CK7、TTF-1、p63在非小細胞肺癌患者體內表達變化的意義研究

韓永艷，劉銳，徐林松，聶彤，張桂榮

朝陽市中心醫院1呼吸科，2病理科，遼寧 朝陽 122000

非小細胞肺癌患者的總體生存預后較差，治療后患者的病死率較高。流行病學研究顯示，非小細胞肺癌的發病率可達233/10萬～554/10萬[1]，占各種類型肺癌的35%以上[2]。不同的因素及生物學因子的改變影響癌細胞的基因突變、癌細胞浸潤侵襲等，進而促進患者早期腫瘤的發生及中晚期惡性腫瘤的病情進展。細胞角蛋白（cytokeratin，CK）主要分布于上皮細胞，是角質細胞中的主要骨架蛋白，其表達濃度的上升能夠促進癌細胞骨架成分的合成，增加癌細胞的浸潤及轉移風險[3-4]；甲狀腺轉錄因子（thyroid transcription factor，TTF）在甲狀腺上皮細胞的病變過程中發揮了重要的作用，近年來，相關研究發現TTF在呼吸系統惡性腫瘤的早期癌細胞增殖特征的維持方面發揮了重要的作用[5-6]；p63是重要的細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶，其表達濃度的上升能夠誘導下游腫瘤信號通路的激活，促進癌細胞轉錄等病理過程的進展[7-8]。為了進一步揭示CK7、TTF-1、p63在非小細胞肺癌患者體內的表達變化及其臨床意義，從而為臨床上非小細胞肺癌的臨床診療及預后評估提供參考依據，本研究收集了相關病例，探討了不同指標的蛋白水平的表達及其與患者臨床病理特征的關系，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年7月至2017年2月在朝陽市中心醫院接受治療的80例非小細胞肺癌患者的非小細胞肺癌組織作為非小細胞肺癌組。納入標準：①年齡≥18周歲；②經病理學檢查確診為非小細胞肺癌者；③無其他系統嚴重疾病者。排除標準：①臨床資料不全者；②存在其他部位的原發腫瘤者。80例非小細胞肺癌患者中，男50例，女30例；年齡45～78歲，平均（57.23±4.11）歲。另外，選取80例非小細胞肺癌患者的正常肺組織作為對照組，男47例，女33例；年齡46～79歲，平均（57.25±4.08）歲。兩組患者的一般資料比較，差異無統計學意義（P﹥0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審批通過，且所有患者均自愿簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進行反復洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5 min，加入CK7、TTF-1、p63抗體（鼠來源，購自Abcam公司），37℃孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖溶液沖洗3次，每次1 min，滴加熒光染色標記的二抗抗體（購自Abcam公司），37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖溶液進行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產的顯色劑進行顯色，封片，鏡下觀察。

1.3 評價指標

觀察非小細胞肺癌患者CK7、TTF-1、p63的陽性表達率，比較不同臨床病理特征的非小細胞肺癌患者CK7、TTF-1、p63陽性表達率的差異，分析非小細胞肺癌患者CK7、TTF-1、p63陽性表達率的影響因素。CK7、TTF-1、p63主要在細胞核中表達，黃褐色即為陽性表達。根據顯色細胞評分：若顯色細胞占總細胞的10%及以下，則計0分；若顯色細胞占總細胞的11%～20%，則計1分；若顯色細胞占總細胞的21%～50%，則計2分；若顯色細胞占總細胞的51%及以上，則計3分。根據染色強度評分：若細胞無染色，則計0分；若細胞染色為淺黃色，則計1分；若細胞染色為棕黃色，則計2分；若細胞染色為黃褐色，則計3分。每例患者的總分=顯色細胞計分×染色強度計分；分值范圍為0～9分。根據評分的高低分為3個等級：陰性（—）為積分≤2分；陽性（+）為3～5分；強陽性（++）為6～9分。

1.4 統計學方法

采用SPSS 11.5統計軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Logistic回歸分析法分析非小細胞肺癌患者CK7、TTF-1、p63陽性表達率的影響因素。以P﹤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中CK7、TTF-1、p63陽性表達率的比較

非小細胞肺癌組織中CK7、TTF-1、p63的陽性表達率均明顯高于正常肺組織，差異均有統計學意義（P﹤0.001）。（表1）

表1 非小細胞肺癌組織和正常肺組織中CK7、TTF-1、p63陽性表達率的比較[n（%）]

2.2 不同臨床病理特征非小細胞肺癌患者CK7、TTF-1、p63陽性表達率的比較

不同TNM分期、淋巴結轉移、組織學分型和分化程度非小細胞肺癌患者的CK7、TTF-1、p63陽性表達率比較，差異均有統計學意義（P﹤0.05），其中，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、組織學分型為腺癌、低分化的非小細胞肺癌患者的CK7、TTF-1、p63陽性表達率高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、組織學分型為鱗癌、中高分化的非小細胞肺癌患者；不同年齡、性別非小細胞肺癌患者的CK7、TTF-1、p63陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）。（表2）

