規(guī)模肉牛場主要疫病血清學(xué)調(diào)查報告

趙建新 ，陶金林

（1.新疆額敏縣第九師168團畜牧獸醫(yī)站 834608；2.新疆額敏縣九師獸醫(yī)站 834601）

為查明塔額墾區(qū)規(guī)模化肉牛場（161、163、164、170、167 團）飼養(yǎng)的牛疫病的感染流行狀況，2015年以來，配合兵團總站、石河子大學(xué)從五個規(guī)模化牛場以及165團夏洛來牛群采集存在流產(chǎn)、死胎、弱犢、肺炎、腹瀉等臨床表現(xiàn)的0日齡～8歲齡奶牛的血液樣品。夏洛來牛是生活在塔爾巴哈臺山深處（巴音木扎草原）。夏洛來牛，上世紀五、六十年代從國外引進，經(jīng)過60年的繁衍，已經(jīng)適應(yīng)在本地的生活環(huán)境，臨床表現(xiàn)健康。所采牛群均未免疫接種布魯氏菌病、牛病毒性腹瀉、牛傳染性鼻氣管炎、牛支原體、牛弓形蟲病、衣原體病、新孢子蟲病、牛呼吸道合胞體、副流感－3型、冠狀病毒、藍舌病、牛白血病疫苗。對自然感染狀況進行評估。

1 基本情況

1.1 布魯氏菌病

1.1.1 材料和方法：虎紅平板凝集試驗抗原 （批號：20131102）、試管凝集試驗（SAT）抗原購自（批號：20120625）。 試驗方法按照操作說明書操作。

1.1.2 結(jié)果

表1 牛布病檢測結(jié)果

1.2 牛病毒性腹瀉

1.2.1 主要試劑：Ruminant BVD/BD p80－Serum試劑盒 （批號：1－BVD－015 03－2014）購自法國 LSIVET 公司。

1.2.2 試驗原理：阻斷ELISA;試驗主要步驟:10ul血清+90ul樣品稀釋液→100ul已稀釋樣品及對照直接加至反應(yīng)板→37℃孵育1h→洗板4次→加酶標二抗100ul→37℃孵育1h→洗板4次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.2.3 檢測結(jié)果

表2 牛病毒性腹瀉抗體檢測結(jié)果

1.3 牛傳染性鼻氣管炎

1.3.1 主要試劑：IBR抗體檢測試劑盒 （批號：5－IBRS－005 10－2013）購自法國 LSIVET 公司。

1.3.2 試驗原理：阻斷ELISA;試驗主要步驟:20ul/10ul樣品及對照直接加至反應(yīng)板→37℃2h或 4℃孵育 16～18h→洗板 3次→加酶標二抗100ul→37℃孵育30min→洗板3次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.3.3 檢測結(jié)果

表3 牛傳染性鼻氣管炎抗體檢測結(jié)果

1.4 牛支原體

1.4.1 主要試劑：支原體抗體檢測試劑盒 （批號：MYC12I21 09－2013）購自瑞典SVANOVA BIOTECH公司。

1.4.2 試驗原理：阻斷ELISA;試驗主要步驟:10ul血清+90ul樣品稀釋液→100ul已稀釋樣品及對照直接加至反應(yīng)板→21℃孵育 1h→洗板 3次→加酶標二抗 100ul→21℃孵育 1h→洗板 3次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.4.3 檢測結(jié)果

表4 牛支原體抗體檢測結(jié)果

1.5 牛弓形蟲病

1.5.1 主要試劑：弓形蟲抗體檢測試劑盒（批號：20121208）購自中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.5.2 試驗原理：阻斷ELISA;試驗主要步驟:10ul血清+90ul樣品稀釋液→100ul已稀釋樣品及對照直接加至反應(yīng)板→21℃孵育 1h→洗板 3次→加酶標二抗 100ul→21℃孵育 1h→洗板 3次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.5.3 檢測結(jié)果

