闌尾黏液性腫瘤患者腫瘤抑制蛋白質p53、Ki-67抗原表達及相關生物學行為評價

鄭鶴 曹亮 范學亮 王中山

（河南省鄭州金域臨床檢驗中心病理科 鄭州450000）

闌尾黏液性腫瘤屬闌尾原發性腫瘤主要病理類型之一，以良性病變為主，早期缺乏特異性臨床癥狀及體征，多于合并感染時出現類似慢、急性闌尾炎的臨床癥狀及體征[1]。闌尾黏液性腫瘤在臨床較為少見，約占全部闌尾疾病的0.3%，但若未及時治療易誘發腹膜假黏液瘤（Pseudomyxoma Peritonei，PMP），有惡變趨勢[2]。目前臨床對該疾病的實驗研究較少，缺乏對其分子病理基礎及生物學行為等方面的認識。基于此，本研究選取我中心病理科確診的48例闌尾黏液性腫瘤的手術標本蠟塊為觀察組，旨在分析腫瘤抑制蛋白質p53、增殖細胞核抗原Ki-67表達與闌尾黏液性腫瘤病理特征及腫瘤發生、發展的關系。現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我中心病理科2015年1月～2018年7月經病理學確診的48例闌尾黏液性腫瘤的手術標本為觀察組，另取同期41例因單純性闌尾炎行闌尾切除的闌尾組織標本為對照組。觀察組男21例，女27例；年齡44～69歲，平均年齡（56.41±6.71）歲；體質量指數 18.3～24.5 kg/m2，平均體質量指數（21.30±1.44）kg/m2；黏液腺癌 22例，低級別黏液性腫瘤26例。對照組男18例，女23例；年齡 42～68歲，平均年齡（56.08±6.80）歲；體質量指數18.2～24.6 kg/m2，平均體質量指數（21.25±1.51）kg/m2。兩組一般資料比較，差異無統計學意義，P＞0.05，具有可比性。本研究已經通過醫學倫理委員會批準，患者簽署知情同意書，并排除繼發性闌尾腫瘤、出現遠處轉移以及臨床資料不全者。

1.2 檢驗方法 應用免疫組織化學二步法分別檢測p53蛋白、Ki-67抗原在闌尾黏液性腫瘤和單純性闌尾炎中的表達水平。

1.2.1 主要試劑 北京安諾優達基因科技有限公司生產的鼠抗人p53蛋白單抗、鼠抗人Ki-67單抗；上海西唐生物科技有限公司生產的EDTA抗原修復液、免疫組織化學二步試劑、濃縮型DBA試劑盒。

1.2.2 具體操作 所有標本均以4%甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，4～5 μm連續切片，常規作HE染色，同時采用工作液對p53蛋白、Ki-67抗原進行免疫組織化學染色。以EDTA抗原修復液高壓修復抗原2.5 min。選取已知陽性片作為陽性對照，并以PBS代替一抗作為陰性對照。由兩位高年資病理科醫師于光學顯微鏡下觀察免疫組織化學切片，計數分析且采用數碼照相系統拍照。

1.2.3 結果判定 （1）p53染色：細胞核內呈均一棕色或棕黃色顆粒為免疫組化陽性。光鏡下觀察5個有代表性的高倍視野，按切片陽性細胞占比分成4個等級：陽性細胞＜10%記（－），陽性細胞10%～25%記（+），陽性細胞 26%～50%記（++），陽性細胞＞50%記（+++）。（2）Ki-67抗原染色定位于細胞核。按Ki-67抗原標記指數（LI）將陽性結果分成4個等級：0%～10%記Ⅰ級，11%～25%記Ⅱ級，26%～50%記Ⅲ級，＞50%記Ⅳ級。每張切片隨機選擇5個高倍視野，每個視野計數100個細胞。Ki-67抗原陽性率=（Ⅲ級+Ⅳ級）/計數細胞×100%。

1.3 觀察指標 （1）觀察兩組p53蛋白、Ki-67抗原表達情況。（2）分析p53蛋白、Ki-67抗原表達與闌尾黏液性腫瘤患者性別、年齡、病理類型、是否形成PMP以及有無淋巴結轉移等因素的關系。

