血漿miR-30d在急性心肌梗死中的表達(dá)水平及意義

李愛(ài)歆，李 林，金梅花，張 麗*

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 心內(nèi)科，黑龍江 佳木斯154002；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院)

急性心肌梗死(AMI)是嚴(yán)重的心血管疾病。近年來(lái)，由于對(duì)AMI的早期識(shí)別及有效干預(yù)，包括經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入手術(shù)(PCI)、冠狀動(dòng)脈旁路搭橋術(shù)的應(yīng)用，AMI致死率較前明顯下降，但AMI作為臨床上的急危重癥，早期診斷及及早干預(yù)病情對(duì)改善預(yù)后尤為重要，目前診斷AMI金標(biāo)準(zhǔn)仍是肌鈣蛋白、肌紅蛋白及肌酸激酶同工酶，本研究以急性心肌梗死血漿中miR-30d為研究目標(biāo)，探討血漿miR-30d可作為急性心肌梗死超急性期的診斷指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1病例資料

患者外周血樣本來(lái)自2014年6月至2016年6月期間，佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科住院的急性心肌梗死患者60例，男性患者38例，女性患者22例，平均年齡為54.78±15.77歲。納入標(biāo)準(zhǔn):STEMI、NSTEMI患者診斷參照2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南，心臟生物標(biāo)志物質(zhì)(最好是肌鈣蛋白)增高或增高后降低，至少有1次數(shù)值超過(guò)參考值上限的99百分位(即參考值上限)，并有以下至少1項(xiàng)也肌缺血的證據(jù)：①心肌缺血臨床癥狀；②心電圖出現(xiàn)新的心肌缺血變化，ST段抬高≥0.1 mV；⑤心電圖出現(xiàn)病理性Q波；④影像學(xué)證據(jù)顯示新的心肌活力喪失或區(qū)域性室壁運(yùn)動(dòng)異常。排除標(biāo)準(zhǔn):既往腫瘤病史及患有腫瘤、急慢性感染、嚴(yán)重肝腎功能異常、急性腦梗死、腦出血、創(chuàng)傷、自身免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病及既往行PCI患者。健康對(duì)照組來(lái)自我院體檢中心共60例，男性34例，女性26例，平均年齡為55.64±18.12歲。入選對(duì)象兩組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。

1.2標(biāo)本采集

AMI組入院后即刻抽血，24 h后再次抽血，均抽取外周靜脈血4 ml置于EDTA 抗凝劑管中，健康對(duì)照組于體檢時(shí)與體檢24 h后抽取外周靜脈血3 ml置于EDTA 抗凝劑管中，室溫下1 600 g離心15 min，吸取上清液至 Eppendorf 管中，之后4℃下12 000 g 離心10 min，再次吸取上清液至新Eppendorf 管中內(nèi)，-80℃保存以備miRNA抽提。另外AMI組入院后即刻抽取外周靜脈血3 ml置于肝素抗凝劑的管中，室溫3 000 rpm離心15 min做心肌損傷標(biāo)志物檢測(cè)，包括肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白I(cTnI)。

1.3miRNA的檢測(cè)

應(yīng)用熒光定量PCR法對(duì)樣本中的miR-30d表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行具體操作。Ct值用 SDS2.1軟件計(jì)算，以cel-miR-39作為內(nèi)參照，采用相對(duì)定量法，以2-△△Ct表示患者組血漿中目的基因的表達(dá)相對(duì)于健康對(duì)照組的變化倍數(shù)，其中△△Ct=(CtmiR-30d-Ctcel-miR-39) AMI組-(CtmiR-30d-Ctcel-miR-39) 健康對(duì)照組。

1.4統(tǒng)計(jì)及圖像處理

2 結(jié)果

2.1AMI組和健康對(duì)照組在性別、年齡、心率等一般資料上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

2.2兩組不同時(shí)間段血漿miR-30d表達(dá)水平，入院后1 h內(nèi)AMI患者miR-30d的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，隨著AMI發(fā)病時(shí)間的延長(zhǎng)患者血miR-30d的表達(dá)下降，但仍高于對(duì)照組，兩時(shí)段內(nèi)與對(duì)照組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，見(jiàn)表2。

