非小細(xì)胞肺癌患者ALK、EGFR、KRAS基因的檢測(cè)及臨床病理特征

楊耀湘

在常見(jiàn)的惡性腫瘤中, 肺癌就是其中的一類, 同時(shí)還具有高死亡率。目前, 診斷和醫(yī)治的技術(shù)雖然呈上升的趨勢(shì), 但是, 就整體水平而言, 肺癌患者的預(yù)后效果還是不能使人滿意［1-6］。其中間變性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)、表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermalgrowth factor receptor,EGFR)、Kirsten鼠肉瘤(Kirsten rat sarcoma, KRAS)基因是肺癌的熱點(diǎn)靶向基因, ALK、EGFR已經(jīng)有與之相對(duì)應(yīng)的靶向藥物, 在臨床治療中, 取得很好的療效。本文研究了漢族非小細(xì)胞肺癌患者中ALK、EGFR、KRAS基因突變狀態(tài)及相關(guān)的臨床病理特征, 旨在促進(jìn)分子靶向治療的發(fā)展, 改善非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月～2017年3月本院收治并確診的100例非小細(xì)胞肺癌患者作為研究對(duì)象, 以上患者病理組織均用蠟塊保存。所有患者中, 男73例, 女27例；年齡≥60有62例, ＜60歲有38例；腺癌患者69例, 鱗癌患者20例, 其他癌癥患者11例。

1.2 方法

1.2.1 ALK融合基因的檢測(cè) 本組患者均利用VENTANA檢測(cè)試劑盒和VENTANA BenchMark XT及BenchMark GX自動(dòng)切片染色儀實(shí)施ALK交融基因檢測(cè), 一抗克隆號(hào)為VENTANA anti-ALK(DSF3), 操作的步驟需要遵循說(shuō)明書上的要求。

1.2.2 EGFR和KRAS基因突變檢測(cè) 部分患者采用PCR法檢測(cè)EGFR與KRAS基因突變情況, 試劑盒的生產(chǎn)商是廈門艾德公司, 是檢測(cè)EGFR 29種基因突變的試劑盒(amplification refractory mutation system, ARMS)以及 KRAS基因7種突變檢測(cè)試劑盒。EGFR基因的檢測(cè)點(diǎn)位為18外顯子G719A、G719S等；KRAS基因的檢測(cè)位點(diǎn)為位于2號(hào)外顯子12密碼子的6個(gè)突變位點(diǎn)(G1y12Ser、G1y12Asp、G1y12Cys、G1y12A1a、G1y12Va1、G1y12Arg)以及位于 13密碼子的1個(gè)突變位點(diǎn)(G1y13Asp)。操作步驟依據(jù)說(shuō)明書。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察及分析ALK融合基因異常、EGFR基因突變、KRAS基因情況, 并比較不同癌癥類型上述基因突變陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法進(jìn)行檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ALK融合基因檢測(cè)情況 100例患者全部進(jìn)行了ALK融合基因檢測(cè), 其中腺癌患者基因突變陽(yáng)性率為23.19%, 明顯高于鱗癌患者的5.00%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.534,P＜0.05)。見(jiàn)表 1。

表1 100例患者ALK融合基因檢測(cè)情況［n(%)］

2.2 EGFR基因突變檢測(cè)情況 有76例患者進(jìn)行EGFR基因突變檢測(cè), 其中腺癌患者基因突變陽(yáng)性率為46.55%, 明顯高于鱗癌患者的27.27%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.580,P＜0.05)。見(jiàn)表 2。

表2 76例患者EGFR基因突變檢測(cè)情況［n(%)］

2.3 KRAS基因突變檢測(cè)情況 有24例患者進(jìn)行KRAS基因突變檢測(cè), 其中腺癌患者基因突變陽(yáng)性率為50.00%, 明顯高于鱗癌患者的0, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.958, P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 24例患者KRAS基因突變檢測(cè)情況［n(%)］

