東莞地區(qū)831例地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果分析

華仙麗 ，李敬河 ，梁愛(ài)芬 ，雷亞麗 ，隋洪

(1、東莞康華醫(yī)院，廣東 東莞 523080；2、東莞市石碣醫(yī)院，廣東 東莞 523290)

地中海貧血（Thalassemia）是一組溶血性貧血病，呈現(xiàn)常染色體隱性遺傳規(guī)律，是由于人體珠蛋白基因突變或者缺失而導(dǎo)致某種珠蛋白鏈合成障礙，造成α，β-珠蛋白肽鏈合成速率的不平衡而導(dǎo)致的溶血性貧血。地貧為世界上發(fā)病率最高、危害性最大的單基因遺傳性疾病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，廣東省人群中α，β地貧基因的攜帶率高達(dá)11.07%，是地貧的高發(fā)區(qū)[1]，地中海貧血被列為廣東省出生缺陷重點(diǎn)干預(yù)病種。東莞市地處珠三角，人口結(jié)構(gòu)復(fù)雜，聚居了南方各省務(wù)工人員，有較復(fù)雜的基因背景。為此，作者對(duì)本地區(qū)疑似地貧的831名患者進(jìn)行了α與β地貧的基因診斷，檢測(cè)外周血，以期獲得本地區(qū)地中海貧血病分布特征，為地貧的防控和降低出生缺陷積累資料?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 2016年1月至2017年7月，在東莞康華醫(yī)院就診的門診和住院患者。平均紅細(xì)胞體積 （MCV）＜82fL和 （或）平均血紅蛋白含量（MCH）＜27pg做為初篩陽(yáng)性指標(biāo)[2]，共 831例標(biāo)本。其中男259例，女572例，年齡1月～84歲，平均年齡28.59歲。其中368例進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測(cè)，HBA2＜3.5，HBF＜3.0(孕婦＜5.0) 檢測(cè) α 地貧基因，HBA2＞3.5同時(shí)檢測(cè)α和β地貧基因[3]。463例患者未做血紅蛋白電泳檢測(cè)，血常規(guī)初篩陽(yáng)性，同時(shí)檢測(cè)α和β地貧基因。

1.2 樣本采集和處理 抽取患者外周血2ml，EDTA-K2抗凝全血，及時(shí)送檢，置于2～8℃冰箱中保存并于一周內(nèi)檢測(cè)。

1.3 儀器 ABI 2720基因擴(kuò)增儀、DYY-8電泳儀、SHA恒溫水浴搖床等。

1.4 試劑 采用深圳益生堂公司生產(chǎn)的地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒。嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作與結(jié)果判讀。

1.5 檢測(cè)方法

1.5.1 缺失型α-地中海貧血基因檢測(cè)采用跨越斷裂點(diǎn)的PCR技術(shù)(也稱裂口PCR，Gap-PCR)結(jié)合瓊脂糖電泳技術(shù)，檢測(cè)東南亞型缺失(--SEA)、右側(cè)缺失 (-α3.7)、左側(cè)缺失 (-α4.2)和泰國(guó)型缺失(--THAI)。

1.5.2 非缺失型α-地中海貧血基因采用PCR-膜反向點(diǎn)雜交技術(shù)(PCR-RDB)檢測(cè)3種非缺失型α地中海貧血突變（Hb WS、Hb CS與Hb QS）

1.5.3 β地中海貧血基因檢測(cè)采用PCR-膜反向點(diǎn)雜交技術(shù)(PCR-RDB)檢測(cè)17種基因位點(diǎn)突變，分別是 CD41-42、IVS-2-654、-28、CD7l-72、CD17、βE、CD31、CD27/28、IVSI-1、CD43、-32、-29、-30、CD14-15、CAP、Int、IVS-1-5。

2 結(jié)果

831例受檢標(biāo)本中，檢測(cè)到有基因改變（α及β地貧）的有625例，占總檢測(cè)對(duì)象的75.21%，⑴α-地貧基因檢測(cè)結(jié)果檢出α地中海貧血基因攜帶者412例；檢出率為 49.58%，其中--SEA/αα 302例，占α地中海貧血所有突變類型的73.30%，是東莞地區(qū)α地中海貧血主要類型，檢出α雜合子391例，HbH 21例。α雙重雜合子21例。α基因型分布見(jiàn)表1；⑵β-地貧基因檢測(cè)結(jié)果 檢出β-地中海貧血基因攜帶者243例，檢出率為29.24%。檢出10種β-地中海貧血基因突變類型，其中CD41-42/N 90例、βIVS-2-654/N 68例、CD17/N 35例、-28/N 30例，4種β-地中海貧血基因突變共217例，占所有β-地中海貧血突變類型的91.77%。檢出2例復(fù)合型β-地中海貧血，1例IVS-2-654純合子。β基因型分布見(jiàn)表2；⑶檢測(cè)到αβ復(fù)合地貧30例，基因型分布見(jiàn)表3。

