兒童急性髓細胞性白血病中B淋巴細胞瘤-2基因和P-糖蛋白表達的臨床價值

(鄭州市第一人民醫(yī)院，河南 鄭州 450004)

兒童急性白血病是兒童常見惡性腫瘤之一，對患兒的生命健康安全造成了嚴重威脅[1]。目前，急性白血病的發(fā)病機制不明確。B淋巴細胞瘤-2基因簡稱(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)屬于凋亡抑制基因，與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關系密切[2]。P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是經(jīng)典的耐藥蛋白[3]。研究[4-5]證實，Bcl-2和P-gp均可導致包括急性白血病在內(nèi)的惡性腫瘤的耐藥。本研究為進一步探討兒童急性髓細胞性白血病的發(fā)病和耐藥機制，采用免疫組化S-P法檢測兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中Bcl-2和P-gp蛋白的表達，并以非惡性血液病患兒作為對照，現(xiàn)將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料入組鄭州大學第一附屬醫(yī)院、鄭州市第一人民醫(yī)院2016年1月至2018年1月收治的經(jīng)病理證實的兒童急性髓細胞性白血病100例，其中男74例，女26例；年齡1.5～13.3歲，中位年齡6.9歲；所有患兒均為初診未治患兒。并選擇同期住院的非惡性血液病患兒50例作為對照，其中男31例，女19例；年齡1.8～13.0歲，中位年齡7.2歲；免疫性血小板減少性紫癜21例，缺鐵性貧血18例，原發(fā)性血小板減少11例。2組患兒的性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會的審核通過，入組患兒家屬也均已簽署知情同意書。

1.2主要試劑Bcl-2單克隆抗體購自美國SAB公司；P-gp單克隆抗體購自美國Biolegend公司；S-P免疫組化試劑盒購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。

1.3免疫組化S-P法檢測兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中Bcl-2和P-gp蛋白的表達[6-7]采用免疫組化S-P法檢測100例兒童急性髓細胞性白血病和50例非惡性血液病患兒骨髓細胞中Bcl-2和P-gp的表達。具體方法：1)首先提取骨髓單個核細胞，并用質(zhì)量分數(shù)4%多聚甲醛固定；2)常規(guī)S-P免疫組化步驟檢測骨髓單個核細胞中Bcl-2和P-gp蛋白的表達，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4免疫組化結果判讀[6-7]Bcl-2和P-gp蛋白免疫組化結果均采用半定量法進行判讀。每張切片均隨機選取5個高倍鏡(×400)視野，分別按照染色強度和陽性細胞比例進行評分，然后兩者乘積作為結果，0～1分為(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中等陽性(++)，6～7分為強陽性(+++)，其中陰性(-)、弱陽性(+)為陰性結果，中等陽性(++)、強陽性(+++)為陽性結果。

1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析，Bcl-2和P-gp蛋白的陽性表達率等計數(shù)資料用百分數(shù)表示，比較用χ2檢驗，Bcl-2和P-gp蛋白的相關性采用Spearman相關分析法分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1不同患兒骨髓細胞中Bcl-2和P-gp蛋白表達的比較100例兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中Bcl-2和P-gp的陽性表達率分別為72.00%(72/100)和44.00%(44/100)，高于非惡性血液病患兒的4.00%(2/50)和6.00%(3/50)，差異均有統(tǒng)計學意義(χ2=61.664、22.371，P均<0.001)。

2.2兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中Bcl-2和P-gp蛋白表達的相關性100例兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中Bcl-2和P-gp的表達呈正相關關系(rs=0.373，P<0.001)。見表1。

表1 兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中Bcl-2和P-gp蛋白表達的相關性 n

注：rs=0.373，P<0.001

3 討論

兒童急性白血病是兒童常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，一旦發(fā)病則會對患兒的生命健康安全造成嚴重威脅[1]。兒童急性白血病的治療目前多以化療和骨髓移植等為主[8]。然而隨著化療的進行，大多數(shù)患兒會出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，因此，兒童急性白血病的發(fā)病和耐藥機制的研究成為了近年來研究的熱點。而Bcl-2和P-gp均可導致包括急性白血病在內(nèi)的惡性腫瘤的耐藥，是耐藥機制形成過程中的關鍵蛋白[9-10]。鄭轉珍等[11]的研究證實，兒童急性白血病骨髓細胞中Bcl-2存在高表達，且與髓外浸潤和患兒預后有關。饒若等[12]的研究證實，兒童急性白血病骨髓細胞中P-gp存在高表達。本研究結果顯示，100例兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中Bcl-2和P-gp的陽性表達率分別為72.00%和44.00%，高于非惡性血液病患兒的4.00%和6.00%，差異均有統(tǒng)計學意義(χ2=61.664、22.371，P均<0.001)。100例兒童急性髓細胞性白血病骨髓細胞中Bcl-2和P-gp的表達呈正相關關系(rs=0.373，P<0.001)。總之，兒童急性髓細胞性白血病的骨髓細胞中存在Bcl-2和P-gp蛋白的高表達，這可能有助于兒童急性髓細胞性白血病的診斷和預后判斷。