豬藍耳病抗體監測及其規律的應用

張成東　曲玖燕　彭先啟　郭海巖　崔松濤

（河南牧翔動物藥業有限公司，河南鄭州 450000）

日常監測是預防和控制流行性疫病的重要基礎[1]，是養殖戶評估免疫程序合理性、選擇疫苗種類、掌握豬群健康狀態的重要手段。檢測數據可從側面反映豬場的管理水平高低。藍耳病（PRRS）實驗室檢測方法主要包括抗原檢測和抗體檢測。抗原檢測包括聚合酶鏈式反應（PCR）和實時熒光定量PCR（Real-time PCR）；抗體檢測包括免疫熒光試驗（IFA）、免疫過氧化物酶單層分析法（IPMA）、中和試驗（SVN）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。

由于藍耳病病毒（PRRSV）核衣殼蛋白（N蛋白）不能誘導產生病毒中和抗體，以N蛋白作為主要包被抗原的PRRSV抗體間接ELISA方法檢測結果，并不能反映機體的免疫狀態，故其不適合用于對疫苗免疫效果的評價[2]。盡管N蛋白抗體ELISA檢測結果不能真實反映豬的保護力，但是根據PRRS ELISA抗體S/P值的離散度結合多次抗體檢測，足以準確判斷豬群藍耳病的感染狀態及變化趨勢[3]。與其他檢測方法相比，ELISA檢測方法具有操作簡便、易于標準化、快速敏感等優點，非常適合大規模流行病學調查和疫病監測。

ELISA抗體檢測試劑盒作為市場上最早應用的商品化檢測工具，是監測PRRS的重要手段。目前，使用ELISA抗體檢測法追蹤并系統研究發病豬群在前驅期、明顯期及轉歸期等不同疾病發展階段PRRS抗體S/P值變化規律的文獻較少。為更全面揭示實際生產中PRRS的抗體變化規律，本研究跟蹤監測了某規模化豬場藍耳病發病前驅期、明顯期及轉歸期的抗體S/P值。結合以上數據，筆者針對PRRSS/P值的變化規律與豬場生產成績的關系進行了探討研究，期望能夠為我國PRRS的監測和防控提供基礎數據和科學依據。

1　材料與方法

1.1　血樣采集及處理

試驗地點：新鄉德豐養殖場，存欄600頭母豬。采血時間：分別于豬群發病的前驅期（2016年10月）、明顯期（2016年11月）和轉歸期（2017年3月）隨機選擇母豬并逐頭采集前腔靜脈血5m L，待全血凝固析出血清后，4000 r/m in離心10 m in，取血清置于1.5 m L EP管，4℃環境存放備用。

1.2　ELISA抗體檢測

RT-PCR法檢測PRRS發病初期母豬血清抗原，NSP2基因引物[4]F：5’-TGGGCGACAATGTCCCTAAC-3’，R：5’-GCTGAGTATTTTGGGCGTGTG-3’，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PRRS抗體檢測使用進口IDEXX試劑盒。PRRS抗體的有無（陽性/陰性）根據樣品的S/P值判定。如果S/P值＜0.4，樣品應判定為PRRS抗體陰性；如果S/P值≥0.4，樣品應判定為PRRS抗體陽性。

2　結果與分析

2.1　豬場首次血清PRRS抗原檢測結果

用RT-PCR的方法擴增NSP2基因，目的基因片段涵蓋變異株的基因缺失片段，用于區分經典株和變異株[5]。經典株擴增基因片段508 bp，變異株擴增基因片段418 bp。RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳顯示，24份血樣中（共25份血樣，其中1份數據丟失）共檢測出7份抗原陽性，陽性率29.2%，說明母豬群存在PRRSV野毒感染，且豬群中存在經典株和變異株（見圖1），存在病毒血癥的豬群中，變異毒株所占比重較大（占87.5%）。該豬群免疫過經典株疫苗，未免疫過高致病株疫苗，表明本次發病由PRRSV變異株引起，可能與豬場8月份引進的150頭后備母豬有關。

