草魚出血病綜合防控技術(shù)

陳萬清,時(shí)云朵,權(quán)可艷,胡 波，梁先進(jìn),葉小斌(.四川省水產(chǎn)學(xué)校，成都 郫都 670；.四川省綿竹市水精靈漁業(yè)服務(wù)中心，四川 綿竹 6800；.四川省自貢市大安區(qū)農(nóng)業(yè)局，四川 自貢 6400)

1 草魚出血病的癥狀

草魚出血病癥狀復(fù)雜，可在體內(nèi)外出現(xiàn)一系列癥狀群，但最基本的癥狀為有關(guān)器官或組織的充血和出血。實(shí)際上，上述癥狀群大多不同時(shí)出現(xiàn)，按其癥狀和病理變化的差異，可分為3個(gè)類型，可同時(shí)或交替出現(xiàn)。

1.1 紅肌肉型

主要表現(xiàn)為肌肉明顯出血，呈鮮紅色，鰓因失血而蒼白。多見于5～10cm的小草魚種。

1.2 紅鰭紅鰓蓋型

主要表現(xiàn)為鰭基、鰓蓋嚴(yán)重充血，頭頂、眼眶、口腔等處有明顯出血點(diǎn)，多見于10cm以上的大草魚種。

1.3 腸炎型

主要表現(xiàn)為腸道嚴(yán)重充血，全部或局部呈鮮紅色，有別于細(xì)菌性腸炎的紫紅色，內(nèi)臟點(diǎn)狀出血，體表亦可見出血點(diǎn)。各種規(guī)格的草魚種均可見到。

2 流行情況

草魚出血病流行于每年6～9月，水溫升高至25℃以上即開始流行。主要為害當(dāng)年5～20cm的草魚種，死亡率一般為30%～50%，高的可達(dá)60%～80%，危害極為嚴(yán)重，青魚種與麥穗魚亦可感染。

3 草魚出血病的診斷

草魚出血病的診斷可以采取為常規(guī)診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷2種方法。

3.1 常規(guī)診斷

常規(guī)診斷一是對(duì)發(fā)病魚塘進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查(包括調(diào)查發(fā)病魚塘的環(huán)境、了解池塘水質(zhì)狀況、調(diào)查飼養(yǎng)管理情況、觀察發(fā)病魚在魚池狀態(tài)等)；二是對(duì)病魚體內(nèi)外進(jìn)行肉眼觀察；三是對(duì)發(fā)病魚進(jìn)行鏡檢(主要目的是檢查魚體內(nèi)外寄生蟲)；四是根據(jù)危害魚的種類及規(guī)格、發(fā)病時(shí)的水溫、發(fā)病率和死亡率等流行情況來進(jìn)行綜合判定。

3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

草魚出血病實(shí)驗(yàn)室診斷主要采用三重PCR技術(shù)(即針對(duì)草魚呼腸孤病毒各類型毒株的保守區(qū)域設(shè)計(jì)的3對(duì)引物，同時(shí)對(duì)樣品抽提的病毒RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并對(duì)該cDNA進(jìn)行體外聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè))，此技術(shù)僅需普通PCR儀和電泳儀即可檢測(cè)，方便、準(zhǔn)確、快速，且具有良好的敏感性、特異性和穩(wěn)定性。德陽站送檢樣品經(jīng)三重PCR檢驗(yàn)結(jié)果呈陽性，結(jié)果如圖1所示；將瓊脂糖凝膠電泳上的目的片段進(jìn)行膠回收、測(cè)序獲得DNA序列，在GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行Blast比對(duì)，比對(duì)結(jié)果顯示德陽站送檢樣品的基因序列與草魚呼腸孤病毒-HZ08片段6(Grass carp reovirus strain GCRV‐HZ08 segment 6)的基因序列相似度為100%，結(jié)果如圖2所示，表明德陽站送檢樣品是基因Ⅱ型草魚呼腸孤病毒感染。

圖1 德陽綜合試驗(yàn)站送檢樣品瓊脂糖凝膠電泳

圖2 測(cè)序比對(duì)結(jié)果

4 草魚出血病的綜合防治技術(shù)

4.1 預(yù)防

4.1.1 魚種放養(yǎng)前，采用生石灰徹底清塘 池塘水深1m時(shí)，生石灰用量為125～150kg/667m2；排干池水(塘底留水10cm)時(shí)，生石灰用量為60～80kg/667m2。清塘后，水溫15～20℃時(shí)，7～10d放養(yǎng)魚種。

4.1.2 免疫預(yù)防 魚種放養(yǎng)前，對(duì)規(guī)格50～100g草魚種人工注射草魚出血病滅活疫苗。考慮到草魚出血病常常與草魚“三病”(赤皮、腸炎、爛鰓病)一起迸發(fā)的特點(diǎn)，可與草魚出血病疫苗同時(shí)注射草魚三病三聯(lián)疫苗。為防止注射導(dǎo)致的細(xì)菌性感染，可在注射液中添加抗生素。近年，國(guó)家大宗淡水魚類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系德陽綜合試驗(yàn)站將該體系病防崗位科學(xué)家團(tuán)隊(duì)研發(fā)疫苗在生產(chǎn)中進(jìn)行示范，疫苗注射劑量及配合使用情況主要有以下2種方式：一是出血病疫苗單用，每瓶(1000尾使用量)，用200mL注射用水稀釋，加0.5g頭孢噻呋，每尾肌肉注射0.2mL；二是出血病疫苗和三聯(lián)苗和用，每瓶(1000尾)出血病疫苗用三聯(lián)苗(200mL，1000尾)稀釋，加0.5g頭孢噻呋，每尾肌肉注射0.2mL。

