鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤與微血管密度及基底膜層粘連蛋白相關性分析

賀學勤(內蒙古自治區腫瘤醫院頭頸外科，內蒙古 呼和浩特 010020)

鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤(nasal inverted papilloma，NIP)是比較常見的鼻腔鼻竇良性腫瘤，其病理上屬于良性，但臨床上有破壞周圍骨質，切除后易復發及惡變傾向，據有關文獻報導其惡變率為6%～13%，多數為鱗狀細胞癌，也可惡變為腺癌[1]。手術后腫瘤復發與手術術式及腫瘤生物學行為有關[2]。腫瘤血管生成在實體腫瘤的惡變、生長及轉移等方面至關重要，是腫瘤發生發展的基礎，而目前認為微血管密度(microvasular density，MVD)是判斷腫瘤血管生成的金標準。CD34分子是一種階段特異性白細胞分化抗原，是一種可靠的內皮細胞標記物，目前多數學者認為CD34抗體是檢驗微血管構筑的較好的方法，有較強的可重復性[3]。基底膜層粘連白(Laminin，LN)是一種大分子非膠原糖蛋白，對維持細胞外基質和基底膜的完整結構起著重要作用。研究表明，LN在介導腫瘤細胞的浸潤過程中發揮著重要的作用[4]。介于NIP的易惡變易復發的特殊性，尋找細胞因子在腫瘤發病、惡變的中的作用，找到能判定其增生活性的客觀定量指標，對該病的深入研究有重要價值，同時對臨床上能夠有效防治該病有廣泛的應用前景。

1 材料和方法

1.1標本來源收集2013年2月至2015年12月年我經病例證實的NIP標本30例，其中男25例，女5例，年齡32～72歲；平均年齡為51.9歲，腫瘤分期：按Krouse腫瘤分期法：1期 8例，2期10 例，3期 7例，4期 5例，鼻中隔偏曲矯正術后切除的下鼻甲組織10例為對照組，其中男7例，女3例，年齡16～46歲，平均年齡為27.4歲。

1.2方法所有標本均經10%福爾馬林固定，常規石蠟包埋。免疫組化染色采用s-p法。陰性對照采用PBS緩沖液代替一抗，其它步驟不變。

1.3染色結果判定LN：以基底膜染為棕黃色為陽性信號。基底膜呈連續、完整、均勻的線狀結構為(+++)，為陽性表達；呈不連續、粗細不均勻分布或波浪狀、枝丫狀、條索狀或小灶區間段位(++)，呈明顯間斷、區域缺失為(+)，呈大部分缺失或碎片狀或完全缺失為(-)，以上均為陰性表達。CD34：血管內皮被染成棕黃色或棕褐色。先在低倍鏡下尋找瘤內微血管密集區，然后在200倍視野下計數5個不同視野的微血管數，取其平均值。

1.4統計學方法實驗數據用 SPSS 14.0 統計軟件包處理。計量數據以均數±標準差表示，陽性表達率的比較采用卡方檢驗、陽性細胞數比較用t檢驗。P< 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1MVD在NIP和下鼻甲中的表達在陰性對照中CD34抗原未見表達，CD34陽性表達呈現棕黃色或棕褐色顆粒狀，表達于血管內皮細胞胞質內，在NIP主要表達于腫瘤間質，尤以瘤團周圍近基底膜的間質內及炎性細胞浸潤的部位顯著，血管管腔多層圓形、橢圓形，有少量扭曲變形、分叉呈分支狀(如圖1a)。在下鼻甲散在表達于黏膜固有層血管，血管管腔多呈圓形、橢圓形(如圖1b)。MVD在NIP、下鼻甲組織中的表達分別為42.64±7.43，25.48±2.94，差異有統計學意義(P< 0.05)。

2.2LN在NIP和下鼻甲中的表達LN在陽性結果為深棕色，在NIP主要分布于瘤體周圍的基底膜中及血管周圍基底膜，血管全層均可見呈規則的強陽性反應(+++)，而瘤體周圍的基底膜多表現為不完整，可變薄、斷裂呈小灶區缺失(圖2a)。LN在下鼻甲的基底膜中均表現為線樣連續、均勻完整結構(如圖2b)。二者相比，差異有統計學意義(P< 0.01)。

