H7Re-1疫苗篩選及免疫效果評估*

常海霞 ，崔雪志 ，沈志勇 ，魯守偉 ，李儼 ，吳蕾 ，徐璇 ，許傳田

(1.山東新希望六和集團有限公司，山東 青島 266101；2.山東省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，山東省畜禽疫病防治與繁育重點實驗室，山東 濟南 250100；3.臨沂市臨港區(qū)壯崗鎮(zhèn)獸醫(yī)站，山東 臨沂 276615）

禽流感（Avian influenza，AI）是由 A 型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的傳染性疾病。禽流感病毒屬于RNA病毒的正黏病毒科流感病毒屬，其最顯著的生物學特性是是亞型眾多、變異頻繁[1]。根據AIV對禽類致病性的差異，將AIV分為高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感病毒，高致病性禽流感病毒目前僅見于H5、H7兩個亞型[2]。2013年以來，我國部分地區(qū)時有人感染H7N9亞型流感病毒的病例出現，并時有從禽群或市場活禽及環(huán)境檢出對家禽低毒或無毒力H7N9亞型禽流感病毒[3-6]。

為有效防控H7N9亞型禽流感，2017年7月農業(yè)部發(fā)布關于切實做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知，要求從2017年秋季開始對全國家禽全面開展H7N9免疫[7]。本試驗通過將60只SPF雞分別接種四個廠家H7Re-1疫苗，檢測免疫后H7抗體，篩選出抗體最高的疫苗廠家，推薦肉種雞場試用并對試用肉種雞場跟蹤檢測H7抗體，為肉種雞場使用免疫效果好的H7Re-1疫苗提供參考。

1 材料和方法

1.1 主要試劑 禽流感病毒H7亞型血凝抑制試驗抗原、禽流感病毒H7亞型陽性血清購自哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.2 主要儀器、設備 SPF雞負壓隔離器購自蘇州馮氏實驗動物設備有限公司（型號GJ-1型）。

1.3 試驗動物 SPF雞和SPF雞胚均由山東省農業(yè)科學院家禽研究所SPF雞場提供，試驗場所為齊魯動物保健品有限公司動物房，試驗在負壓隔離器中進行。

1.4 動物試驗

1.4.1 SPF雞免疫 將70只1d SPF雞隨機分5組（每個試驗組15/只，對照組/10只），三個隔離器中飼養(yǎng)，每只SPF雞佩戴不同顏色的腳環(huán)區(qū)分，免疫日齡、劑量、方式、廠家，見表1。

表1 SPF雞免疫日齡、劑量、方式、廠家

1.4.2 種雞場免疫 三個不同肉種雞場免疫周齡、免疫劑量、免疫方式、疫苗廠家見表2。

表2 肉種雞場免疫周齡、疫苗廠家及劑量

1.4.3 血清采集和抗體檢測 SPF雞免疫后，分別在 23、30、37、44、51、58d 采血，每份血清不少于0.5ml，樣品做好標記，-20℃保存統一檢測。肉種雞場均在免疫前采集血清，并在免后4周采集血清檢測（每棟隨機采集16個樣品）。

HI/HA試驗方法按常規(guī)進行[8]。結果判定：以完全抑制4單位抗原的最高血清稀釋倍數判為該血清的HI效價。陽性對照孔血清的HI效價誤差不超過1個滴度，陰性對照血清的HI效價不高于2log2時試驗方可成立。被檢血清HI效價≥4log2判為陽性，HI效價＜4log2判為陰性[9]。

2 結果

2.1 雞群免疫后抗體陽性率 SPF雞一次免疫H7Re-1疫苗后，1～3組 SPF雞 H7抗體陽性率100%，4組SPF雞H7抗體陽性率86.7%；二次免疫H7Re-1疫苗后1～4組SPF雞H7抗體陽性率均達100%。肉種雞場X場、Y場、Z場首免H7Re-1后抗體陽性率即達100%。免疫H7Re-1后抗體陽性率情況見表3、表4。