3 討論

表皮生長(zhǎng)因子受體激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKI)是最先成功的研發(fā)出的抗擊腫瘤的藥物之一, 其是特定的靶向藥物, 其中典型的藥物代表為吉非替尼、厄洛替尼, 目前在臨床治療上已經(jīng)被廣泛的推廣使用, 取得良好的效果。但是, 對(duì)于藥物的耐受這一難點(diǎn), 目前還沒(méi)有得到良好的解決。有學(xué)者［7］對(duì)115815例非小細(xì)胞的肺癌患者, 對(duì)EGFR的基因測(cè)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)Meta分析顯示得出：30466例患者檢測(cè)結(jié)果屬于陽(yáng)性, 女性、腺癌患者是其主要的發(fā)生群體。在此次研究中, 46.05%屬于EGFR的突變結(jié)果, 也是多發(fā)生在腺癌的患者之中。在此次研究中, EGFR的突變率和相關(guān)學(xué)者的研究結(jié)果進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn), 前者高于后者, 但是, 與之相關(guān)的臨床癥狀和相關(guān)學(xué)者所得出的結(jié)果基本相似, 女性群體屬于多發(fā)群體, 以腺癌為主, 偶爾會(huì)有其他類型的腫瘤, 如：鱗癌、腺鱗癌等［8］。但是還有其他的觀點(diǎn)認(rèn)為年齡大的患者是EGFR突變的高危群體［9］。

EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的下游調(diào)控基因就是KRAS基因,發(fā)現(xiàn)的時(shí)間是在20世紀(jì)60年代, 但是, 到目前為止還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有效的治療藥物, 有學(xué)者經(jīng)過(guò)對(duì)全世界的41個(gè)研究的結(jié)果, 發(fā)現(xiàn)當(dāng)KRAS基因突變的時(shí)候, 非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后水平將變得很差, 同時(shí)KRAS基因突變和EGFR-TKI的耐藥性具有密切的關(guān)系。有學(xué)者［6］檢測(cè)332例非小細(xì)胞肺癌的KRAS基因發(fā)現(xiàn), 7.2%的屬于陽(yáng)性突變, 但是, 對(duì)于年齡和性別都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)產(chǎn)生陽(yáng)性突變之間的關(guān)系。在研究中發(fā)現(xiàn), 年長(zhǎng)具有吸煙史的男性, 組織學(xué)類型呈現(xiàn)腺癌特征的患者KRAS基因突變陽(yáng)性的較多［10］。在此次研究中, KRAS基因突變陽(yáng)性率為33.33%, 組織學(xué)類型多呈現(xiàn)在腺癌患者中, 本結(jié)果和其他的研究數(shù)據(jù)相一致［11］。本次研究中, 使用PCR法檢測(cè)EGFR及KRAS, 雖快捷, 但是有一定的風(fēng)險(xiǎn), 例如假陰性。

總之, 非小細(xì)胞肺癌患者中ALK、EGFR、KRAS基因突變的發(fā)生幾率較高, 同時(shí)ALK、EGFR、KRAS基因突變和患者的臨床癥狀有關(guān)聯(lián), ALK與EGFR或KRAS突變并不是絕對(duì)的彼此之間互相排斥, 個(gè)別患者有可能會(huì)有雙基因突變的產(chǎn)生。

［1］ 楊長(zhǎng)紹, 楊延龍, 丁曉潔, 等.非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織多驅(qū)動(dòng)基因聯(lián)合檢測(cè)及其臨床意義.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2017(11):1183-1187.

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［3］ 張海燕, 王捷, 陳曉東, 等.非小細(xì)胞肺癌患者EML4-ALK融合基因的檢測(cè)及其臨床病理特征分析.生物技術(shù)通訊, 2015,26(3):377-380.

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［11］ 劉靜, 姜桔紅, 顧瑩瑩, 等.非小細(xì)胞肺癌患者ALK, EGFR及KRAS基因的檢測(cè)及臨床病理特征.臨床與病理雜志, 2017,37(6):1146-1152.