4.1.3 適時(shí)開動(dòng)增氧機(jī) 晴天的中午開動(dòng)增氧機(jī)，減少底層氧債，改善池水溶氧狀況。

4.1.4 使用微生態(tài)制劑 定期向池塘施用微生態(tài)制劑，改良池塘底質(zhì)和水質(zhì)。水產(chǎn)上常用的微生態(tài)制劑主要有光合細(xì)菌、芽孢桿菌、硝化細(xì)菌、反硝化細(xì)菌、EM菌等。主要作用為降低水體氨氮、亞硝酸鹽，抑制病原菌繁殖等。

4.1.5 定期補(bǔ)充碳源 利用“生物絮團(tuán)”生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)原理，定期向池塘添加糖蜜、葡萄糖等含碳物質(zhì)。“生物絮團(tuán)”生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)是在養(yǎng)殖水體零換水的基礎(chǔ)上，當(dāng)水體氨氮含量高時(shí)，通為人為添加碳源，調(diào)節(jié)水體碳氮比，促進(jìn)水體異養(yǎng)菌大量繁殖，利用細(xì)菌同化無機(jī)氮，將水體的的氨氮等有害氮源轉(zhuǎn)化為菌體蛋白，并通過細(xì)菌將水體中的藻類、原生動(dòng)物、輪蟲及有機(jī)質(zhì)絮凝成顆粒物質(zhì)，形成“生物絮團(tuán)”，最終被濾食性和雜食性魚類利用，起到調(diào)控水質(zhì)、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)循環(huán)再利用的目的。在池塘零換水的基礎(chǔ)上，可每7～10d向池塘施入葡萄糖5kg。

4.1.6 搭建生物浮床，控制池塘總氮總磷 可以在精養(yǎng)池塘按不超過池塘總面積10%的比例搭建生物浮床。為防止草魚對(duì)浮床生物根部的攝食，可在浮床底部加一層攔網(wǎng)。浮床植物目前采用較多的是水雍菜，在5月中旬即可將育好的水雍菜苗移植到浮床上。

4.1.7 藥物預(yù)防 “血?！笔菄?guó)家大宗淡水魚類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系漁藥研發(fā)與臨床項(xiàng)目支持研發(fā)的應(yīng)用試驗(yàn)與示范產(chǎn)品，主要成分為天然綠茶粗提物，能滲透進(jìn)魚體細(xì)胞，有效阻斷草魚出血病病毒入侵魚體，具有抑制病毒復(fù)制繁殖的能力。草魚出血病發(fā)病高峰期，按每kg飼料添加“血?！?00mg，拌料投喂5～6d。

4.2 治療

當(dāng)養(yǎng)殖草魚發(fā)生病毒性出血病后，要及時(shí)采取措施治療。主要措施有：

4.2.1 水體消毒 一是發(fā)病草魚池，用聚維酮碘(含聚維酮碘10%)全池潑灑，用量為45～75mg/m3，隔日1次，連用2次。用水稀釋300～500倍后，全池遍灑；二是發(fā)病草魚池，用濃度20%的戊二醛，按水體濃度40mg/m3，隔日1次，連用2次，用水稀釋300～500倍后，全池遍灑。

4.2.2 內(nèi)服藥餌 發(fā)病草魚，飼料用“血?！?～1.5g/kg拌餌投喂，連用5～6d。

5 草魚出血病防、治實(shí)例

5.1 免疫預(yù)防

自2010年開始，國(guó)家大宗淡水魚類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系先后在廣元市白龍湖庫(kù)區(qū)、中江縣繼光水庫(kù)、綿竹市西南鎮(zhèn)、羅江縣新盛鎮(zhèn)等地為網(wǎng)箱和池塘養(yǎng)殖的草魚種進(jìn)行草魚出血病免疫示范應(yīng)用。部分免疫應(yīng)用情況及效果見表1、表2。

表1 2012年中江繼光水庫(kù)草魚出血病免疫示范效果統(tǒng)計(jì)表

表2 2017年草魚出血病免疫示范效果統(tǒng)計(jì)表

5.2 “血?！睉?yīng)用示范

綿竹養(yǎng)殖戶張仕軍池塘發(fā)生草魚病毒性出血病，發(fā)病池塘面積6*667m2，養(yǎng)殖草魚4000尾、鯉2500尾、鯽6000尾、鰱700尾、鳙400尾。從8月10日開始使用“血?！?，按每袋“血?！?500g一袋拌100kg飼料)，每天喂2次藥餌，經(jīng)過5d的藥餌治療，草魚死亡情況由開始的每天35尾降到0尾。死亡率得到有效控制。

綿竹遵道鎮(zhèn)聯(lián)合水庫(kù)文本武發(fā)病池塘面積37*667m2，養(yǎng)殖草魚20000尾、鯉5000尾、鯽30000尾、鰱4000尾、鳙2000尾。該池于8月2日發(fā)生草魚病毒性出血病，于8月15日開始使用“血?！保疵看把！?500g1袋拌100kg飼料)，每天喂2次藥餌。經(jīng)過5d的藥餌治療，草魚死亡情況由開始的每天320尾降到0尾。死亡率得到有效控制。