廣金錢草不同變異類型產量和質量的研究△

唐曉敏，程軒軒，張春榮，梅凌峰，楊全*

(1.廣東藥科大學 中藥學院，廣州 510006；2.國家中醫藥管理局 嶺南藥材生產與開發重點研究室，廣州 510006；3.國家中藥材產業技術體系 廣州綜合試驗站，廣州 510006；4.廣東省南藥規范化種植與綜合開發工程技術研究中心，廣州 510006)

廣金錢草Desmodiumstyracifolium(Osbeck)Merr.為豆科山螞蝗屬(Desmodium)植物，以干燥地上部分入藥，具有利濕退黃、利尿通淋的功效，主要用于治療黃疸尿赤、熱淋、石淋、小便澀痛、水腫尿少等癥[1]。隨著廣金錢草的廣泛應用，其年消耗量越來越大，野生資源不能滿足人們醫療保健的需要和制藥企業對中藥材原料的需求。開展人工種植，是緩和市場供求矛盾行之有效的方法，而進行優良種質篩選是獲得優質高產藥材的有效途徑。但廣金錢草以種子繁殖，栽培過程中發現群體中存在豐富的變異，這些變異類型在化學成分及產量方面是否存在差異未見相關報道。本實驗以栽培條件一致的當年生廣金錢草為研究對象，測定分析不同變異類型的產量及總黃酮、多糖、夏佛塔苷含量。揭示不同變異類型與廣金錢草產量、質量的關系，篩選優良變異類型，為廣金錢草品種選育奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 變異類型的篩選及樣品處理

選擇栽培廣東藥藥科大學實驗當年生廣金錢草，由廣東藥科大學楊全教授鑒定為廣金錢草D.styracifolium。課題組經過調查發現，廣金錢草在植株形態上存在明顯差異，本文在田間調查的基礎上，將廣金錢草歸類為4種變異類型(表1)，不同變異類型莖表皮顏色、莖表皮毛的狀態上存在差異。本研究對每個變異類型選取30株，采收地上部分，曬干、切段、打粉為藥材分析樣品。

表1 廣金錢草不同變異類型形態特征

1.2 檢測項目

1.2.1 總黃酮含量測定 參考程軒軒等[2]的響應面法提取測定總黃酮含量，蘆丁作為對照品，在510 nm處測定吸光度值，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標，吸光度為縱坐標，得線性回歸方程Y=0.0147X+0.0156(r=0.999)，線性范圍4.426～53.112 μg·mL-1。

1.2.2 多糖含量測定 參考程軒軒等[3]的響應面法提取測定多糖含量，葡萄糖作為對照品，在490 nm處測吸光度值，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標，吸光度Y為坐標，得線性回歸方程Y=53.243X+0.003 9(r=1)，線性范圍3.000～15.000 μg·mL-1。

1.2.3 夏佛塔苷含量測定 參考2015版《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)的夏佛塔苷測定HPLC條件及標準曲線的制備：流動相為甲醇-水(32：68)；流速0.8 mL·min-1；柱溫：35 ℃；檢測波長：272 nm；進樣量：5 μL。以夏佛塔苷進樣量X(μL)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=2 171.2X-5 623.2(r=0.999 9)。線性范圍75.4～980.2 ng。

2 結果與分析

2.1 廣金錢草不同變異類型農藝性狀及產量分析

通過表2可以看出，不同變異類型廣金錢草在株高、地徑、分枝數沒有顯著差異，株高的變異范圍在68.80～77.03 cm，地徑變異范圍在7.56～7.74 mm，分枝數變異范圍在6.64～8.70條。而單株產量變化較大，在60.24～70.69 g，含量最高的是紫紅莖柔毛近貼生型，是綠莖柔毛直立型的1.17倍(P<0.05)。

表2 廣金錢草不同變異類型農藝性狀及產量分析

注：表中小寫字母表示P值0.05水平差異顯著。

2.2 廣金錢草不同變異類型化學成份含量比較

分別對4種廣金錢草變異類型中葉、莖及混合樣品的總黃酮、多糖、夏佛塔苷含量進行了測定(表3)，方差分析結果表明，不同變異類型之間，存在一定的差異。其中，以總黃酮含量差別最大，葉、莖、莖葉混合樣品均達到了顯著水平，混合樣品相差1.43倍(P<0.05)。多糖含量和夏佛塔苷含量未表現出顯著差異。通過對莖、葉含量的分析表明，廣金錢草總黃酮和夏佛塔苷含量以葉片含量最高，多糖含量以莖含量最高。

表3 廣金錢草不同變異類型藥材化學成份含量比較 mg·g-1

注：表中小寫字母表示P值0.05水平差異顯著。

2.3 廣金錢草不同變異類型單株化學成份含量比較

廣金錢草不同變異類型的單株藥材中總黃酮、夏佛塔苷含量差異顯著(表4)，兩種化學成份含量變化趨勢相同，紫紅莖柔毛貼生型含量最高，綠莖柔毛直立型含量最低，總黃酮含量最高是最低的1.56倍(P<0.05)，夏佛塔苷含量最高是最低的1.37倍(P<0.05)。

表4 廣金錢草不同變異類型單株化學成份含量比較 mg

注：表中小寫字母表示0.05水平差異顯著。

3 討論

3.1 廣金錢草變異類型與藥材產量

栽培廣金錢草主要依靠種子繁殖，存在豐富的變異分化，本文以人工栽培廣金錢草群體中篩選的4個變異明顯的個體為實驗材料開展了研究。結果表明，不同變異類型廣金錢草藥材單株產量存在顯著差異，表現為紫紅莖柔毛近貼生型>紅莖柔毛直立型>翠綠莖柔毛直立型>綠莖柔毛直立型。說明廣金錢草表型變異影響了產量的積累，為品種選育提供了新材料。

3.2 廣金錢草變異類型與藥材質量

夏佛塔苷是2015版《中國藥典》廣金錢草的主要活性成分，總黃酮、多糖是重要的有效成分，具有多種藥理作用[4-5]，三者含量的高低可以作為評判廣金錢草藥材質量優劣的指標之一。研究結果表明，總黃酮和夏佛塔苷含量在不同變異類型間存在一定差異，均表現為紫紅莖柔毛近貼生型、紅莖柔毛直立型、翠綠莖柔毛直立型顯著高于綠莖柔毛直立型，說明這三種類型可以作為優良變異類型定向培育高夏佛塔苷、高總黃酮廣金錢草栽培品種。

廣金錢草優良品種選育工作較為滯后，生產上沒有真正意義的良種，本實驗結果為廣金錢草選擇育種提供參考。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：44-45.

[2] 程軒軒，郭楚楚，周鳳燕，等.響應面法優化廣金錢草中總黃酮的酶法提取工藝[J].華西藥學雜志，2015，30(1)：70-73.

[3] 程軒軒，郭楚楚，鄒鳳汝，等.響應面法優化廣金錢草多糖的酶法提取工藝[J].中國現代應用藥學，2014，31(5)：544-549.

[4] 盧兗偉.廣金錢草及土大黃有效成分研究與應用.博士后研究工作報告.中國人民解放軍軍事醫學科學院，2003.

[5] 林瑤，黃鎖義，劉春媚，等.廣金錢草多糖抗氧化活性研究[J].中南藥學，2016，14(2)：130-133.