血清淀粉酶及脂肪酶參考區間適用性驗證探討

徐文波，張興鋒，葉丹，毛星星，丁怡文，馮磊

(玉溪市人民醫院，昆明醫科大學第六附屬醫院檢驗科，云南 玉溪 653100)

生物參考區間是實驗室常用的解釋檢驗報告、分析檢驗信息的基本尺度和依據，生物參考區間的確立是臨床醫學中的基本問題[1，2]。臨床檢驗的對象是患者，適宜的參考區間對疾病的預防、診斷、療效及預后判斷都有重要的意義[3，4]。建立適合本實驗室的生物參考區間，為臨床提供準確的診斷依據，對每個實驗室來說尤為必要[5，6]。根據ISO15189：2003《醫學實驗室-質量和能力的專用要求》，實驗室必須慎重建立自己的生物參考區間[7]。 血清淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LPS）是急性胰腺炎的診斷及預后判斷的常用指標。一直以來，國內實驗室常采用試劑盒或教科書提供的參考區間，由于受地域，種族、飲食、實驗室等因素的影響，導致該參考區間與實際參考區間有較大差異性，甚至影響醫學決定水平[8，9]。基于上述情況，本文對AMY、LPS的參考區間進行驗證，現報告如下。

1 資料與方法

1．1 研究對象 選取2015年10月-2016年2月來我院體檢的漢族人群782例作為研究對象，其中男364例、女性356例。研究對象均符合NCCLS C28-A2健康參考個體的設置條件[10，11]：⑴沒有任何影響檢測結果的生理指征；⑵未服用藥物或進行飲食治療；⑶發育、精神正常，無心血管、肝、腎、肺等器質性疾??；⑷3個月內無輸血和手術史；⑸婦女不在妊娠期或哺乳期；⑹無酗酒史。根據年齡將研究對象分組，16～44歲為青年組，45～59歲為中年組，≥60 歲為老年組[12，13]。

1．2 儀器及試劑 德國羅氏Cobas8000全自動生化分析儀及配套AMY、LPS試劑及校準品、質控品，AMY、LPS 試劑批號分別為 15806909、12961097，校準品批號為1607931，質控品批號為16603197。

1．3 血清樣本采集 采用黃色分離膠-促凝劑生化真空采血管，采集外周靜脈血3．5ml，室溫靜置20min后，3500r/min離心5min（無脂血、溶血標本）。

1．4 離群值剔除 離群值剔除采用DIXON方法[14]。首先將檢測結果按照由大到小的順序排序并計算極差(R)，然后分別計算最大值和最小值與其相鄰數值之差（Dmax，Dmin），若 Dmax/R≥1/3 或 Dmin/R≥1/3，則將最大值或最小值視為離群值予以剔除；將余下數據重復前述步驟進行離群值檢驗，直至剔除所有離群值。

1．5 參考區間驗證 按照NCCLS C28-A2要求，收集40份漢族健康個體標本，男、女各20份，檢測AMY、LPS水平進行參考區間驗證，若檢測結果95%在現用參考區間以內，≤5%檢測結果在現用參考區間以外，判定該參考區間適用[15，16]。

1．6 統計學方法 采用SPSS 17．0進行統計學處理，兩組之間比較采用t檢驗，三組以上數據比較采用單因素方差分析、兩兩比較Lsd-t檢驗，P＜0．05具有統計學意義。

2 結果

2．1 漢族健康成人血清AMY、LPS生物參考區間DIXON方法去除離群值后，720份血清樣本，AMY結果為18～107U/L，正態性檢驗顯示偏度系數為-0．107、峰度系數為 0．091、均值為 62．5U/L、標準差為 21．0U/L，正態性檢驗 P＞0．05，符合正態分布，見圖1。LPS結果為15-57U/L，經正態性檢驗，偏度系數為 0．316，峰度系數為-0．568，均值為 34．6U/L，標準差為 9．4U/L，正態性檢驗 P＜0．01，不符合正態分布，經對數轉換P＞0．05，LPS符合正態分布。見圖2。

圖1 720例漢族健康成人血清AMY頻數分布及正態曲線圖

圖2 720例漢族健康成人血清LPS頻數分布及正態曲線圖

2．2 不同性別之間血清AMY、LPS的比較 男性組、女性組之間血清AMY、LPS經t檢驗，t值（-2．705、-2．991）（P＞0．05） 差異無統計學意義， 見表1。

表1 不同性別之間血清AMY、LPS的比較（，U/L）

表1 不同性別之間血清AMY、LPS的比較（，U/L）

分組男性組女性組t樣本量（例） 血清AMY 血清LPS 364 356 60．4±20．5 64．6±21．4-2．705 33．5±9．2 35．7±9．5-2．991

2．3 青年組、中年組、老年組不同年齡段之間血清AMY、LPS的比較 不同年齡段之間血清AMY、LPS 經方 差分 析 ，F=0．463、0．332，P=0．630、0．718，P＞0．05 差異無統計學意義），見表 2。

2．4 血清AMY、LPS參考區間確認 血清AMY結果 62．5U/L， 均值 21．0U/L， 生物參考區間是 21～104U/L。血清 LPS經對數轉換 P＞0．05，符合正態分布，血清 LPS 結果 34．6U/L，均值 9．4U/L，生物參考區間是 16．2～53．0U/L。

表2 不同年齡段之間血清AMY、LPS的比較（，U/L）

表2 不同年齡段之間血清AMY、LPS的比較（，U/L）

分組青年組中年組老年組樣本量（例） 血清AMY 血清LPS 258 226 236 62．1±20．8 62．2±20．7 63．9±21．9 34．4±9．4 34．7±9．2 35．0±9．5

2．5 參考區間驗證 我室目前使用試劑盒提供參考區間，AMY參考區間28～100U/L，LPS參考區間5．6～51．3U/L。 選取 40 名健康參考個體，AMY 試劑盒提供參考區間符合率97．5%，我室參考區間驗證符合率100%；LPS試劑盒考區間符合率97．5%、我室參考區間驗證符合率100%，見表3。

表3 40名健康漢族AMY、LPS生物參考區間驗證

3 討論

本文對720例健康參考個體的AMY、LPS水平進行了統計學處理。經t檢驗男性組、女性組之間血清 AMY、LPS 經檢驗 t值（-2．705、-2．991）（P＞0．05）差異無統計學意義；不同年齡段之間血清AMY、LPS經方差分析，方差齊性檢驗各組間方差齊 （F=0．463、0．332，P=0．630、0．718）P＞0．05 差異無統計學意義。我室血清生物參考區間是21～104U/L。血清 LPS經對數轉換 P＞0．05，符合正態分布，血清 LPS，生物參考區間是 16．2～53．0U/L。

3．2 通過對本地區40名健康參考個體AMY、LPS生物參考區間的驗證，AMY、LPS試劑盒參考區間驗證符合率97．5%，我室參考區間驗證符合率100%，均符合≤5%檢測結果在現用參考區間以外的規定要求，可以使用文獻提供的生物參考區間。本地區為多民族聚居區域，彝族、傣族、哈尼族、回族等為本地區人口最多的少數民族，而彝族、傣族、哈尼族又有飲酒的習慣。在臨床使用中，輔助診斷急腹癥、急性胰腺等胰腺疾病時應考慮民族、地域等影響因素，結合臨床體征、影像學資料、同時聯合使用實驗室檢驗指標。

3．3 本文的局限性是參考個體的選擇，在很多情況下，尤其是老人，一般不可能獲得完全健康的樣本。因此，參考區間行業標準在本地區人群的適用性驗證非常重要。

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