寵物葡萄球菌的分離培養(yǎng)和藥敏試驗

郭立軍

（天津市濱海新區(qū)動物疫病預防控制中心，天津300454）

目前,隨著人們生活水平的提高,寵物飼養(yǎng)越來越多,寵物本身攜帶或感染的疾病,對人類產(chǎn)生了新的威脅。日常生活中,人被貓、狗咬傷等,都可感染金黃色葡萄球菌;此外,耐藥菌可能通過食物、水源、毛發(fā)(尤其是貓、狗)和其他接觸方式傳遞給人(于振清等,2006),給公共健康造成了嚴重威脅。寵物感染金黃色葡萄球菌的報道較少,而有研究結(jié)果表明,貓、狗等寵物身上的金黃色葡萄球菌可能傳染給主人,主人也可能將細菌傳染給寵物。因此,應加強金黃色葡萄球菌的監(jiān)測,并采取相應措施減少或延緩該種細菌耐藥性的產(chǎn)生,為該病的防控和治療提供參考[1]。

1 材料與方法

1.1 材料

使用的培養(yǎng)基為普通肉湯培養(yǎng)基，普通瓊脂培養(yǎng)基，鮮血瓊脂培養(yǎng)基。

1.2 病料采集

試驗所采病料分別采自患病寵物的傷口分泌物，膿汁，滲出液，尿液，糞便等。其中傷口分泌物22份、膿汁8份、糞便5份、滲出液7份，共42份。共計20個寵物。

2 分離培養(yǎng)

2.1 增菌培養(yǎng)

將采集后配制的稀釋液2mL接入7.5%NaCl肉湯中，37℃培養(yǎng)24小時。

2.2 劃線分離培養(yǎng)

從葡萄球菌肉湯中取少許涂布于培養(yǎng)基邊緣，用接種環(huán)在所涂的地方劃線。

接種完畢，作好標記，平皿倒扣，置于37℃培養(yǎng)24～48h。

2.3 觸酶試驗

進行葡萄球菌觸酶試驗，如立即（1min內(nèi)）有大量氣泡產(chǎn)生為陽性，不產(chǎn)生或氣泡量少為陰性[1]。

2.4 生化試驗

2.4.1 菌液制備

取培養(yǎng)基上新鮮菌落制成麥氏比濁管3號及0.5號菌液各一管約1.5mL，另取已制備好的3號菌液4滴，加入2滴甲苯用于ONPG試驗。

2.4.2 試驗操作

（1）堿磷酶、尿素酶、PYR及木糖試驗均加相當于3號麥氏比濁管濃度菌液各4滴；（2）ONPG加相當于3號麥氏比濁管濃度菌液4滴及2滴甲苯；（3）O-F葡萄糖管用液體石蠟加封。

2.4.3 培養(yǎng)條件

放在35℃溫箱中，6h后觀察結(jié)果。

2.4.4 判定方法

（1）堿磷酶試驗管內(nèi)加兩滴IMNaOH，5分鐘變?yōu)辄S色為陽性；（2）ONPG試驗 變成黃色為陽性；（3）尿素試驗 變?yōu)榧t色為陽性；（4）PYR試驗管內(nèi)加入一滴PYR顯色劑5分鐘呈現(xiàn)紅色為陽性；（5）木糖試驗變 成黃色為陽性；（6）無氧條件下發(fā)酵葡萄糖為葡萄糖球菌，不發(fā)酵為微球菌。

2.5 藥敏試驗

取金黃色葡萄球菌種，用滅菌接種環(huán)致密劃線于瓊脂平板表面。用無菌鑷子將抗菌藥物圓片，貼于培養(yǎng)基表面，各片距離要相等。做好標記，37℃培養(yǎng)24h。

3 結(jié)果

3.1 在普通瓊脂培養(yǎng)基上的菌落特征

菌落厚、有光澤、圓形凸起，邊緣整齊、表面光滑、濕潤，直徑一般為1～2mm。

3.2 在血平板上的菌落特征

呈金黃色，有時也呈白色，大而突起，圓形、不透明、表面光滑，周圍有透明的β溶血環(huán)。

3.3 染色觀察

革蘭氏染色陽性，呈葡萄串狀排列，無芽孢、莢膜。

3.4 觸酶試驗結(jié)果

玻片上滴加雙氧水后產(chǎn)生大量氣泡。

結(jié)論：金黃色葡萄球菌屬為觸酶陽性。

3.5 生化試驗結(jié)果

金黃色葡萄球菌在堿磷酶試驗中呈陽性，在ONPG中呈陰性，在尿素中呈陽性，在PYR中呈陰性，在木糖中呈陰性，在OF葡萄糖中呈陽性[2]。

3.6 藥敏試驗結(jié)果

30株金黃色葡萄球菌對抗生素藥敏試驗結(jié)果

4 結(jié)論

從本實驗得知患病動物被金黃色葡萄球菌感染后，建議采用頭孢唑林、慶大霉素抗生素進行治療。對抗生素治療效果不好的病癥，如皮膚、傷口等感染應做細菌培養(yǎng)和藥敏試驗,以選取敏感藥物，減少細菌耐藥性的發(fā)生，但要注意用藥的劑量和用藥時間，應適時停用并經(jīng)常更換品種，已獲得最好的治療效果，防止產(chǎn)生耐藥性。

[1]趙永達,黃顯會.一例犬金黃色葡萄球菌病的診斷及藥敏試驗[J].中國畜牧獸醫(yī),2010，37（9）：225-226.

[2]崔慶,張代民,張承偉.249株葡萄球菌藥物敏感試驗分析[J].臨床軍醫(yī)雜志，2002,30（5）：52-53.

[3]朱以軍,徐瑞龍,單小云,等.醫(yī)院感染葡萄球菌屬的分布特點與耐藥性[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2007,17(5)：599-601.