圖2 LN在在組織中的表達 (S-P法，×200) a.鼻內翻性乳頭狀瘤；b.下鼻甲

2.3MVD的表達和LN在NIP臨床各期中的分布MVD的計數和LN的表達在腫瘤臨床分期(T1、T2、T3、T4)中各組間兩兩比較，差異均有統計學意義(P< 0.05)，說明隨著病程進展其值呈上升趨勢。見表1、表2。

表1 NIP組臨床各期MVD計數的比較

表2 NIP組臨床各期LN表達的比較

3 討論

NIP屬上皮源性良性腫瘤，高復發性、破壞性生長方式及易惡性變為其臨床特征，因而有人認為NIP當屬一種臨界性腫瘤。

CD34是敏感性和特異性均較高的血管內皮細胞標記物。腫瘤血管的形成是腫瘤組織得以生存并賴于迅速生長和遠距離轉移的必要條件，新生血管網絡系統可為腫瘤生長提供充分的營養，保證腫瘤快速增殖，血管增生的程度反映了腫瘤誘導血管生成的能力，從而在一定程度上決定了腫瘤的生物學行為[5]，目前認為，早期腫瘤新生血管密度的增加預示腫瘤可能進入一個快速增長、加速侵襲和惡變潛能增加的時期。因此，高MVD的腫瘤，表現出更快的生長速度和更強的侵襲性。

在本研究中我們發現，CD34的表達與腫瘤臨床分期有關，隨臨床分期的增高，MVD的數量也呈逐漸增加趨勢，同時與對照組相比較，腫瘤血管有表現為不規則形，有扭曲分叉等現象。因此早期了解腫瘤新生血管的密集程度可幫助我們預知腫瘤惡變或復發的危險度，近年來也有研究表明MVD有助于判斷NIP復發的危險及預后。

LN是基底膜的一個重要組成部分，大量研究表明基底膜的層粘連蛋白的缺失程度與腫瘤的局部侵襲轉移及惡性程度密切相關，檢測腫瘤組織中基底膜的分布狀況有助于估價其浸潤生長趨勢，判斷其惡性程度[6]。

在本研究中我們發現，在正常下甲組織中的LN均表現為完整均勻一致，而在NIP中我們發現隨著臨床分期的增加，LN的陽性表達有逐漸降低的趨勢，尤其在臨床四期中多表現為部分小灶區的缺失，這與臨床中腫瘤發生惡變相符合，同時也說明隨著臨床分期的增加，腫瘤的破壞程度及惡變概率在逐漸增加，這與Artese等研究表明LN和腫瘤臨床分期有關相符合。

血管形成固然是腫瘤生長、侵襲、轉移過程中的必要條件，但這一過程中腫瘤與宿主血管的相互作用關系尤其是腫瘤細胞表面的具有高度親和力的LN與血管內皮細胞之間的關系尤為密切，其促進腫瘤血管形成及浸潤轉移中的作用更不可忽視。LN作為基底膜的主要成份之一，在腫瘤血管生成早期起著關鍵性的作用，這與其形態學結構密切相關，作為一個成熟的血管內皮細胞與基底膜上的LN連接緊密，一些體外實驗認為，層粘連蛋白A鏈上的SIKVAV肽段與內皮細胞的關系密切。Grant等[7]建立了體外模型系統，并認為層粘連蛋白上的SIKVAV肽段是具有新的血管生成活性的，并能促進腫瘤的血管化和腫瘤的生長。本實驗中未能證明兩因子之間有相關性。可能與各組例數偏少有關。

腫瘤的惡變、轉移是多種因素作用下的一個復雜過程，血管形成使腫瘤得以獲得足夠的營養物質而持續性生長，腫瘤細胞從原發部位脫落，進入血液或淋巴系統并且再次傳出循環系統，入侵新的器官，誘導新生血管形成，最終形成轉移灶，在此過程中，細胞與基底膜的相互作用可以說是貫穿始終的。由于在腫瘤發生的早期階段就有活躍的血管生成[8～12]，因而在癌前病變活檢中可應用MVD檢測作為判斷癌前病變惡變傾向的評價指標之一[13～15]。

介于NIP的特殊的生物學特性，目前臨床治療方法主要是鼻內鏡下手術切除，同時行術后長期甚至終身隨訪，我們研究目的在于為NIP的治療提供一種新的思路，即在手術之后通過有效的抗血管生成和抑制LN降解療法控制或逆轉癌前病變的惡變、減少惡性腫瘤的發病率。

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