在醫療機構篩查檢測中HIV抗體有反應，隨后樣本送 HIV確證實驗室進行補充試驗；接著其配偶去戶籍所在地疾控中心進行HIV檢測，HIV抗體檢測結果為陰性。

2.2 實驗室檢測結果

實驗室檢測結果詳見表1。

表1 HIV各項檢測結果匯總

3 討論

近年來，我國新發現的HIV/AIDS病例不斷增加。中國疾病預防控制中心在2017年疫情分析中報道：全國2017年新發現病例為13.4萬[3]，比2016年增長了8%。隨著國家艾滋病防治政策措施的不斷完善與落實，服務網絡更加健全，防治模式不斷創新，檢測技術的不斷發展及完善，第四代檢測試劑及核酸檢測被應用等因素，窗口期大大縮短[4]，使得越來越多的早期病人被發現。

本案例是1例典型的早期感染病人，在高危行為1個月后篩查。化學發光法、酶聯免疫法及膠體金法均呈陽性反應，但WB結果卻為陰性，其流行病學史顯示有高危男男同性性行為，疑似為窗口期感染，根據“規范”進行了核酸檢測，核酸檢測結果為104,166 copy/mL，呈強陽性反應。在隨后的2次隨訪中可見，篩查發光法結果從8.47增高至>50，酶聯免疫法結果明顯升高，WB結果條帶從無到明顯增多、結果轉陽，而核酸檢測結果從 104,166 copy/mL逐步下降至41,700 copy/mL。由案例可見，如果僅依據 WB第一次檢測的陰性結果而出具HIV抗體陰性的報告，就會因漏檢造成誤診。而結合流行病學史，進一步開展核酸檢測則能避免漏檢，及早地發現窗口期患者，從而進行早干預、早治療。

造成上述檢測結果的原因，可能是病人感染HIV病毒后，其體內雖產生相應的抗體，但由于早期抗體的含量較低，對于敏感性高的篩查檢測和敏感性較低的WB檢測，結果會不一致。病毒核酸檢測不受早期抗體含量低的影響，因而結果始終為陽性。近年來，敏感性極高的 HIV篩查方法使用越來越廣泛，篩查陽性而WB陰性或不確定的現象也隨之越來越多。雖然依據“規范”，對于WB檢測結果為 HIV抗體陰性或不確定的案例，建議其進行 2～4周的隨訪或進行核酸檢測。但確證報告為HIV抗體陰性或不確定的案例，即使建議其定期隨訪，這部分患者的依從性常不盡理想，這直接導致了一部分早期感染者的漏檢。由此案例可見，結合流行病學史，合理使用檢測手段能避免漏檢。HIV-1核酸檢測對于艾滋病感染的極早期診斷是有重要意義的。

在HIV-1感染的極早期診斷中，核酸檢測由于兼具敏感性高和特異性好，明顯優于WB，但核酸檢測會受到病毒亞型的變異、病毒含量隨著病程不斷變化等因素影響，且對樣本采集、處理、保存、運輸有嚴格的要求，其檢測成本較高，使得其使用存在一定的局限性[5]；而WB雖然敏感性沒有核酸檢測高，可能造成漏檢，但其操作簡便、檢測成本較低等優點仍然使其成為 HIV確證檢測的主要手段。如何合理地運用檢測方法，早發現、早診斷，加強流行病學的調查至關重要。通過流行病學調查及時發現有高危行為的患者，對一些有高危行為而WB檢測結果是陰性或不確定、疑似窗口期的案例，可以將核酸檢測作為補充實驗，從而發現早期感染者，實現早診斷、早發現、早干預、早治療，預防和控制艾滋病的傳播。