EB病毒抗體檢測在鼻咽癌和傳染性單核細胞增多癥診斷中的應用

費秀云，徐元宏，李 濤

EB病毒屬皰疹病毒γ亞科淋巴隱病毒屬，其是一種能普遍感染人類且與多種疾病發病有密切關系的DNA病毒。約90%以上的鼻咽癌(nasopharyngenlcarcinoma,NPC)患者血清中有抗EB病毒抗體存在，EB病毒特異抗體可用于NPC的早期輔助診斷,通過檢測血清中EB病毒特異抗體早期診斷NPC，是提高NPC患者存活率的一個重要手段[1-2]。在我國3～5歲兒童中，EB-VCA-IgM的陽性率達90%以上[3]，幼兒感染后多數無明顯癥狀，或引起輕癥咽炎和上呼吸道感染，兒童期發生原發感染，約50%個體發展為傳染性單核細胞增多癥[4]。該研究旨在探討EBV-IgA、EBNA-IgG、EB-VCA-IgG、EB-VCA-IgM和EA-IgG 5項抗體檢測在NPC、傳染性單核細胞增多癥以及其他疾病中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1一般資料分組標準收集2016年4月～2017年3月安徽醫科大學第一附屬醫院住院及門診患者535例，剔除5項抗體可疑病例，男309例，女226例；其中兒童406例，年齡1～14(4.91±3.40)歲，成年人129例，年齡15～78(43.51±15.56)歲。分組標準將535例患者結合臨床病理診斷結果，分為NPC組(58例)和傳染性單核細胞增多癥組(24例)，剩下其他疾病患者按年齡又分為成人其他疾病組(71例)和兒童其他疾病組(382例)進行統計學分析。

1.2儀器與試劑EB病毒IgA抗體ELISA試劑盒由深圳康生保生物技術有限公司生產；EBNA-IgG、EB-VCA-IgG、EB-VCA-IgM、EA-IgG化學發光免疫分析法(CLIA)試劑盒由索靈診斷醫療設備有限公司生產；儀器采用LIAISON XL化學發光分析儀。所有試劑、質控品及校準品均在使用有效期內，所有檢驗項目、室內質控均在控。

1.3標本采集采集所有受試者清晨空腹靜脈血3 ml,以3 500 r/min離心10 min，分離血清標本檢測，采用ELISA測定患者EBV-IgA,CLIA測定EBNA-IgG、 EBVCA-IgG、EBVCA-IgM和EA-IgG。EBV-IgA陽性判定標準：A值≥0.1+陰性對照A值均值(陰性對照A值均值<0.05時以0.05計算，>0.10時應重新實驗)EBNA-IgG≥20 U/ml判為陽性，5～20 U/ml判為可疑，<5 U/ml判為陰性；EBVCA-IgG≥20 U/ml判為陽性，<20 U/ml判為陰性；EBVCA-IgM≥40 U/ml判為陽性，20～40 U/ml判為可疑，<20 U/ml判為陰性；EA-IgG≥40 U/ml判為陽性，10～40 U/ml判為可疑，<10 U/ml判為陰性。

2 結果

2.15項抗體檢測結果在各疾病中男女性別上除EBV-IgA在兒童其他疾病組中差異有統計學意義外(P=0.034)，在NPC，傳染性單核細胞增多癥和成人其他疾病組中差異均無統計學意義，見表1。

2.258例NPC患者和24例傳染性單核細胞增多癥患者EB病毒抗體譜的陽性模式比較NPCEB病毒抗體譜陽性模式以EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EA-IgG陽性數最多，占總陽性率的84.48%，而傳染性單核細胞增多癥以EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG陽性數相對較多，占總陽性率的54.16%，見表2、3。

2.3EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG對NPC和傳染性單核細胞增多癥的診斷效率比較單項檢測5項抗體結果，EBNA-IgG和EBVCA-IgG診斷NPC的靈敏度都達到了100%，而特異度卻較低，分別為11.3%和8.5%。EBVCA-IgM對NPC的特異度高達95.8%而靈敏度僅為1.7%。傳染性單核細胞增多癥中的EB-VCA-IgM單項檢測的靈敏度、特異度、準確度和陰性預測值都達到90%以上，EA-IgG特異度和準確度達到94.5%和93.1%，靈敏度相對偏低僅有70.8%；見表4、5。