2.2　豬場連續3次血清PRRS抗體監測結果

首次抗體檢測結果：母豬采樣25頭，S/P值介于0.29～3.22；第二次抗體檢測結果：母豬采樣16頭，S/P值介于0.18～4.01；第三次抗體檢測結果：母豬采樣28頭，S/P值介于0.45～2.39。從母豬群抗體檢測結果可以明顯看出，豬群發病前驅期、明顯期和轉歸期PRRS抗體S/P值先升高再下降；其中豬場PRRS穩定以后，抗體S/P值低于2.5（見圖2）。

2.3　豬場連續3次血清PRRS抗體S/P值分布

圖1　RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳結果

IDEXX PRRS抗體檢測S/P＜0.4，PRRS為陰性；S/P≥0.4，PRRS為陽性；當豬群S/P≥2.5的比例大于5%，離散度大于40%時，豬群藍耳病風險較高。抗體檢測結果數值分布顯示（見表1），發病初期S/P值平均值為1.40，離散度為63.08%，S/P值≥2.5的比例為16%；發病高峰期S/P值平均值為1.91，離散度為63%，S/P值≥2.5的比例為31.25%；康復期S/P值平均值為0.84，離散度為45.82%，S/P值≥2.5的比例為0。由3次抗體檢測S/P值的分布可知，發病初期和高峰期PRRS S/P平均值會逐漸增大，且離散度較高；當96.1%的母豬群PRRS抗體S/P值介于0.4～2.0時，豬群恢復正常。

圖2　母豬連續3次PRRS抗體檢測結果

2.4　豬場生產情況

從2015年10月份到2016年2月份，豬場育肥豬群相對穩定（月死淘率在0.7%以內），母豬群和保育豬群一直很不穩定。如表2所示，母豬分娩率從2015年10月份到2016年1月份一直低于豬場的正常生產水平，2月份以后分娩率指標恢復正常；保育豬從2015年10月份到2016年1月份死淘率居高不下，一直遭受副豬嗜血桿菌和腦炎性鏈球菌的困擾，嚴重時仔豬在哺乳期間就出現整窩發熱、喘氣的現象，直至3月份以后生產恢復正常。

3　討論

3.1　PRRSV ELISA抗體消長規律

由于豬場之間是否免疫PRRS疫苗及接種疫苗毒株情況不一，且PRRSV ELISA檢測的抗體是非保護性中和抗體，故在通過抗體檢測數據判斷豬場PRRS感染狀態時，不能僅僅依靠單次檢測結果[6]（并非S/P值越高越穩定），而要結合抗體檢測結果、豬場的疫苗免疫情況和各階段豬群的生產情況。判斷一個豬場PRRS的變化趨勢，需要定期監測抗體，并綜合分析。

通過發病前驅期、明顯期、轉歸期3次抗體S/P值的變化可知，在豬場PRRS由穩定到不穩定的過程中，抗體S/P平均值會逐漸增大，且抗體離散度較大[7]；而在豬場PRRS由不穩定到穩定的過程中，抗體S/P平均值會逐漸變小，且抗體離散度較小。結合豬場的實際生產情況，當絕大多數（96.2%）豬群S/P值介于0.4～2.0時，且離散度低于45%時，母豬分娩率達到85%以上，保育豬成活率達到96%以上，豬群藍耳病處于陽性穩定狀態。

表1　母豬連續3次抗體水平檢測結果分析

表2　豬場2015年10月至2016年3月母豬分娩率和保育豬成活率

3.2　PRRS抗體監測及其規律的應用

在中國普遍“藍”的大環境下[8-10]，中小規模養殖場應該努力做到PRRS陽性穩定狀態。定期檢測各階段豬群的PRRS抗體，有助于掌握PRRS在各階段豬群的循環情況，監控整個豬場PRRS的變化趨勢，便于及時做出決策（淘汰、藥物控制或者疫苗免疫）。及時淘汰S/P值高于2.5且生產成績很差的母豬及8胎以上的母豬，保持合理的種豬胎次結構；在引進后備種豬時，了解后備豬群的PRRS感染狀態，做好疫苗馴化或者淘汰母豬馴化[11]，有助于種豬群維持PRRS陽性穩定狀態。對于保育和育肥豬群PRRS階段性發病問題，可以在豬群發病前1個月做經典株弱毒苗的免疫，有利于維持豬群PRRS陽性穩定，減少損失；對于PRRS陽性豬群，減少應激，定期投喂大環內酯類抗生素[12-14]，有助于維持豬群良好的生產狀態。

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