黃連降糖片對2型糖尿病模型大鼠IL-6及TNF-α的影響*

閆 鏞 ，龐國明 ，苗明三 ，陳倩倩 ，張瑞帥 ，朱 璞 ，武 楠

（1.開封市中醫(yī)院內(nèi)分泌科，開封 475000；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)，鄭州 450046）

2型糖尿病（T2DM）是一種常見的內(nèi)分泌疾病，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，一直是研究的重點(diǎn)內(nèi)容。近年來越來越多的研究證明炎癥因子在糖尿病的發(fā)病過程中起著至關(guān)重要的作用，炎癥因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α)、白介素-6（IL-6）是重要的糖尿病相關(guān)炎癥因子，多個研究提示TNF-α、IL-6參與了糖尿病的發(fā)生。本院自主研發(fā)的黃連降糖片，在以往的臨床研究中證實(shí)具有調(diào)節(jié)糖脂代謝，改善胰島素抵抗的作用[1-2]，但其對2型糖尿病血清炎癥因子是否有影響還未經(jīng)研究證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)通過觀察黃連降糖片對T2DM模型大鼠血清IL-6、TNF-α的影響，探討其降糖機(jī)制。

1 材料

1.1 動物 健康SPF級SD雄性大鼠120只，體質(zhì)量（200±25）g。購自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動物繁育有限公司，室溫 20～25℃，濕度 50%～65%，每日光照 12 h。

1.2 藥品與試劑 黃連降糖片（黃連、生地、知母、麥門冬、牡丹皮、酒大黃等，每片包含生藥0.3 g）由開封市中醫(yī)院制劑中心提供。鹽酸二甲雙胍片（中美上海施貴寶制藥有限公司提供）。高脂高糖飼料:南京盛民科研動物養(yǎng)殖場提供。鏈脲佐菌素（STZ）：美國Sigma公司。大鼠葡萄糖測試盒（由上海復(fù)興長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供），TNF-α、IL-6測試盒（由南京建成生物工程研究所提供）。羅氏卓越金銳血糖試紙。

1.3 儀器 奧林巴斯AU400全自動生化分析儀，BioTek Cytation3酶標(biāo)儀，羅氏卓越型血糖儀等。

2 方法

2.1 造模、分組與給藥 所購大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為造模組及空白組。造模組大鼠高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周，禁食12 h，腹腔注射新鮮配制的STZ溶液（45 mg/kg）以誘導(dǎo)T2DM。空白組注射同體積的檸檬酸緩沖液。給藥6 d后，剪尾取血，用血糖儀測空腹血糖（FBG）值，大于16.7 mmol/L為造模成功。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為：模型組、黃連降糖片9個不同劑量組（按照成人1次1片-9片，每日3次的服用劑量分組）、陽性對照組（鹽酸二甲雙胍片）。按照人和大鼠間體表面積折算的等效劑量比值（0．018）計(jì)算大鼠給藥量，最終確定黃連降糖片灌胃給藥量分別為生藥0.081、0.162、0.243、0.324、0.405、0.486、0.567、0.648、0.729 g/kg，陽性對照組予鹽酸二甲雙胍片0.2 g/kg，模型組與空白組給以等劑量的蒸餾水。

2.2 指標(biāo)檢測 實(shí)驗(yàn)期間，每周剪尾取血，用血糖儀測量FBG（禁食12 h，不禁水）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠禁食12 h后稱體質(zhì)量，以水合氯醛（30 mg/kg）腹腔注射麻醉，大鼠仰臥位固定，沿腹正中線打開腹腔，經(jīng)腹主動脈取血，3 500 r/min離心15 min，分離血清，置-40℃冰箱保存。采用生化儀測FBG，酶標(biāo)儀測 TNF-α、IL-6水平。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 黃連降糖片對T2DM大鼠血清TNF-α、IL-6的影響 灌胃治療4周后，模型組TNF-α、IL-6明顯高于空白組（P＜0．05），黃連降糖片不同劑量組，除1片組外，其余劑量組大鼠的TNF-α、IL-6水平均明顯低于模型組（P＜0．05）。說明糖尿病大鼠存在TNF-α、IL-6的升高，足量的黃連降糖片能降低2型糖尿病大鼠的血清TNF-α、IL-6含量。見表1。

3.2 不同劑量黃連降糖片對T2DM大鼠FBG的影響 造模成功后，模型組FBG明顯高于正常組（P＜0.05）。造模成功后，黃連降糖片不同劑量組與模型組FBG 無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。灌胃1、2、3周后，黃連降糖片除1、2片組外，其余組FBG明顯低于模型組（P＜0.05）。灌胃4周后黃連降糖片除1片組外，其余組FBG明顯低于模型組空腹血糖（P＜0.05）。見表2。

