某地區黏液型與非黏液型銅綠假單胞菌的檢測及其臨床意義

潘俊均，修寧寧，鄧沛汶，莊云菁，朱雪云，溫海生，隋洪

(東莞康華醫院檢驗科，廣東 東莞 523000)

銅綠假單胞菌是一種可引起人類各種感染性疾病的院內常見的條件致病菌，可引起囊性肺纖維化、慢性支氣管炎、支氣管擴張并感染等癥狀[1]。近年來關于黏液型銅綠假單胞菌感染的報道也越來越多，黏液型銅綠假單胞菌是銅綠假單胞菌在其黏膜表面產生大量多糖藻酸鹽的物質，從而持續定植、形成生物膜。而藻酸鹽會在呼吸道局部與藻酸鹽抗體產生抗原抗體反應，在細胞因子[2，3]的調控下可介導炎癥反應。現對2014年1月-2015年12月本院住院患者合格痰標本中分離出黏液型與非黏液型銅綠假單胞菌及藥敏結果進行對比和回顧性分析，現整理報告如下。

1 材料與方法

1．1 標本來源與采集 2014年1月-2015年12月間本院住院患者合格晨痰標本用無菌痰杯留樣后及時送檢。

1．2 儀器與試劑 儀器：全自動細菌鑒定儀VITEK 2 Compact（法國生物梅里埃）。試劑：微生物培養所用培養平板選用法國梅里埃，細菌鑒定卡選用法國梅里埃配套卡，手工藥敏紙片選用英國OXOID。質控菌株大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853均購自廣東省臨床檢驗中心。所有試劑均在有效期內使用，儀器室內質控均在控。

1．3 方法 所有患者的痰標本的接種，培養24～48h后，對于非黏液型銅綠采用常規的標準操作程序進行鑒定也藥敏；對黏液型銅綠假單胞菌則因為其不易在鹽水中研磨的特點，實驗采用陳東科[4，5]等的經驗總結，即用純培養接種營養肉湯制成菌懸液，在35℃孵育4～6h，然后吸取菌懸液調節濁度0．5麥氏單位菌懸液，進行菌種鑒定和K-B法涂布后培養48h后手工量取藥敏直徑。以上各步驟均嚴格按全國臨床檢驗操作規程[6]及CLSI-2013年版藥敏標準進行準規范化操作[7]，對鑒定和藥敏結果進行判讀。

1．4 統計學分析 所有實驗數據采用惠橋檢驗系統，WHONET5．6 和 SPSS 16．0 統計學軟件進行統計學分析。

2 結果

我院住院患者合格痰標本中分離出88株黏液型銅綠假單胞菌與320株非黏液型銅綠假單胞菌菌株科室來源及構成比，詳見表1；黏液型與非黏液型銅綠假單胞菌對常見抗生素的體外藥敏試驗結果及差別，詳見表2。

3 討論

銅綠假單胞菌是醫院感染重要的條件致病菌，可引起呼吸道、泌尿道、腸道、血液、手術切口、皮膚軟組織等多個部位感染，目前臨床上銅綠假單胞菌是可以簡單地分為非黏液型和黏液型。近年來關于黏液型銅綠假單胞菌感染的報道有明顯增加的趨勢。尤其是在呼吸內科等重點科室，黏液型銅綠假單胞菌較易引起呼吸科患者囊性肺纖維化、慢性支氣管炎、支氣管擴張并感染等癥狀，應引起臨床和實驗室人員足夠的重視。

表1 銅綠假單胞菌菌株科室來源及構成比（%）

表2 某院粘液型與非粘液型銅綠假單胞菌對常見抗生素敏感性

本次實驗結果顯示，黏液型較非黏液型銅綠假單胞菌對常見抗生素敏感，尤其是多黏菌素B，碳青霉素類，哌拉西林/他唑巴坦，阿米卡星等的敏感率均在90%以上，與之前所報道[8，9]的黏液型銅綠假單胞菌的藥敏相近。本次統計的黏液型銅綠的藥敏與李耘[10]等報道的非黏液型銅綠假單胞菌的耐藥數據相對比，黏液型的明顯比非黏液型的銅綠假單胞菌對抗生素體外試驗敏感。但是臨床治療過程中體內黏液型銅綠假單胞菌對抗生素藥敏卻容易出現耐藥，主要是黏液型銅綠假單胞菌在其黏膜表面產生大量多糖藻酸鹽的物質，形成生物膜其可阻止抗生素殺滅生物被膜中細菌，從而造成感染反復發作，導致治療失效。也使機體內黏液型銅綠假單胞菌對某些抗菌藥物產生耐藥。根據小林宏行和曹春蘭等報道[11-13]大環內酯類藥物對黏液型銅綠假單胞菌的生物膜形成有明顯抑制作用，與其他抗生素聯合使用，可以達到明顯的治療效果。

了解黏液型銅綠假單胞菌容易形成生物膜的特點，可以較充分理解黏液型與非黏液型銅綠假單胞菌對常見抗生素藥物敏感性間存在著不同程度的差別，臨床和實驗室方面應引起足夠的重視，加強細菌生物被膜方面的學習，重視大環內酯類與其他抗生素的聯合應用，可以為臨床控制銅綠假單胞菌感染提供依據。

[1]Hoiby N，Doring G，Schiotz PO．The role of immunized complexes in the pathogenesis of bacterial infections[J]．Ann Rev Microbiol，1984，40(1)：29-53

[2]Ohatami H．Study on the pathogenetic role of alginate produced by mucoid Pseudomonas aerugiosa indiffuse[J]．J Jpn Infect Dis，1995，69(5)：552-567．

[3]方向群，劉又寧．藻酸鹽在銅綠假單胞菌肺部感染中的致病作用及與細胞因子的關系 [J]．中華醫院感染學雜志，2004，12(2)：126-129．

[4]陳東科，孫長貴．實用臨床微生物學檢驗與圖譜[M]．北京：人民衛生出版社2011：770

[5]孫敬，余理智，鄧林強，等．黏液性銅綠假單胞菌藥敏實驗不同時間段結果分析[J]．江西醫學檢驗，2003，21(6)：440-443．

[6]葉應嫵，王毓三，申子瑜主編．全國臨床檢驗操作規程[M]．第3版．南京：東南大學出版社，2006：890-912．

[7]linical and Laboratory Standards Institute．Performance standards for antimicrobial susceptibility testing：twenty-three informational supplement．Document M100-S23．Wayne，PA：CKSI；2013．

[8]陳近，楊雙雙，嚴立，等．黏液型銅綠假單胞菌對抗菌藥物體外敏感性變遷[J]．中國醫院感染學雜志，2016，26(12)：2641-2643．

[9]李玉棟，張巧梅，董永勝，等．產黏液型銅綠假單胞菌藥敏方法的探討及其藥敏結果分析[J]．2013，10(30)：242-243．

[10]李耘，呂媛，薛峰，等．中國細菌耐藥監測研究2013至2014年非發酵革蘭陰性菌監測報告 [J]．中華檢驗醫學雜志，2016，39(2)：130-138．

[11]小林宏行．細菌生物被膜的基礎與臨床[J]．中國臨床藥理學雜志，1999，15：299-307．

[12]周愛春．黏液型銅綠假單胞菌和非黏液型銅綠假單胞菌的感染分布及耐藥性比較[J]．吉林醫學，2016，37(9)：2279-2281．

[13]曹春蘭．大環內酯類聯合左氧氟在治療結核病人引起的黏液型銅綠假單胞菌感染的臨床研究 [J]．檢驗醫學與臨床，2014，25(5)：45-46．