2.3血漿miR-30d的表達(dá)趨勢(shì)與傳統(tǒng)心肌損傷標(biāo)志物CK-MB、cTnI表達(dá)趨勢(shì)相同，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且隨著AMI發(fā)病時(shí)間的延長(zhǎng)患者血漿miR-30d的表達(dá)陽(yáng)性率下降，見(jiàn)表3。

3 討論

近些年來(lái)，研究人員發(fā)現(xiàn)miRNA 參與多種疾病的發(fā)病過(guò)程。在許多疾病中，miRNA能夠成為重要的生物學(xué)標(biāo)志[1,2]。現(xiàn)有研究證實(shí)血清/血漿中存在大量穩(wěn)定的 miRNAs 分子，這給miRNAs的血清/血漿學(xué)研究帶來(lái)了希望[3]。

表1 入選對(duì)象基本資料

表2 兩組不同時(shí)間段血漿miR-30d表達(dá)水平

注：與對(duì)照組相比*P<0.01。

表3 AMI組入院1 h、24 h心肌損傷標(biāo)志物CK-MB 、cTnI及血漿miR-30d的表達(dá)陽(yáng)性率

注：miR-30d與心肌損傷標(biāo)志物CK-MB比較，*P>0.05。

miR-30家族包括5個(gè)成員，miR-30a、miR-30b、miR-30c、miR-30d、miR-30e，具有較高的同源性，目前對(duì)于miR-30的研究集中于腫瘤的發(fā)生發(fā)展中，miR-30在前列腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，通過(guò)抑制EMT表型從而抑制癌細(xì)胞遷移和侵襲[4]。miR-30d亦被認(rèn)為是乳腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和肺癌轉(zhuǎn)移的標(biāo)志。近年來(lái)，研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)在心肌肥大過(guò)程中miR-30通過(guò)下調(diào)靶基因在心肌纖維化及血管損傷中起著重要作用[5,6]。

最近研究證實(shí)miR-30家族被凋亡基因p53激活，參與乳腺癌細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)。但目前關(guān)于miR-30在缺血性疾病中的研究較少。文獻(xiàn)報(bào)道AMI發(fā)生后，細(xì)胞凋亡相關(guān)的因子Bcl-2，caspase-3，F(xiàn)as，Bax，p53等異常表達(dá)，急性心肌梗死是由于心肌供血區(qū)域血流急劇減少，造成組織供氧絕對(duì)不足致能量耗竭從而啟動(dòng)心肌組織細(xì)胞凋亡，而當(dāng)組織細(xì)胞受到缺血、缺氧等傷害時(shí)，P53基因可被激活，P53基因?qū)τ诩?xì)胞周期阻滯、凋亡、修復(fù)、分化、衰老的調(diào)節(jié)以及抑制血管生成有著重要的作用[7,8]。

本研究證實(shí)miR-30d在心肌梗死早期高表達(dá)，與健康對(duì)照組相比有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且隨著AMI病程的進(jìn)展，miR-30d表達(dá)量下降，提示miR-30d在急性心肌梗死超早期起到重要調(diào)控作用，過(guò)表達(dá)的miR-30d可能作用于P53基因，啟動(dòng)下游促凋亡因子的表達(dá)，加速心肌細(xì)胞的凋亡，加重了心肌細(xì)胞缺血缺氧損傷。

肌鈣蛋白、肌紅蛋白及肌酸激酶同工酶作為急性心肌梗死的金診斷標(biāo)志物已經(jīng)多年，本研究發(fā)現(xiàn)miR-30d在AMI血漿中高表達(dá)與AMI病情進(jìn)展具有相關(guān)性，提示miR-30d在急性心肌梗死超急性期中的診斷價(jià)值，與心肌損傷標(biāo)志物CK-MB 變化趨勢(shì)相同，但這一結(jié)果需要更多的研究來(lái)證明，例如關(guān)于miR-30d的靶基因P53其凋亡途徑有待進(jìn)一步研究及miR-30d血漿表達(dá)水平與急性心肌梗死患者預(yù)后的關(guān)系。

總體而言，本研究發(fā)現(xiàn)miR-30d血漿表達(dá)水平在AMI組與健康對(duì)照組相比，前者顯著高表達(dá)，且miR-30d表達(dá)水平隨著AMI病程進(jìn)展呈下降趨勢(shì)，提示血漿中miR-30d有望成為診斷AMI超急性期的分子標(biāo)志，且可能與靶基因P53的表達(dá)有關(guān)，有可能加重了心肌損傷。

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