諾麗發酵果汁中總香豆素質量濃度的測定

梁寒峭， 陳建國， 張 露，　程 池

（中國食品發酵工業研究院 中國工業微生物菌種保藏管理中心，北京100015）

已有研究表明多酚類物質是諾麗植物中重要的活性成分，在發酵果汁中的質量濃度可達1.14 mg/mL[5]。目前從諾麗果實、根、莖和葉中分離得到酚類化合物主要有黃酮類、香豆素類、木脂素類和酚酸類，其中香豆素是一類具有抗腫瘤，抗炎，抗病毒，保肝及抑制血小板活化因子（PAF）等生理活性的成分[6]。研究報道從諾麗果實中分離得到香豆素類成分如東莨菪亭（scopoletin）、異東莨菪亭（isoscopoletin）、東莨菪苷（scopolin）對脂肪氧合酶和低密度脂蛋白氧化反應具有明顯地抑制作用，并且對黑色素的生成也具有抑制活性[7-9]，此外從諾麗葉中也分離得到了香豆素類成分pteryxin和peucedanocoumarin III[10]，但目前仍未見諾麗發酵果汁中香豆素成分含量的文獻報道。因此本研究建立了香豆素成分含量的測定方法，并對不同發酵時間的諾麗果汁樣品進行了含量的測定與比較。

1　材料與方法

1.1　儀器與材料

UNICO-JV2000紫外分光光度計，北京五洲東方科技發展有限公司產品：AB204-N萬分之一電子天平，瑞士梅特勒儀器有限公司產品；電子天平，METTLER-TOLEDO公司產品；離心機，Eppendorff公司產品。

諾麗發酵果汁由海南諾尼生物工程開發有限公司提供；東莨菪內酯對照品由北京盈澤納新化工技術研究院提供（批號14081804），甲醇、乙醇等其它試劑均為分析純，北京化工廠生產。

1.2　樣品溶液的制備

精密量取樣品10.0 mL，置于100 mL的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密移取31.25 mL置于100 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻離心，上清液即得樣品溶液。

1.3　對照品溶液的制備

精密稱取東莨菪內酯（scopoletin）對照品11.20 mg置于50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解，制成母液。精密移取3 mL母液置于10 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得標準溶液。

2　結果與討論

2.1　測定波長的選擇

吸取對照品溶液和樣品溶液在190～400 nm波長范圍內進行掃描，結果見圖1和圖2。

圖1　對照品溶液吸收光譜Fig.1　Absorption spectrum of reference

圖2　樣品溶液吸收光譜Fig.2　Absorption spectrum of sample

由上圖可知，對照品溶液和樣品溶液在348 nm處都有最大吸收峰，因此確定348 nm為測定波長。

（1）將配置好的黑色橡膠混合料運至攤鋪區域，開始人工攤鋪，控制好攤鋪速度，以確保塑膠面層的密實度和平整度，將攪拌好的黑色橡膠顆粒用送料車送到鋪設地點，用刮尺攤鋪，均勻攤平。

2.2　線性關系考察

精密吸取東莨菪內酯標準溶液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 分別置于 10 mL 的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配制成系列質量濃度的對照品溶液，在348 nm處進行測定，并以吸光度（y）對質量濃度（x）進行線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程：y=0.067 7x+0.019 8（r=0.999 2），結果表明對照品在0～0.020 mg/mL具有良好的線性關系。

2.3　精密度試驗

取1.2項下制備的樣品溶液，以甲醇為空白對照，連續6次測定其在348 nm處的吸光度，計算RSD為0.16%，表明儀器精密度良好。

2.4　重復性試驗

取1.2項下制備的樣品溶液，以甲醇為空白對照，在348 nm處測定吸光度，測得其吸光度并計算RSD值為1.88%，表明樣品的重復性良好（n=6）。

2.5　穩定性試驗

精密吸取東莨菪內酯對照品溶液，分別在0、10、20、40、80、120、240 min 時 348 nm 處進行紫外測定，測得吸光度并計算RSD值為0.62%，表明對照品在240 min內的穩定性良好。取1.2項下制備的樣品溶液，分別在 0、10、20、40、80、120、240 min，以甲醇為空白對照，在348 nm處測定吸光度，測得其吸光度并計算RSD值為1.34%，結果表明樣品在240 min內的穩定性良好。

2.6　加樣回收率的考察

精密量取1.2項下所配樣品溶液9份，各1.0 mL分別置于5 mL的容量瓶中，精密量取對照品標準液1.00 mL（0.067 2 mg），1.35 mL（0.090 7 mg），1.60 mL（0.107 5 mg）3個水平各3份加入樣品溶液中，加甲醇稀釋至刻度，并以甲醇為空白對照，在348 nm處測定吸光度，由標準曲線計算平均回收率為102.44%，RSD為1.81%，結果見表1，表明該測定方法準確可靠。

表1　樣品加樣回收率試驗結果Table 1　Recovery test of the samples

2.7　樣品測定

精密量取4個不同發酵時間的諾麗果汁樣品，按照1.2項下方法制備供試品溶液，以甲醇為空白對照，在348 nm處測定吸光度，由標準曲線計算香豆素質量濃度。發酵25 d至500 d的諾麗果汁中香豆素質量濃度在17.59～24.26 mg/dL范圍內，結果見表2。

表2　不同發酵時間諾麗果汁的香豆素質量濃度結果Table 2　Coumarins content in Noni jucie with different fermented time

3　結語

本實驗建立的紫外分光光度法測定諾麗發酵果汁中總香豆素質量濃度的方法簡便快捷且穩定可靠，適用于液體類樣品中香豆素成分質量濃度的檢測。

前期文獻報道諾麗植物中所含香豆素主要為吡喃型香豆素，已分離得到東莨菪內酯、異東莨菪內酯、東莨菪苷，東莨菪內酯具有解熱、舒張血管和抑制PC3細胞增殖與誘導凋亡等生理活性[11-13]，是諾麗發酵果汁中的一類重要活性物質。本研究結果顯示諾麗發酵果汁中香豆素成分的質量濃度隨發酵時間的增長變化不大，表明此類成分在發酵過程中較穩定。本研究為后期諾麗發酵工藝的研究及相關生產的質量控制奠定了理論基礎。

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