1.4 統計學方法 數據處理采用SPSS21.0統計學軟件，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數資料用率表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組p53蛋白、Ki-67抗原表達情況比較 觀察組中p53蛋白陽性表達15例，陽性表達率為31.25%（15/48）；Ki-67抗原標記陽性22例，標記陽性率為45.83%（22/48）。對照組p53蛋白陽性表達0例，陽性表達率為0.00%（0/41）；Ki-67抗原標記陽性4例，標記陽性率為9.76%（4/41）。觀察組p53蛋白陽性表達率及Ki-67抗原標記陽性率明顯高于對照組（P＜0.05）。

2.2 p53蛋白、Ki-67抗原表達與闌尾黏液性腫瘤發生、發展的關系 不同病理類型、有無淋巴轉移、有無出現PMP的闌尾黏液性腫瘤患者p53蛋白陽性率比較，組間差異具有統計學意義（P＜0.05）；不同年齡及不同性別的闌尾黏液性腫瘤患者p53蛋白陽性率比較，組間差異無統計學意義（P＞0.05）。不同病理類型、有無淋巴轉移的闌尾黏液性腫瘤患者Ki-67抗原陽性率比較，組間差異具有統計學意義（P＜0.05）；不同年齡、不同性別、有無出現PMP的闌尾黏液性腫瘤患者Ki-67抗原陽性率比較，組間差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 p53蛋白、Ki-67抗原表達與闌尾黏液性腫瘤發生、發展的關系[例（%）]

3 討論

闌尾黏液性腫瘤臨床相對少見，其與PMP的發生存在密切關系，相關研究已證實，闌尾黏液性腫瘤為引起PMP的關鍵因素之一[3～4]。但目前闌尾黏液性腫瘤及PMP尚缺乏特異性臨床特征，基于此，本研究嘗試自分子病理學角度分析，以期為闌尾黏液性腫瘤臨床診斷及評估預后提供數據參考。

p53為目前發現與人類腫瘤關系最為密切的腫瘤基因，其參與細胞周期調控、細胞分化/凋亡、DNA修復等生物學過程。野生型p53（wtp53）為腫瘤抑制基因，而突變型p53（mtp53）基因表達產物已喪失抑制腫瘤異常增殖作用，具有癌基因效果。mtp53蛋白半衰期延長明顯，可通過免疫組化法檢出，mtp53蛋白過表達則提示p53基因已發生突變[5]。王賁士等[6]學者研究指出，mtp53基因過表達與腫瘤惡性程度關系密切。Ki-67是人類增殖細胞核抗原，其表達異常可評估細胞的增生活性。據報道[7～8]，Ki-67抗原與多種腫瘤發生、發展及預后密切相關。

本研究結果顯示，觀察組p53蛋白陽性表達率及Ki-67抗原標記陽性率明顯高于對照組（P＜0.05）。說明闌尾黏液性腫瘤患者p53蛋白、Ki-67抗原陽性率會出現顯著升高，可作為臨床診斷該疾病的指標。p53突變基因可促進腫瘤惡性轉化，而Ki-67抗原異常表達能提高腫瘤細胞增殖活性，二者具有協同效果，共同參與腫瘤的生物學過程。本研究結果還顯示，不同病理類型、有無淋巴轉移、有無出現PMP的闌尾黏液性腫瘤患者p53蛋白陽性率比較，組間差異具有統計學意義（P＜0.05）；不同病理類型、有無淋巴轉移的闌尾黏液性腫瘤患者Ki-67抗原陽性率比較，組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。說明p53蛋白、Ki-67抗原表達水平與闌尾黏液性腫瘤的發生及發展密切相關。綜上所述，闌尾黏液性腫瘤中p53蛋白、Ki-67抗原陽性率均顯著升高，聯合檢測p53蛋白、Ki-67抗原對評估闌尾黏液性腫瘤的生物學行為具有積極作用，可為臨床治療提供數據支持。