表3 SPF雞免疫H7Re-1后抗體陽性率

表4 肉種雞場免疫H7Re-1后抗體陽性率

2.2 SPF雞免疫H7Re-1疫苗后H7抗體結果SPF雞首免后14d檢測H7抗體均在4log2以上；二免后28d免疫H7Re-1后SPF雞H7抗體均達到高峰，1組（A廠家疫苗）最高為11.13log2，對照組H7抗體為0。

從H7抗體曲線可看出，H7Re-1疫苗免疫后，免疫 A公司SPF雞群 H7抗體最高，CV值最好(見圖 1、圖2)，推薦肉種雞場試免 A廠家 H7Re-1疫苗。

圖1 SPF雞免疫H7Re-1疫苗后H7抗體曲線

圖2 SPF雞免疫各公司疫苗后CV值曲線

2.3 肉種雞場免疫H7Re-1后抗體結果 肉種雞場雞群免疫H7Re-1疫苗前H7抗體平均值低于1log2，免疫A公司 H7Re-1疫苗后，各場 H7抗體均顯著上升，首免后四周H7抗體在6log2左右；二免后4周H7抗體在8log2左右；三免后四周H7抗體值在9log2左右；三個場肉種雞群兩次免疫后抗體 CV值在15%以下，見圖3、圖4。

圖3 肉種雞場免疫H7Re-1后抗體

圖4 肉種雞場免疫H7Re-1后CV值

3 討論

SPF免疫H7Re-1后，SPF雞產生H7抗體水平的差異可能與疫苗廠家的生產工藝、佐劑、抗原含量等有關。SPF雞群和肉種雞群分別免疫兩次A廠家H7Re-1疫苗，二免4周后檢測H7抗體相差2.6log2，這可能與免疫日齡、免疫間隔、雞的品種、飼養(yǎng)管理等有關［10］。

在SPF雞群和肉種雞群的檢測均表明，雞群免疫兩次H7Re-1疫苗均可達到較好的免疫效果，建議種雞場至少免疫兩次H7Re-1疫苗，才能確保為雞群提供較好的免疫保護。值得注意的是國家批準的H7Re-1疫苗是H5+H7二價滅活疫苗（H5N1Re-8+H7N9H7Re-1）， 因此評估 H7Re-1疫苗時應同時考慮H5N1Re-8的免疫效果。

本研究為父母代種雞場防控H7N9禽流感提供數據參考，眾所周知，疫苗是防治傳染性疾病最后的一道防線，家禽養(yǎng)殖場不能完全依靠疫苗，再好的疫苗也不能提供完全保護。因此養(yǎng)殖場通正確免疫H7N9疫苗后，還要不斷的進行抗體檢測和評估，及時了解疫苗的抗體產生規(guī)律，不斷完善免疫程序，才能把疫苗的作用落實到實處。同時要結合有效的生物安全部措施，有效控制H7N9的流行。

參考文獻：

[1] Y.M.Saif主編.蘇敬良等譯.禽病學[M].北京：中國農業(yè)出版社，2012，171-193.

[2] 修文瓊，鄭奎城.新型 H7N9禽流感病毒研究進展[J].中國人獸共患病學報,2014，30（6）∶636-644.

[3] 秦彥珉，梅樹江，謝旭，等.深圳市19例人感染H7N9禽流感確診病例流行病學分析[J].中國公共衛(wèi)生，2015(01)∶11-13.

[4] 胡錦峰，王雙英，金濤，等.杭州市上城區(qū)8例人感染H7N9禽流感確診病例流行病學分析[J].疾病監(jiān)測，2013(09)∶717-719.

[5] 曾寒飛.四川省雞場禽流感免疫程序調查及抗體水平監(jiān)測[D].成都：四川農業(yè)大學,2014.

[6] 農業(yè)部.2013年下半年動物H7N9禽流感監(jiān)測方案[J].吉林畜牧獸醫(yī),2013(09)∶7-8.

[7] 農業(yè)部.關于切實做好全國高致病性禽流感秋季免疫工 作 的 通知 [EB/OL].(2017-07-10).http∶//www.moa.gov.cn/govpublic/SYJ/201707/t20170711_5744436.htm.

[8] 中華人民共和國國家標準.GB/T18936-2003，高致病性禽流感診斷技術[S].2003.

[9] 農業(yè)部.2007年高致病性禽流感和口蹄疫等重大動物疫病免疫方案[EB/OL].(2017-02-07).http∶//www.moa.gov.cn/xw/zwdt/200702/t20070207_770601.htm.

[10]彭英波.山區(qū)家禽禽流感免疫抗體監(jiān)測與分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2014，12（5）：129-130.