HISCL-5000高敏發光酶免疫分析儀性能評價及定量檢測感染性標志物臨床應用

王曉萌，辛穎，張樂，顏艷，胡靜儀，張飚

(天津市環湖醫院檢驗科，天津市腦血管病和神經變性重點實驗室，天津 300350)

按照醫學實驗室認可和醫療機構臨床實驗室管理辦法的要求，臨床實驗室所用的方法、儀器等應保證檢驗結果的準確可靠，臨床實驗室應對所用的儀器和方法學進行性能驗證和評價，以保證所選用的方法、試劑、儀器達到臨床性能、分析性能和經濟性能等各方面的要求[1，2]。因此對本院新購買的Sysmex HISCL-5000全自動高敏發光免疫分析儀分別從攜帶污染率、批內精密度、日間精密度、線性范圍、檢出限等方面進行性能驗證，并對臨床標本檢測結果進行了分析。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 全自動高敏發光免疫分析儀HISCL-5000及原裝配套試劑、校準品和質控品，由日本Sysmex醫學電子（上海）有限公司提供。檢測項目：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HBeAg）、乙型肝 炎 e抗 體 （HBeAb）、 乙 型 肝 炎 核 心 抗 體（HBcAg）、丙型肝炎抗體（HCV-Ab）、梅毒螺旋體抗體（TP-Ab）。 HBsAg、HCV-Ab 和 TP-Ab 膠體金標記試劑由上海科華公司提供。

1.2 驗證方法

1.2.1 攜帶污染率驗證 參照衛生部 《臨床血液學檢驗項目的分析質量要求》行業標準，選取HB-sAg＞2000IU/ml的高濃度血液樣本和 HBsAg＜0.03IU/ml低濃度血液樣本，連續測定3次，測定值分別記為 H1、H2、H3 和 L1、L2、L3。 按公式：攜帶污染率=|(L1－L3)|/(H3-L3)計算攜帶污染率。

1.2.2 批內精密度驗證 參考美國CLSI EP15-A2指南文件[3]，分別選取各驗證項目高濃度和低濃度的臨床血清樣本2份，重復檢測20次，計算20次檢測結果的算術平均值（MEAN）、標準差（SD）和變異系數(CV)。以精密度CV值小于或等于廠商給定的10%為判斷標準。

1.2.3 日間精密度驗證 參考美國CLSI EP15-A2指南文件，使用高低2個濃度水平的質控品，每天至少檢測4次，連續檢測5d，計算Mean、SD和CV值。

1.2.4 線性驗證 參考美國CLSI EP6-A指南文件[4]，進行HBsAg和HBsAb線性試驗，選取高值、中值、低值臨床樣本，將樣品按100%、80%、60%、40%、20%、0%的比例進行稀釋，每個稀釋度重復測定2次，計算均值。結果進行線性回歸分析，計算y=ax+b，計算相關系數r和決定系數R2。

1.2.5 檢出限驗證 參考CLSI EP15-A2文件，用廠商配套校準品和稀釋液，將濃度為0.25IU/ml的HBsAg和10mIU/ml的HBsAb的校準品對倍稀釋成5個濃度系列，作為驗證的樣本，每個濃度連續檢測20次，計算CV，CV<20%最低濃度為檢測限。

1.2.6 HISCL-5000分析儀檢測臨床樣本結果分析常規檢測2016年5月至2016年11月天津市環湖醫院。門診及住院患者臨床樣本11785例，其中HBsAg、HCV-Ab和TP-Ab陽性樣本，應用膠體金方法進行重復檢測。

1.2.7 統計學分析 應用SPSS 16.0軟件進行數據處理及統計學分析，計數資料以例數或百分率表示，兩種方法檢測陽性率比較采用配對卡方檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 攜帶污染率驗證結果 根據儀器廠家要求攜帶污染率<1.0%為合格，檢測結果見表1。

表1 HISCL-5000分析儀攜帶污染率驗證結果

2.2 批內精密度驗證結果 各項目檢測結果見表2，所有項目檢測結果均符合儀器廠商規定批間CV≤10%的要求。

表2 HISCL-5000分析儀批內精密度驗證結果

2.3 日間精密度驗證結果 日間精密度驗證結果見表3，所有項目結果均符合儀器廠商規定日間精密度CV≤10%的要求。

表3 HISCL-5000分析儀日間精密度驗證結果

2.4線性驗證結果 選取的高值、中值、低值濃度分 別 為 2371.27IU/ml，146.16IU/ml，19.26IU/ml 三份HBsAg陽性標本；和濃度為 718.75IU/ml，134.0IU/ml，36.25IU/ml三份HBsAb陽性標本。按照100%、80%、60%、40%、20%、0%的比例稀釋后。每個濃度檢測兩次取平均值，進行線性回歸分析，檢驗HBsAg和HBsAb檢測系統的稀釋線性，要求a值范圍1±0.05，r≥0.95。兩個項目三個濃度稀釋后都呈現較好的線性相關性，其線性方程和相關系數見表4。

2.5 檢測限驗證結果 HBsAg和HBsAb定值標準品用配套稀釋液稀釋為規定濃度，進行重復檢測，結果見表5。本次驗證HBsAg和HBsAb檢測下限分別為0.0071IU/ml和0.306mIU/ml，低于廠家聲稱的 0.03IU/ml和 5mIU/ml。