2.4EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG陽性率在各組中比較EBV不同類別抗體的比較，NPC組EBV-IgA、EBNA-IgG和EA-IgG陽性表達明顯高于成人其他疾病組、傳染性單核細胞增多癥和兒童其他疾病組，差異有統計學意義(P<0.05)；NPC和成人其他疾病組EBVCA-IgG陽性表達差異無統計學意義，但均明顯高于傳染性單核細胞增多癥和兒童其他疾病組，差異有統計學意義(P<0.05)；傳染性單核細胞增多癥組EBVCA-IgM陽性表達明顯高于NPC、成人其他疾病組和兒童其他疾病組，差異有統計學意義(P<0.05)，而NPC、成人其他疾病組和兒童其他疾病組間差異無統計學意義，見表6。

表1 5項抗體檢測結果在NPC和傳染性單核細胞增多癥中性別的比較

表2 58例NPC患者EB病毒抗體譜的陽性模式

表3 24例傳染性單核細胞增多癥患者EB病毒抗體譜的陽性模式

表4 EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG對NPC的診斷效率(%)

表5 EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG對傳染性單核細胞增多癥的診斷效率(%)

表6 比較各組EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG陽性率(%)

3 討論

535例患者中58例被確診為NPC，無1例兒童，24例被確診為傳染性單核細胞增多癥，無1例成人，說明NPC和傳染性單核細胞增多癥的發病有年齡特征，不能以EB病毒感染來判斷為NPC或傳染性單核細胞增多癥。不過現實中NPC發病與年齡也有一定的關系，好發年齡有兩個高峰，第一個是16～25歲；第二個為45～54歲，集中為青年和中年[5-6]。本研究中58例患者被確診為NPC，其中47例為男性患者，11例為女性，說明男性患者明顯多于女性，這與Adham et al[7]研究結果相一致。

EB病毒是線性雙鏈DNA病毒，基因組長172 kb，編碼大約100個基因，其中重要的有VCA、EA和NA的基因。EB病毒有復制性感染和潛伏感染兩種感染方式，復制性感染方式主要見于EB病毒感染性疾病如傳染性單核細胞增多癥，VCA-IgM抗體在早期出現，多于1～2個月后消失，VCA-IgG出現稍遲于前者，但可持續終生，EA-IgG抗體是近期感染或EB病毒活躍增殖的標志，于感染后3～4周達高峰，持續3～6個月。本研究傳染性單核細胞增多癥中VCA-IgM陽性率高達91.7%，EA-IgG陽性率也相對較高，表明傳染性單核細胞增多癥發病時患兒近期感染了EB病毒，病毒增殖活躍。而NPC中VCA-IgM陽性率卻很低，僅有1.7%，與此同時，EBNA-IgG、EBVCA-IgG陽性率卻高達100%，驗證了NPC從EB病毒感染到發病有數年的潛伏期[8]。因為VCA-IgM于疾病早期出現，1～2個月后消失，所以NPC檢測時VCA-IgM大多已轉陰，而EBNA-IgG、EBVCA-IgG感染后可維持終生[9]，是既往感染的標志，故NPC檢測中EBNA-IgG、EBVCA-IgG達到100%。成人其他疾病組EBNA-IgG和EBVCA-IgG也分別達到了88.7%和91.5%，說明有90%左右成年人曾感染過EB病毒，與我國其他地區檢測結果一致[10]。就單項檢測在傳染性單核細胞增多癥中的檢測結果來看，本研究中化學發光法測定的EBV-VCA-IgM的靈敏度、特異度、準確度、陰性預測值均達到90%以上，適用于臨床檢測，可提高小兒傳染性單核細胞增多癥診斷水平，這與相關研究[11-12]結果一致。據國外Macsween et al[4]報道，兒童感染EBV約有50%發展為傳染性單核細胞增多癥，而本研究兒童患者中僅有24例確診為傳染性單核細胞增多癥，可能與感染患兒臨床表現不典型，早期即應用抗病毒藥物治療有關。

EBNA-IgG、EBVCA-IgG在成人疾病中診斷的陽性率明顯高于兒童，EBVCA-IgM陽性率在兒童傳染性單核細胞增多癥中有明顯優勢，高于成人疾病的診斷以及兒童其他疾病的診斷。

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