蒲地藍消炎口服液黃芩苷與菊苣酸含量測定方法的優化

濟川藥業集團有限公司，江蘇　泰興　225440

蒲地藍消炎口服液由蒲公英、苦地丁、板藍根、黃芩等四味中藥按相應比例配伍，經過現代提取工藝提取并配制而成的純中藥口服制劑，具有清熱解毒，消腫利咽的功效，主要用于癤腫、腮腺炎、咽炎、扁桃體炎的治療[1-2]。研究表明，蒲地藍消炎口服液對小兒手足口病[3-4]、上呼吸道感染[5-6]也具有良好的臨床治療效果，有“天然抗生素”的美稱。

黃芩苷為黃芩中的主要有效成分，具有抗菌、抗病毒、清除氧自由基、解熱、鎮靜、調節免疫等作用[7-8]；菊苣酸為方中君藥蒲公英中的一種酚酸類化合物，具有抗菌、抗病毒、提高免疫力、抗炎、抗氧化等作用[9-11]。2015年版《中國藥典》中分別采用兩種方法對產品中的黃芩苷、菊苣酸的含量進行了測定，該方法由于檢測耗時較長，不利于生產過程中對產品進行質量控制，研究欲建立一種同時測定黃芩苷和菊苣酸含量的測定方法，以縮短中間體檢測時間，提高檢測效率。

1　儀器與材料

1.1儀器20AT型液相色譜儀(日本島津)；XS205型電子分析天平(Mettler)。

1.2材料黃芩苷對照品(批號：110715-201016，含量以94%計)、菊苣酸對照品(批號：111752-200902，含量以99.9%計)均購于中國食品藥品檢定研究院；蒲地藍消炎口服液(濟川藥業集團有限公司)；乙腈、甲醇均為色譜純，磷酸為分析純，均購于國藥集團化學試劑有限公司。

2　方法與結果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品48.18 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為黃芩苷儲配液；精密量取黃芩苷儲配液8 mL、4 mL、2 mL、1 mL、0.5 mL，分別置10 mL量瓶中，用甲醇依次稀釋成不同濃度的黃芩苷系列溶液，備用。精密稱取菊苣酸對照品13.7 mg，置100 mL量瓶中，加乙腈-水(20∶80)至刻度，搖勻，作為菊苣酸儲配液；精密量取菊苣酸儲配液10 mL、7.5 mL、4 mL、2 mL、1 mL，分別置25 mL量瓶中，用乙腈-水(20∶80)依次稀釋成不同濃度的菊苣酸系列溶液，備用。

2.1.2供試品溶液的制備精密量取蒲地藍消炎口服液5 mL，置50 mL量瓶中，加乙腈-水(20∶80)稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2色譜條件色譜柱：Agilent SB-Pheny1(75 mm×4.6 mm，3.5 μm)；流動相：水-乙腈-甲醇-磷酸(75∶15∶10∶0.2)；柱溫：40 ℃；檢測波長：326 nm；進樣量：10 μL；流速為梯度洗脫見表1。

表1　梯度洗脫流速

2.3分離度試驗精密量取供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。菊苣酸、黃芩苷出峰時間及菊苣酸峰、黃芩苷峰與附近峰的分離度，典型色譜圖如圖1所示。菊苣酸出峰時間為4.468 min，與附近峰分離度為2.23；黃芩苷出峰時間為8.241 min，與附近峰分離度為1.94。

2.4線性關系考察分別精密吸取“2.1.1”項下黃芩苷、菊苣酸不同濃度的系列溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖。以濃度對峰面積作圖，黃芩苷、菊苣酸回歸方程分別為：Y黃芩苷=17463X+22877(r=0.9999)，Y菊苣酸=39724X+15518(r=0.9998)，黃芩苷在90.58～1449.3 μg范圍內，菊苣酸在5.475～54.75 μg范圍內線性關系良好。

2.5精密度試驗取同一批樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積，結果黃芩苷、菊苣酸峰面積的RSD分別為0.15%、0.14%，表明儀器精密度良好。

2.6溶液穩定性試驗取同一批樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，分別于0、1.5、3、6、9、12、18、24 h按“2.2”項色譜條件測定，記錄峰面積。結果黃芩苷、菊苣酸峰面積的RSD分別為0.94%、0.84%。表明供試品溶液在24h內較穩定。

2.7重復性試驗取同一批樣品，按“2.1.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別按“2.2”項色譜條件進行測定。結果黃芩苷、菊苣酸的平均含量分別為10.68 mg·mL-1、0.269 mg·mL-1，以含量結果計算RSD(n=6)分別為0.96%和1.1%，表明該方法重復性良好。

2.8加樣回收率試驗精密量取已知含量的蒲地藍消炎口服液2.5 mL，共6份，置50 mL量瓶中，分別加入黃芩苷對照品約26.7 mg、菊苣酸對照品儲備液(0.137 mg/mL)5 mL，按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進行分析，計算回收率。結果黃芩苷、菊苣酸的平均回收率分別為99.72%、99.38%，RSD(n=6)分別為0.92%、0.99%。

2.9方法對比分別按照2015版《中國藥典》蒲地藍消炎口服液中蒲公英(菊苣酸)、黃芩(黃芩苷)檢測方法、以及“2.1、2.2”項下分析方法對6批蒲地藍消炎口服液中蒲公英(菊苣酸)、黃芩(黃芩苷)含量進行檢測，結果見表2。

表2　藥典方法和試驗方法檢測結果對比

3　討論

分別采用紫外-可見分光光度計及二極管陣列檢測器在210～400 nm分析對照品和供試品溶液，發現在326 nm處菊苣酸有最大吸收，而黃芩苷的兩個最大吸收峰分別為278 nm和315 nm，由于黃芩苷在樣品中含量較高，而菊苣酸在樣品中含量偏低，參考相關文獻[12-13]，為提高菊苣酸的檢測靈敏度，選擇了326 nm波長處同時測定兩種成分的含量。實驗結果表明，在326 nm處測定黃芩苷與原方法選定的280 nm測定結果基本一致。

2015版《中國藥典》對于蒲地藍消炎口服液除了維持原有黃芩(黃芩苷)含量檢測指標不變的基礎上，增加了蒲地藍消炎口服液中蒲公英(菊苣酸)含量測定，但菊苣酸藥典方法的單針進樣分析時間長達65 min。在蒲地藍消炎口服液尤其是中間體(配制液)檢測過程中，不計對照品，單批次4針檢測時間為260 min，耗時較長，在一定程度上增加了產品的產出周期，而文中研究方法不僅將檢測時間大大縮短，也實現了一種方法同時分析黃芩苷、菊苣酸含量的效果。運用本方法檢測蒲地藍消炎口服液中間體，不僅利于生產安排、消除生產瓶頸、降低分析成本、減少排污，同時也降低了配制液在等待檢測過程中的污染風險，提高了產品過程中的控制力度。

綜上，研究建立的HPLC法同時測定黃芩苷及菊苣酸的含量，方法可行，適用于蒲地藍消炎口服液生產過程中的質量控制。

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