2.6 HISCL-5000分析儀檢測臨床樣本感染性標志物結果分析 HISCL-5000分析儀檢測11785例臨床 患 者 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HCV-Ab、TP-Ab等指標，其中HbsAg陽性331例，陽性率2.81%（331/11785），結果在 0.03-5.0IU/ml范圍內的39例，占HBsAg陽性標本的11.78%（39/331），大于或等于5.0IU/ml 292例，占陽性標本的88.22%（292/331）；HCV-Ab 陽性 88例， 陽性率0.75（88/11785），TP-Ab 陽性 147 例，陽性率 1.25%(147/11785)。乙肝五項檢出模式見表 6，HBsAg、HCV-Ab、TP-Ab陽性結果均經快速膠體金標記法進行復檢，HISCL-5000檢測陽性的HBsAg、HCVAb和TP-Ab標本，膠體金方法檢測分別有9例、12例和11例陰性，兩種方法符合率見表7。

3 討論

乙型肝炎、丙型肝炎和梅毒分別是由乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和蒼白螺旋體感染引起的嚴重危害人類健康的重要傳染病。乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的靶器官是人體肝臟，病毒可損傷肝細胞，導致細胞壞死死亡，最終可引起肝硬化和肝癌[5，6]。梅毒可經性接觸和血液傳播，感染后可引起全身系統性癥狀，近年來梅毒感染率在我國有逐年上升趨勢[7]。目前，手術、輸血和各種穿刺前對 患 者 進 行 乙 肝 五 項 （HBsAg，HBsAb，HBeAg，HBeAb，HBcAb），HCV-Ab，TP-Ab 和 HIV-Ab 檢測已成為患者就醫過程中的必檢項目。近年來對這些感染性標志物檢測逐漸從定性的手工方法發展到自動化的化學發光法。高敏化學發光酶免疫分析儀5000（HISCL-5000）是一款新型全自動定量檢測系統，該系統采用新型底物CDP-Star，增加了檢測靈敏度，檢測限更低，通過創新的B/F分離技術，最大限度降低非特異性反應，應用濾鏡切換技術，提升了濃度檢測線性范圍，降低標本稀釋頻率，縮短測試時間和試劑成本，該設備可在運行過程中隨時更換試劑和耗材，體現了儀器的高度智能化和分析測試的連續性，國內外已有文獻報道了其臨床應用[8，9]。

表4 HISCL-5000分析儀線性驗證結果

表5 HISCL-5000分析儀HBsAg和HbsAb檢測限驗證結果

表6 HISCL-5000分析儀檢測HBsAg陽性模式

表7 HISCL-5000分析儀檢測陽性結果與膠體金標記法檢測結果比較

根據實驗室管理和ISO5189的規范要求，新儀器應用前必須對其性能進行驗證。因此本研究首先對HISCL-5000檢測感染性標志物的性能進行驗證，結果顯示HISCL-5000分析儀攜帶污染率為0%，小于廠商要求的1%，表明該儀器可有效避免檢測過程中的交叉污染，確保結果的準確性。除了TP-Ab批間精密度和日間精密度CV%分別為9.87%和5.95%外，其余項目批內和日間精密度CV%均小于5%，遠小于廠商要求的10%，說明檢測結果穩定，重復性好。HISCL-5000檢測HBsAg和HBsAb高、中、低三個濃度線性范圍，R2均大于0.99，說明被測物濃度在分析線性范圍時，所測結果可信，更接近被測物質真值。因此HISCL-5000性能可滿足醫學實驗室認可的要求和臨床對感染性標志物定量檢測的需求。

隨后對HISCL-5000檢測的11785例臨床樣本結果進行了分析，結果顯示所檢測患者HBsAg陽性率為2.81%，明顯低于文獻報道的全國一般人口的7.18%[10]，慢性乙型肝炎聯合治療專家共識已經把HBsAg定量檢測作為臨床治療慢性乙肝的參考指標[11]，HBsAg定量也可以預測抗病毒治療反應和肝細胞癌的發生[12]。因此準確地定量檢測乙肝五項指標對于療效評估和病情監測有重要意義。HCV-Ab陽性率為0.75%，與文獻報道的結果相似[13，14]，丙型肝炎是輸血后肝炎的重要原因，定量檢測對輸血安全和有效避免醫療糾紛有重要意義。TP-Ab陽性率為1.25%，與我們以前報道的結果相符[15]，低于文獻報道的陽性率[13]。由于我院是神經科?？漆t院，因此HBsAg和TP-Ab陽性率低于綜合性醫院報道的陽性率可能與此有關。所有陽性結果應用膠體金標記方法復檢，三項指標陽性標本，均存在部分膠體金結果陰性，提示作為快速檢測方法的膠體金標記方法，敏感性較HISCL-5000差，存在一定的漏檢率。

總之，HISCL-5000高敏發光酶免疫分析儀具有靈敏度高、特異性強、線性范圍寬、攜帶污染低、檢測反應時間短、自動化程度高等優點，可以很好地滿足臨床對感染性指標的定量要求，能更好地用于患者病情監測和疫苗接種效果評價，HISCL-5000能為臨床乙型肝炎、丙型肝炎和梅毒的診斷、治療、動態監測和療效評估提供準確的科學依據。

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