表5 牛弓形蟲抗體檢測結(jié)果

1.6 牛衣原體

1.6.1 主要試劑：衣原體抗體檢測試劑盒 （批號：2－ELISACHLAM－005 04－2014）購自法國 LSIVET 公司。

1.6.2 試驗原理：間接ELISA;試驗主要步驟:400倍稀釋的血清和對照各100ul加至反應(yīng)板→37℃孵育1h→洗板4次→加酶標二抗100倍稀釋100ul→37℃孵育1h→洗板 4次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.6.3 檢測結(jié)果

表6 牛衣原體抗體檢測結(jié)果

1.7 牛新孢子蟲病

1.7.1 主要試劑：新孢子蟲病抗體檢測試劑盒（批號：2-LEINEO-004）購自法國LSIVET公司。

1.7.2 試驗原理：間接ELISA;試驗主要步驟:100倍稀釋的血清和對照各100ul加至反應(yīng)板→37℃孵育1h→洗板4次→加酶標二抗100ul→37℃孵育1h→洗板4次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.7.3 檢測結(jié)果

表7 牛新孢子蟲病抗體檢測結(jié)果

1.8 牛呼吸道合胞體病毒

1.8.1 主要試劑：牛呼吸道合胞體病毒抗體檢測試劑盒（批號：2-SRSV-003）購自法國LSIVET公司。

1.8.2 試驗原理：間接ELISA;試驗主要步驟:10倍稀釋的血清和對照各100ul加至反應(yīng)板→37℃孵育1h→洗板4次→加100倍稀釋的酶標二抗100ul→37℃孵育1h→洗板4次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.8.3 檢測結(jié)果

表8 牛呼吸道合胞體病毒抗體檢測結(jié)果

1.9 3-型副流感病毒

1.9.1 主要試劑：3-型副流感病毒檢測試劑盒 （批號：2-SPIV-005）購自法國LSIVET公司。

1.9.2 試驗原理：間接ELISA;試驗主要步驟:10倍稀釋的血清和對照各100ul加至反應(yīng)板→37℃孵育1h→洗板4次→加100倍稀釋的酶標二抗100ul→37℃孵育1h→洗板4次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.9.3 檢測結(jié)果

表9 3-型副流感病毒抗體檢測結(jié)果

1.10 冠狀病毒

1.1 0.1主要試劑：冠狀病毒檢測試劑盒（批號：P07818）購自瑞典SVANOVA BIOTECH公司。

1.1 0.2試驗原理：間接ELISA;試驗主要步驟:26倍稀釋的血清和對照各104ul加至反應(yīng)板→37℃孵育1h→洗板3次→加酶標二抗100ul→37℃孵育1h→洗板3次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.1 0.3結(jié)果

1.11 藍舌病

1.1 1.1主要試劑：藍舌病檢測試劑盒 （批號：2-VETBA11-002）購自法國LSIVET公司。

1.1 1.2試驗原理：阻斷ELISA;試驗主要步驟:2倍稀釋的血清和對照各100ul加至反應(yīng)板→37℃孵育1h→洗板4次→加酶標二抗 100ul→37℃孵育 30min→洗板 3次→加底物 100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.1 1.3檢測結(jié)果：檢測血清樣品180份，未檢出陽性樣品。

1.12 牛白血病

1.1 2.1主要試劑：牛白血病檢測試劑盒（批號：P07684）購自瑞典SVANOVA BIOTECH公司。

1.1 2.2試驗原理：間接ELISA;試驗主要步驟:26倍稀釋的血清和對照各104ul加至反應(yīng)板→37℃孵育1h或21℃4h→洗板3次→加酶標二抗 100ul→37℃孵育 1h→洗板 3次→加底物100ul→21℃孵育10min→終止讀數(shù)→結(jié)果判定。

1.1 2.3檢測結(jié)果：檢測血清樣品180份，未檢出陽性樣品。

2 結(jié)論

2.1 血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，塔額墾區(qū)規(guī)模化肉牛養(yǎng)殖場檢測出布病等10個病種，且牛群中感染率較高，未檢出牛藍舌病和白血病。

2.2 此次血清學(xué)調(diào)查警醒我們應(yīng)高度重視規(guī)模養(yǎng)殖牛場疫病的綜合防控工作。

2.3 規(guī)模化養(yǎng)殖肉牛疫病高感染率的原因尚待進一步調(diào)查和分析。