3 討論

地中海貧血是一種常染色體隱性遺傳病，只在純合子（aa）時(shí)才發(fā)病，基因攜帶者（Aa）通常為正常表型，不需要進(jìn)行治療。部分地貧基因攜帶者并不知道自己是攜帶者，易被忽略。同型攜帶者婚配的下一代有1/4的機(jī)會(huì)患重癥地中海貧血，出現(xiàn)嚴(yán)重貧血癥狀。α地中海貧血的HbBarts水腫胎多在妊娠晚期或出生后數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡，嚴(yán)重影響母親的身心健康；HdH病終身輕度或重度貧血和肝脾腫大，但個(gè)體差異較大，嚴(yán)重者類似重型β地中海貧血癥[4]，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量。重型β地中海貧血由于幾乎不能合成正常的珠蛋白，貧血嚴(yán)重，需要靠輸血結(jié)合除鐵劑治療維持生命，不接受治療的重癥患兒常常因發(fā)育遲緩而呈典型的“地貧面容”，常在五歲以前因嚴(yán)重貧血或繼發(fā)感染在兒童期死亡[5]，為家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前對(duì)攜帶者檢查及產(chǎn)前基因診斷是唯一防止重癥患兒出生有效措施。所以應(yīng)用DNA分析技術(shù)對(duì)該病進(jìn)行早期產(chǎn)前診斷并選擇性終止妊娠防止重型地中海貧血患兒的出生，是目前國(guó)際上公認(rèn)的首選辦法，有著重要的優(yōu)生學(xué)意義[6]。

表1 α-地中海貧血各基因突變類型及比例(n，%)

表2 β-地中海貧血各基因突變類型及比例(n，%)

表3 αβ復(fù)合型地中海貧血檢測(cè)結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)以MCV<82fL和 （或）MCH<27pg做為初篩陽(yáng)性指標(biāo)，初篩陽(yáng)性的831例標(biāo)本，檢測(cè)到有基因改變（α及β基因）的有625例，占總檢測(cè)對(duì)象的75.21%，檢出α-地中海貧血基因攜帶者412例，占基因陽(yáng)性者65.92%；檢出β-地中海貧血基因攜帶者243例，占基因陽(yáng)性者38.88%；其中α及β復(fù)合地貧30例，占基因陽(yáng)性者4.8%。

在831例受檢人群中，共檢出標(biāo)準(zhǔn)型--SEA/αα302例，占檢出α-地中海貧血的73.30%，是東莞地區(qū)α-地中海貧血的主要類型。檢出靜止型62例， 其中-α3.7/αα 42 例，-α4.2/αα20 例， 分別占α-地中海貧血突變類型的10.19%及4.85%。與何怡等[7]的報(bào)道相似。 數(shù)據(jù)顯示，--SEA/、-α3.7/和-α4.2/最常見(jiàn)的3種基因缺失類型，占α地貧的91.99%（379/412）。另外本數(shù)據(jù)還檢出--THAI攜帶者 5 例，α 點(diǎn)突變（WS、CS、QS）攜帶者 28 例，檢出HbH 21例。雖然α地貧大部分的患者可以用Gap-PCR方法進(jìn)行診斷，但也不能忽視點(diǎn)突變型α地貧，因?yàn)辄c(diǎn)突變型血紅蛋白H病 （如--SEA/αCSα，--SEA/αQSα） 的貧血癥狀比缺失引起的血紅蛋白H病更嚴(yán)重。

不同地區(qū)、不同種族的人群常見(jiàn)β基因突變類型存在差別[6，7]。本實(shí)驗(yàn)檢出10種β-地中海貧血基因突變類型，CD41-42/N(90 例，37.04%)、IVS-2-654/N(68 例，27.98%)、CD17/N(35 例，14.40%)、-28/N(30 例，12.35%)共占 91.77%(223/243)，說(shuō)明這 4種突變類型是東莞地區(qū)最常見(jiàn)的β基因突變類型，與廣東廣州、深圳地區(qū)同類研究結(jié)果相似[9-11]。與廣東中山、梅州、汕頭地區(qū)[12-14]的β地貧的攜帶類型有區(qū)域性差別。迄今為止，中國(guó)人群已發(fā)現(xiàn)30余種β珠蛋白基因的點(diǎn)突變，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的17種基因型覆蓋了我國(guó)β突變類型的95%以上[15]，本實(shí)驗(yàn)所用方法（PCR-RDB）無(wú)法檢出缺失型β-地中海貧血和其他少見(jiàn)的β突變類型。因此，在產(chǎn)前檢查中對(duì)于地貧初篩陽(yáng)性，HbA2升高提示存在β地貧，而常規(guī)PCR-RDB方法未檢測(cè)到突變者要進(jìn)行測(cè)序分析，避免罕見(jiàn)突變?chǔ)碌刎毣颊叩穆┰\，從而避免罕見(jiàn)突變引起重型β地貧患兒的出生[16]。

在831例受檢人群中，發(fā)現(xiàn)α及β復(fù)合地中海貧血30例，占基因陽(yáng)性者4.8%，在表型篩查中，α及β個(gè)體的HbA2值在3.5至6.8之間，因此，臨床上易誤診為單一的β地貧攜帶者，產(chǎn)前診斷中若僅進(jìn)行β-地貧基因診斷，忽視α-地貧基因診斷，會(huì)導(dǎo)致重癥α地貧患兒的出生[17]。因此，在HbA2升高的可疑地貧人群中，有必要α和β基因一起檢測(cè)，以免漏檢α和β地貧基因攜帶情況。

由于東莞地區(qū)人群多來(lái)自廣東，廣西，湖南，海南等地貧高發(fā)地區(qū)，開(kāi)展地貧的宣傳教育和大規(guī)模人群篩查，對(duì)指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育有著重要意義。本研究結(jié)果有助于更深入地了解東莞地區(qū)地中海貧血基因突變的類型、頻率和分布，也為在當(dāng)?shù)亻_(kāi)展地貧防治知識(shí)的宣傳、遺傳咨詢、產(chǎn)前診斷、防止重癥地貧患兒的出生等工作提供有力的支持。

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