食管鱗癌組織中基質金屬蛋白酶-3和溶酶體相關4次跨膜蛋白B-35的表達

曹 婧

(鄭州鐵路職業技術學院，河南 鄭州 450052)

食管癌我國高發病率的消化道惡性腫瘤之一，每年超過10萬人死于食管癌。食管癌的病理類型中以鱗癌為主，約占90%[1]。食管癌的發病是一個多基因、多蛋白參與的復雜的生物學過程。基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)在食管癌、結腸癌、胃癌、卵巢癌、肝癌等多種惡性腫瘤中存在高表達，在其腫瘤浸潤、腫瘤血管生成、遠處轉移等病理生理學過程中發揮關鍵作用，MMP-3是其中較為重要的一種[2-3]。溶酶體相關4次跨膜蛋白B-35(lysosome-associated transmembrane protein 4β-35，LAPTM4B-35)首先發現于肝癌中，后來證實其參與了肝癌、胃癌、結腸癌等多種惡性腫瘤的發生、發展以及腫瘤的浸潤轉移等病理生理學過程[4]。本研究旨在通過用免疫組化S-P法檢測食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達，以期探討MMP-3和LAPTM4B-35在食管鱗癌中的作用和進一步闡明食管鱗癌的發病機制和疾病進展的影響因素。

1 材料與方法

1.1一般資料入組鄭州大學第一附屬醫院腫瘤科2015年5月至2017年8月收治的食管癌患者120例，均經病理學證實為食管鱗癌，其中男82例，女38例；年齡29～81歲，中位年齡59歲；分化程度：高分化50例，中分化43例，低分化27例；浸潤纖維膜：無43例，有77例。TNM分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期40例，Ⅲ期52例，Ⅳ期5例；淋巴結轉移：無55例，有65例。同時收集60例癌旁正常食管黏膜組織標本作為對照，其中男37例，女23例；年齡31～76歲，中位年齡57歲。

1.2免疫組化S-P法檢測食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35表達水平采用免疫組化S-P法檢測120例食管鱗癌和60例癌旁正常食管黏膜組織中MMP-3和LAPTM4B-35的蛋白表達，用試劑盒中已知陽性組織切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。鼠抗人MMP-3和LAPTM4B-35抗體以及S-P免疫組化試劑盒等均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3免疫組化結果判斷每張切片隨機選取5個高倍鏡(×400)視野，對切片的染色強度和陽性細胞比例分別評分。陽性細胞比例評分：陽性細胞數≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分；染色強度：無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。然后將兩者評分的乘積作為最終積分，0分為(-)，1～3為(±)，4～6為(+)，7～12為(++)，其中前兩者為陰性，后兩者為陽性。所有結果均由2位副主任醫師以上職稱的病理科醫生獨立評判，并進行綜合。

1.4統計學處理采用SPSS 17.0進行統計分析，MMP-3和LAPTM4B-35的陽性率等計數資料用百分數表示，比較用χ2檢驗，MMP-3和LAPTM4B-35的陽性率的相關性分析用Spearman相關分析法，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1食管鱗癌和癌旁正常食管黏膜組織中MMP-3和LAPTM4B-35表達的比較食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的陽性率分別為75.00%(90/120)、58.33%(70/120)，癌旁正常食管黏膜組織中分別為15.00%(9/60)、10.00%(6/60)，差異均有統計學意義(P均<0.05)。

2.2食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達與其臨床病理參數的關系食管鱗癌組織中MMP-3的表達與浸潤纖維膜與否、TNM分期、淋巴結轉移與否有關(P均<0.05)。食管鱗癌組織中LAPTM4B-35的表達與浸潤纖維膜與否、TNM分期有關(P均<0.05)。見表1。

表1 食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達與其臨床病理參數的關系

2.3食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35表達的相關性食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達呈正相關關系(r=0.488，P<0.001)。見表2。

表2 食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35表達的相關性 n

注：r=0.488，P<0.001

3 討論

食管癌是我國高發的消化道惡性腫瘤之一，早期食管癌無特異性癥狀，不易檢出，一旦確診則已處于中晚期，失去了徹底治愈的機會，而對于高發地區的食管拉網式活檢方法雖能提高檢出率，但是并不適用于大面積的體檢人群。因此，進一步闡明食管癌的發生、發展機制，提高食管癌的早期診斷率，爭取做到早診早治，進而減少因食管癌死亡人數成為了當今食管癌研究的熱點之一。

食管癌的侵襲轉移是其惡性生物學行為的主要病理生理學基礎。MMPs屬于細胞外基質和基底細胞膜的主要降解蛋白，多數MMPs的高表達能夠促進細胞外基質和基底細胞膜的降解，從而使惡性腫瘤的浸潤轉移屏障清除，細胞間的粘附能力下降，惡性腫瘤細胞更容易向周圍或遠處移動，進而形成腫瘤的浸潤轉移等[5]。MMP-3能夠降解層粘連蛋白、酪蛋白、纖粘蛋白等多種糖蛋白，廣泛參與多種腫瘤的淋巴結轉移、周圍浸潤和易感性[6]。本研究結果顯示，食管鱗癌組織中MMP-3的陽性率為75.00%(90/120)，高于癌旁正常食管黏膜組織的15.00%(9/60)。食管鱗癌組織中MMP-3的表達與浸潤纖維膜與否、TNM分期、淋巴結轉移與否有關。LAPTM4B的基因定位于人類染色體的8q22.1，包含7個外顯子和6個內含子，全長50 kb，共有2 245個核苷酸。其表達產物包括LAPTM4B-24和LAPTM4B-35等2個亞型。其中LAPTM4B-35的過表達能夠促進細胞增殖。分化、遷移、侵襲，并能夠抑制細胞的凋亡。研究證實LAPTM4B-35的過表達與肝癌[7]。胃癌等惡性腫瘤的發生、發展關系密切。張靜怡等[8]研究發現，LAPTM4B-35在胃癌的遷移和侵襲過程中發揮了重要的促進作用。本研究結果顯示，食管鱗癌組織中LAPTM4B-35的陽性率為58.33%(70/120)，高于癌旁正常食管黏膜組織的10.00%(6/60)。食管鱗癌組織中LAPTM4B-35的表達與浸潤纖維膜與否、TNM分期有關(P均<0.05)。另外，我們通過用Spearman相關分析還發現，食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達呈正相關關系(r=0.488，P<0.001)。

綜上所述，食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35具有較高的陽性表達水平，且兩者可能與食管鱗癌的侵襲轉移有關。

參考文獻：

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[7] ZHANG H, TIAN B, YU H, et al. LAPTM4B-35 protein as a potential therapeutic target in gastric cancer[J].Tumour Biol,2014,35(12):12737-12742.

[8] 張靜怡，單麗珠，張潔,等. LAPTM4B-35和MMP-9在胃癌中表達及臨床意義[J]. 中國腫瘤臨床,2017,44(24):1226-1231.