注射用葡萄糖酸依諾沙星含量測定的探討

王和協 董幫興

（安徽省安慶市食品藥品檢驗中心 安徽 安慶 246000）

葡萄糖酸依諾沙星為第三代喹諾酮類藥物。臨床主要用于對其敏感的革蘭陰性菌和陽性菌引起的感染，也可用于軟組織感染。文獻[1]中，采用紫外分光光度法測定[2]含量；有關依諾沙星濃度測定的方法國內、外都有報道，有采用LC/MS/MS法[3]、微透析法[3]，本文以甲醇為溶劑，HPLC[4]法測定含量；不但準確快速，而且與紫外分光光度法比較，結果沒有顯著性差異。

1.儀器與試藥

1.1 儀器

MODEL500型高效液相色譜儀，FA1004N電子天平

1.2 試藥

注射用葡萄糖酸依諾沙星規格：0.1g，批號：0812011，0812012，0812013)，依諾沙星對照品(批號：0453-9901，純度為91.1%，中國藥品生物制品檢定所)，甲醇為色譜純，枸櫞酸為化學純。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為島津VP-ODS（4.6mm×250mm，5um），方法1：流動相為1.1%枸櫞酸（三乙胺調節pH3.5）-甲醇（1:1）；流速為1mL/min-1，進樣量為20L，檢測波長254nm。

2.2 對照品溶液的備制取依諾沙星對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1mL中含依諾沙星30ug的溶液，即得。圖譜見a

2.3 供試品溶液的備制精密稱取本品適量，加流動相制成每1mL中含依諾沙星30ug的溶液，即得。圖譜見b 5.98min5.98min

2.4 線性關系與回歸方程

精密稱取依諾沙星對照品約13.2mg于200mL的量瓶中，加流動相稀釋定容。分別移取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL于10mL的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，依方法2.1的色譜條件進樣20L，以色譜峰面積（385128.406，701734.375，1022143.500，1396222.500，1701711.000）對進樣濃度ug/ml進行線性回歸，得回歸方程：Y=55460.88855X+43091.9622999（r-O.9995）。實驗表明依諾沙星在6ug·mL-1～30ug·mL-1濃度范圍內線性關系良好。

2.5 檢測限

取依諾沙星對照品溶液6ug·mL-1，用流動相稀釋成一系列從高到低濃度的梯度溶液，以信噪比3:1，依諾沙星的最小檢測限為 0.6ug·mL-1。

2.6 進樣重復性考察取含量測定項下供試品溶液，精密量取20uL注入色譜儀，重復進樣5次，測定峰面積，計算RSD為0.51%，結果表明該方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取2.9項下的溶液分別于0h，2h，4h，6h，8h，12h進樣20uL，記錄峰面積。結果表明，含量測定項下的供試品溶液于12h內依諾沙星主峰面積未見明顯變化（RSD為0.79%），供試品溶液在12h內未見新雜質產生，可見兩溶液在12h內均穩定。

2.8 加樣回收試驗

取相當于30mg（32.9mg）依諾沙星的樣品于100mL的量瓶中，用流動相稀釋至刻度。各吸取1mL于9個10mL的量瓶中，每3個量瓶為一組。低、中、高組分別加入適量對照品溶解稀釋使之成為含依諾沙星約80，100和120濃度的溶液，以外標法計算的平均回收率為99.6，RSD為1.0，見表1。

表1 加樣回收率測定結果

2.9 樣品含量測定結果

取樣品適量加流動相溶解并定量稀釋至每1mL約含30ug依諾沙星的溶液，流動相系統中進樣。同法測定，取批號0812011樣品5份，照2.5項下方法，測得樣品含依諾沙星分別為標示量的99.2%，98.3%，98.9%，97.7%和100.1%，RSD為0.9%，重復性良好。分別取三批樣品用紫外分光光度法與HPLC法測定結果見表2。

表2 紫外分光光度法與HPLC法的比較（%，n=3）

3.討論

3.1 相對于注射用葡萄糖酸依諾沙星原有國家藥品標準中的紫外分光光度法測定含量，本文探討了HPLC法測定含量測定注射用葡萄糖酸依諾沙星的含量，實驗結果都較令人滿意。經過調整甲醇和枸櫞酸溶液的比例，本文找到了以甲醇-1.1%枸櫞酸溶液（三乙胺調節pH3．5）（1:1）為流動相的系統。實驗表明該色譜系統能在較短的分析時間內得到較完美的色譜峰，為今后用HPLC法測定其含量提供了一個較好的參考方法。

3.2 本文試驗參考依諾沙星有關物質測定項下的波長254nm，省去了確定測定波長步驟，并且使測定有關物質與含量項下的流動相統一，省時，省力。

[1]中國藥典委員會.中國藥典（二部）[S].2015年版,北京化學工業出版社,2015.

[2]周虹.LC/MS/MS法同時測定食品中喹諾酮類藥物[J].口岸衛生控制,2005,10.

[3]劉志東.微滲析技術研究依諾沙星眼用緩釋凝膠劑兔眼內藥動學[J].中國新藥雜志,2005.

[4]譚志榮，高效液相色譜法檢測生物樣品中喹諾酮類藥物的研究進展[J].中國新藥雜志,2006.