4 討論

糖尿病患者長期痰濕不化、血瘀不行，導(dǎo)致炎癥的發(fā)生，隨著炎癥的加劇，一些病理產(chǎn)物如痰瘀等也逐漸增多。炎癥因子既是病理產(chǎn)物又是致病因素，毒邪內(nèi)盛是消渴病及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的基本病理機(jī)制。IL-6和TNF-α是與糖尿病相關(guān)的炎癥因子，其中IL-6可促進(jìn)超敏C-反應(yīng)蛋白等急性時相蛋白的合成，促進(jìn)炎癥和胰島素抵抗（IR）的發(fā)生，并且在控制體重指數(shù)及體脂含量后，IL-6水平仍然與IR呈正相關(guān)，另外IL-6還可誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡，對β細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)[3]。TNF-α與糖尿病的相關(guān)性主要表現(xiàn)在：TNF-α可減少胰島素受體底物-1（IRS-1）的表達(dá)，并抑制IRS-1與胰島素受體結(jié)合；可減少葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4（GLUT4）的表達(dá)，直接導(dǎo)致IR，可促進(jìn)脂解，使游離脂肪酸增加，肌細(xì)胞糖代謝降低，肝糖原合成增多，間接引起IR[4]。祁燕等[5]發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠血清中的 TNF-α、IL-6、C-反應(yīng)蛋白和纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）均明顯高于空白對照組。邢茂娟等[6]研究表明在肥胖的T2DM患者血漿TNF-α與糖化血紅蛋白呈正相關(guān)，血漿IL-6與空腹血糖呈正相關(guān)。崔思遠(yuǎn)等[7]認(rèn)為高血糖可通過氧化應(yīng)激反應(yīng)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，增加炎癥因子的分泌，高血糖與炎癥反應(yīng)是相互作用的過程。

表1 黃連降糖片不同劑量組對大鼠TNF-α、IL-6的影響（x±s）Tab.1 Effect of different dosage groups of Huanglian Jiangtang tablets on TNF-α and IL-6 level in rats（x±s）

表2 黃連降糖片不同劑量組對大鼠FBG水平的影響（x±s）Tab.2 Effect of different dosage groups of Huanglian Jiangtang tablets on FBG level in rats（x±s）

黃連降糖片以黃連為君藥，配伍酒大黃、知母、麥門冬、生地、牡丹皮等清熱滋陰、活血化瘀為主的中藥組成，方中的藥物除具有清熱解毒作用外，現(xiàn)代藥理研究還表明其具有抗病原微生物、抗炎、免疫抑制和調(diào)節(jié)血糖等作用。研究發(fā)現(xiàn)，黃連素有降低糖尿病患者或糖尿病模型大鼠IL-6、TNF-α的作用[7-8]，中藥黃連復(fù)方及加減配伍可通過抑制炎癥因子（IL-6、TNF-α）的表達(dá)而發(fā)揮降糖作用，如三黃湯[9]、黃連蒼薏四味方及其配伍[10]。本研究顯示，一定量黃連降糖片有顯著降糖作用，且能顯著降低TNF-α、IL-6水平，故證實(shí)黃連降糖片具有較好的抗炎作用，其降糖機(jī)制可能與抗炎作用有關(guān)。

[1] 閆 鏞，李 霄，李亞歡，等.黃連降糖片干預(yù)糖調(diào)節(jié)受損患者糖脂代謝的臨床研究[J].中醫(yī)研究，2016,29(5):27-30.

[2] 閆 鏞，王銀珊，李亞歡，等.黃連降糖片干預(yù)糖調(diào)節(jié)受損患者胰島素抵抗的臨床研究[J].四川中醫(yī)，2016,34(5)：94-96.

[3] 張黎明，高 凌.炎癥細(xì)胞因子在2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué),2016,45(8):1113-1116.

[4] 王 穎，王興亞.抗炎藥物用于2型糖尿病預(yù)防與治療的研究進(jìn)展[J].藥學(xué)進(jìn)展,2016,40(3):178-188.

[5] 邢茂娟，袁志剛，張海文，等.Visfatin、LI-6、TNF-α與2型糖尿病的相關(guān)研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,24(29):4908-4911.

[6] 崔思遠(yuǎn)，李 芳.IL-6與2型糖尿病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2012,24(11):1051-1054.

[7] 戴建峰,陳美娟，郭 睿，黃連素對2型糖尿病大鼠CRP、LI-6、TNF-α、脂聯(lián)素的影響[J].中國傷殘醫(yī)學(xué)，2014,22(5):34-36.

[8] 孟曉軍，曾映娟，孔紅娟，等.黃連素對新診斷2型糖尿病患者內(nèi)皮功能、白介素-6、腫瘤壞死因子-α的影響[J].中國慢性病預(yù)防與控制，2011,19(5):504-508.

[9] 葉麗芳，王 旭，尚文斌，等.三黃湯對肥胖2型糖尿病胰島素抵抗和炎癥因子的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013,19(7):289-292.

[10]翁 捷，頓文亮.黃連蒼薏四味方及其配伍對2型糖尿病大鼠血糖、血脂及血清炎性因子水平的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2017,26(1):18-20.