血涂片法復(fù)核在血小板計數(shù)減少的應(yīng)用價值

楊良，楊斌

(銅仁市人民醫(yī)院檢驗科，貴州 銅仁 554300)

血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板，是各實驗室常用和必不可少的快速檢測方法，作為血常規(guī)檢查項目之一的血小板計數(shù)，其檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性越來越受臨床醫(yī)生和患者關(guān)注。目前所有計數(shù)血小板的方法對于血小板減少的標(biāo)本，都存在不少缺陷，影響因素也較多，其準(zhǔn)確性都比較差，血細(xì)胞分析儀需雖可以用低值血小板計數(shù)模式計數(shù)，對低值血小板計數(shù)來說，這種計數(shù)模式計數(shù)的結(jié)果準(zhǔn)確性是否可靠值得探討[1]。特別對極低血小板來說，血涂片法其價值更大[2]，本文采用血涂片間接計數(shù)血小板的方法，探討血涂片法計數(shù)血小板減少的復(fù)核作用[3]。

1 材料與方法

1材料

1.1 標(biāo)本采集 收集2016年10月至2017年4月在本院住院及門診病人標(biāo)本，共147例，本次實驗血小板低組（50～100）×109/L 組 60例；血小板較低組 （20～50）×109/L 52 例； 血小板極低組＜20×109/L 35例；以同期血液分析儀所作質(zhì)控結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，所有標(biāo)本均為EDTA-K2抗凝靜脈血。

1.2 儀器 Sysmex-XN1000血液分析儀、奧林巴斯顯微鏡、血細(xì)胞計數(shù)板。

1.3 試劑 Sysmex-XN1000血液分析儀及其配套試劑，瑞吉氏染液、10ɡ/L草酸銨稀釋液。

2 方法

2.1 血液分析儀法 Sysmex XN1000全自動血液分析儀檢測血小板，血液中的血細(xì)胞成分通過檢測通道時產(chǎn)生脈沖信號，根據(jù)白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板的脈沖信號強(qiáng)弱歸類收集，計數(shù)2～20fl的脈沖信號數(shù)值為血小板數(shù)值。每日進(jìn)行高中低3個水平質(zhì)控且在控。所有標(biāo)本采集后于1h內(nèi)完成檢測。

2.2 手工法計數(shù) 顯微鏡手工血小板計數(shù)，利用草酸銨稀釋液，按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第4版操作。

2.3 血涂片法 取抗凝血10μl涂片，經(jīng)瑞氏染色后計數(shù)血涂片中的血小板數(shù)。在油鏡下選擇血涂片上細(xì)胞分布均勻且細(xì)胞間無重疊的區(qū)域，在計數(shù)1000個紅細(xì)胞的同時計數(shù)血小板數(shù)，求得血小板與紅細(xì)胞比值，將此比值乘以同一份標(biāo)本經(jīng)血細(xì)胞分析儀測定所得的紅細(xì)胞數(shù)，得到該血涂片法計數(shù)的血小板數(shù)。

2.4 統(tǒng)計 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS軟件配對t檢驗比較及和P值判斷。

2 結(jié)果

見表1。

表1 47例血小板計數(shù)減少3種計數(shù)方法的比較（x±s）

3 討論

血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板，是各實驗室常用和必不可少的快速檢測方法，作為目前臨床常用的自動化血液分析儀，其檢測標(biāo)本的數(shù)量及速度是手工法所無法比擬的[4]。雖然血細(xì)胞分析儀具有速度快和批量大的優(yōu)點(diǎn)，但也有血涂片法不可替代的，尤其在近年來對血涂片的復(fù)核要求更為突出。國際血液學(xué)組織提出了顯微鏡復(fù)檢的41條建議性標(biāo)準(zhǔn)，得到中國血液檢驗學(xué)界的密切關(guān)注，同時也是很多實驗室作為血涂片復(fù)核的參考標(biāo)準(zhǔn)。

目前所有的血小板計數(shù)方法，都存在不少缺陷，尤其對低值血小板計數(shù)來說，體現(xiàn)得更為重要。血液分析儀對血小板計數(shù)減少，尤其是極低值血小板標(biāo)本，不能很好地反映血小板的實際數(shù)量，此時往往需要依靠顯微鏡血涂片觀察輔助診斷血小板減少癥。文獻(xiàn)報道血涂片法血小板計數(shù)與血細(xì)胞分析儀計數(shù)結(jié)果差別不大，國內(nèi)也有相關(guān)文獻(xiàn)報道[5]，認(rèn)為儀器法對檢測血小板低值標(biāo)本的準(zhǔn)確性較差，應(yīng)以血小板手工計數(shù)法復(fù)檢，以保證可靠性[6]。本次實驗采用血涂片方法來計數(shù)血小板數(shù)量，經(jīng)在顯微鏡下仔細(xì)辨認(rèn)與識別血小板的形態(tài)與大小，從而進(jìn)行間接計數(shù)。我們對147例血小板減少標(biāo)本進(jìn)行計數(shù)，血小板低組和較低組，血涂片法分別與血液分析儀法及手工法比較，P值均＞0.05。血小板極低組，血涂片法分別與血液分析儀法及手工法比較，P值＜0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與文獻(xiàn)報道基本吻合[7]；血涂片法計數(shù)血小板，不僅可以對血液分析儀計數(shù)進(jìn)行復(fù)核，還可以觀察血小板形態(tài)及大小，區(qū)別和判斷所謂“非血小板顆粒”對計數(shù)的影響。血涂片鏡檢的另一優(yōu)點(diǎn)是可直觀地觀察到巨大血小板、纖維蛋白絲、血小板假性聚集等，進(jìn)而采取其它方法及時校正血小板計數(shù)，得到真實的血小板結(jié)果[8]。這些情況僅通過儀器重新復(fù)做血小板是無法解決的。此外，對血小板減低的標(biāo)本進(jìn)行血涂片血小板計數(shù)，可在一定程度減少標(biāo)本的復(fù)做頻率，降低檢驗成本，提高了準(zhǔn)確率。

采用血涂片可以直觀地間接計數(shù)血小板，對血液分析儀結(jié)果進(jìn)行復(fù)核，這對血小板減少者來說尤為重要[9]。對于血小板減少癥以及需要輸注血小板的患者來說，輸注血小板的療效評價，主要是觀察臨床癥狀是否得到改善，輸入的血小板進(jìn)入患者循環(huán)血液后，血小板計數(shù)在短期內(nèi)可能會升高明顯，但可能很快游離到出血部位參與止血而被消耗，因此，計數(shù)輸注血小板后的血小板數(shù)量有十分重要的臨床意義。同時血涂片法還具有很好的保存性，當(dāng)血小板數(shù)量正常，而形態(tài)不正常時，有利于辨認(rèn)血小板形態(tài)，同時更加有助于臨床疾病的診斷治療。總之，血涂片計數(shù)血小板可以用于對血液分析儀的復(fù)核[10]，是值得推廣應(yīng)用、快速、簡便之方法，具有較高的臨床應(yīng)用價值。

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