一株豬鏈球分離菌的實驗室鑒定及防治要點

青海畜牧獸醫職業技術學院 812100

豬鏈球菌病是由多種致病性鏈球菌引起的一種嚴重危害當前養豬生產的重要細菌類疾病，我國將豬鏈球菌病定為二類動物疫病。豬鏈球菌有35個血清型，其中鏈球2型是最常見、毒力最強的血清型疾病，是嚴重的人畜共患病。本文將某豬場疑似豬鏈球病病料中的分離菌，分別進行了革蘭氏染色鏡檢、生化反應試驗、玻片凝集試驗和藥敏試驗等研究，最終鑒定該分離菌為豬鏈球菌，并確定了該菌株的敏感藥物，采取科學治療后有效地控制了疫情。現將實驗室檢測過程簡要介紹如下。

1 病料來源

采集本地區某規模化豬場疑似豬鏈球菌病病死豬的關節積液及部分組織病料。

2 細菌分離培養及鑒定

無菌工作臺內將采集的病料樣品用接種環劃線接種于含4%牛血清的TSA平板上，37℃恒溫培養箱中培養18～24小時，觀察平板上的菌落形態，可見圓形、乳白色、表面光滑、邊緣整齊且有顯著溶血環的小菌落。挑取單菌落進行革蘭氏染色后，鏡檢發現該菌為典型的革蘭氏陽性菌，呈球形、鏈狀排列。

3 玻板凝集試驗

將1.0mL分離菌培養物進行離心處理，5000r/分鐘離心2分鐘，棄上清后沉淀，用100μL的滅菌PBS重懸作為凝集抗原，取20μL凝集抗原與等體積的豬鏈球菌2型標準陽性血清進行玻片凝集試驗，發現試驗分離株與陽性血清出現顯著凝集現象，同時設立的陰陽性對照結果也都成立。

4 生化反應實驗

為了進一步確定分離菌是否為豬鏈球菌，又進行了生化反應實驗。將該分離菌分別接種于各個細菌生化微量反應管，觀察生化反應特點，結果顯示該菌發酵蔗糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露糖等，而且產酸不產氣，不能發酵木糖、甘露醇和山梨醇等。甲基紅試驗和亞甲藍還原試驗結果呈陽性，過氧化氫酶和氧化酶結果呈陰性。

5 藥敏試驗

經過上述鑒定，最終確定該分離菌為豬鏈球2型。為了保證有效治療，對分離菌株進行了常規藥物的藥敏試驗。首先將菌株接種于4%牛血清的TSA平板上，然后將阿莫西林、頭孢噻肟、氟苯尼考、青霉素、鏈霉素、氨芐西林、慶大霉素和環丙沙星共8種藥敏片平貼于培養皿上，37℃培養24小時后，根據各個藥敏片的抑菌圈直徑進行結果判定。結果表明該菌株對不同抗生素的敏感程度差異很大，對阿莫西林和氨芐西林呈高度敏感，對頭孢噻肟、氟苯尼考和環丙沙星呈中敏，對慶大霉素、青霉素和鏈霉素耐藥不敏感。已將藥敏試驗結果反饋給相關養殖企業，并指導合理用藥治療，取得了很好的效果。

6 分析與討論

經過調查發現，該豬場此次疫情的發生是由于近期天氣驟變、管理不當和圈舍清理不及時，導致豬群抵抗力下降，致使鏈球菌感染體弱的豬只，通過傳染后使得疫情進一步擴大。本次所分離的鏈球菌經鑒定是鏈球2型，是我國普遍流行的菌株。分離培養致病性豬鏈球菌時，對營養和溫度等條件要求比較高，通常需要在添加4%血清或鮮血或適量的葡萄糖等物質的營養培養基才可良好生長，最適培養溫度為37℃，培養時間為18～24小時左右，培養基上可見透明、圓形、中央隆起和表面光滑的灰白色小菌落。因為抗生素藥物是治療細菌類疫病的首選藥物，所以抗生素藥物在養殖場中廣泛應用，但是由此引發了嚴重的耐藥性問題。通過本次藥敏試驗可以看出，分離菌對不同藥物的敏感程度不同，這就與該養殖場日常不合理使用抗生素有關。為了發揮抗生素的最佳效果，必須嚴禁抗生素的濫用和錯用，治療細菌性疾病的過程中，最好在進行藥敏試驗的基礎上選擇藥物，開展科學合理的抗生素治療方案，并且日常預防和保健時應避免長期使用一種抗生素類藥物。

豬鏈球菌對外界環境的抵抗力較強，可長期存活在糞便、塵土和水等介質中。但是豬鏈球菌為條件性致病菌，所以養殖場的日常飼養管理尤為重要，要做好各方面的管理工作。首先要保證豬舍內合理的飼養密度，保持干燥，定期通風換氣，消滅場區內蟲鼠害，每天進行圈舍清潔衛生清理工作，并定期徹底消毒。其次飼喂營養價值高的全價飼料，配合適量的青綠飼料，通過飲食提高豬群的抗病能力。季節更替時一定要做好防寒保暖工作，制定適合本場的免疫程序，選用正規廠家的疫苗科學免疫。通常每年春秋季節選用豬鏈球菌鋁膠苗進行常規預防免疫，仔豬可在30日齡左右接種，45～60日齡進行強化免疫一次，免疫后有條件的養殖場可定期開展豬鏈球菌病血清學監測工作。此外在飼料和飲水中按一定比例添加抗生素類藥物，也可以有效預防豬鏈球菌病的發生，但是在藥物預防過程中需要避免耐藥性的產生。及時隔離疑似豬鏈球菌病病豬，并積極治療，被污染場地、環境、器具、病死豬和糞便等徹底消毒或無害化處理，堅決淘汰帶菌病豬。

當前豬鏈球菌病是制約全世界養豬業的主要細菌性傳染病之一，嚴重威脅著養豬業的健康快速發展，同時豬鏈球菌也可感染人類，存在潛在的公共安全問題。近年來豬鏈球菌病有廣泛流行的趨勢，除單獨感染發病外，還與其他豬病如豬瘟、豬藍耳和豬圓環等多種病毒病混合感染，使疫情更加嚴重、復雜。豬鏈球菌的血清型眾多，現有疫苗保護還沒有達到理想狀態，鏈球菌病的防治工作仍然十分嚴峻，故加強日常飼養管理還是重中之重。安全、高效、廣譜的豬鏈球病疫苗還有待進一步研制，這對提前預防和控制豬鏈球菌病具有重要的現實意義。