2.3 影響非小細胞肺癌患者CK7、TTF-1、p63陽性表達率的多因素分析

以非小細胞肺癌患者的CK7、TTF-1、p63陽性表達作為因變量，以非小細胞肺癌患者的TNM分期、淋巴結轉移情況、組織學分型、分化程度作為自變量，進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示，淋巴結轉移和組織學分型是非小細胞肺癌患者 CK7、TTF-1、p63陽性表達的影響因素（P﹤0.05）。（表3）

3 討論

非小細胞肺癌的復發率較高，非小細胞肺癌患者治療后的5年生存率、中位生存時間等生存指標的改善效果較為局限[9-10]。多中心隨機或者臨床對照研究顯示，非小細胞肺癌患者治療后的無瘤生存期不足24個月，治療后的病死率持續性維持在15%～25%[11]。而對于非小細胞肺癌基礎領域方面的研究，能夠為其早期診斷及臨床預后評估提供參考依據，特別是可以為腫瘤免疫靶向治療或者生物學治療提供新的作用靶點。

表2 不同臨床特征非小細胞肺癌患者CK7、TTF-1、p63陽性表達率的比較

表3 影響非小細胞肺癌患者CK7、TTF-1、p63陽性表達率的多因素分析

CK7是細胞角蛋白家族的重要成員，其表達濃度的改變對于細胞骨架成分的合成或者細胞形變能力的改變，可以提高癌細胞早期發生過程中突破基底膜的風險，導致癌細胞浸潤周期組織深度的改變，CK7能夠誘導癌細胞局部偽足的形成，提高癌細胞在細胞增殖過程中增殖速度的提升[12-13]。TTF-1不僅能夠參與到甲狀腺濾泡上皮細胞的轉錄及異常增殖過程中，同時還能夠影響到癌細胞的轉錄上游因子如cyc或者啟動子的激活，增加癌細胞的DNA擴增風險[14-16]。近年來基礎方面的理論認為，TTF-1在消化系統或者生殖系統等惡性腫瘤的病情進展過程中具有重要的促進作用，其能夠誘導癌細胞異型性的改變，導致細胞分化成熟障礙，但在非小細胞肺癌中的分析研究不足。p63作為重要的腫瘤相關效應蛋白，其對于下游的AKT或者MAPK信號通路上配體的結合作用，能夠誘導腫瘤在免疫逃逸、腫瘤干細胞特征的維持等，參與到臨床分期的進展等過程中[17-18]。有研究揭示了p63、TTF在非小細胞肺癌患者中的濃度變化，發現異常表達的相關指標與肺癌患者的生存預后密切相關，但有關其與患者臨床病理特征的關系分析較少。

本研究發現，在非小細胞肺癌患者的病灶組織中，可以發現CK7、TTF-1、p63等表達陽性率明顯上升，不同的指標會影響到非小細胞肺癌患者的病情進展。CK7、TTF-1、p63的異常表達與肺癌患者病情的關系，考慮與下列幾個機制途徑有關[19-20]：①CK7對于癌細胞適應性能力的改變，能夠誘導癌細胞增殖速度的變化，提高癌細胞的黏附淋巴結內皮細胞的能力；②TTF-1與轉錄調控因子的結合能夠誘導下游癌細胞局部氧化應激損傷的發生，促進癌細胞的凋亡抑制；③p63陽性表達率的上升能夠影響到細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶b的濃度，導致癌細胞周期的改變，促進癌細胞快速跨越G0期。王紅莉等[15]和胡鴻波等[21]探討了不同臨床病理特征肺癌患者的臨床資料，發現在發生了明顯的淋巴結轉移的肺癌患者中，細胞角蛋白及TTF等均明顯上升，而治療敏感度的下降或者病死率越高，腫瘤相關生物學因子的改變越明顯。癌細胞分化程度越低、臨床分期越高以及組織學分型越差，CK7、TTF-1、p63等的陽性表達率越高，提示不同的指標與非小細胞肺癌患者的臨床病理特征密切相關，臨床上可以通過隨訪評估術后肺癌患者病灶組織中的CK7、TTF-1、p63陽性表達率的變化，進而為腫瘤的高危隨訪提供參考。而其內在聯系機制考慮可能與相關指標對于淋巴結誘導內皮黏附分子（adherin）的上調有關，同時CK7等的改變影響到了組織細胞的排列極性，導致組織學分型的惡化。但部分研究并未發現腺癌或者鱗癌患者中生物學因子的表達差異，認為細胞角蛋白等并不影響肺癌的發生來源。最后，多元回歸分析也發現，淋巴結轉移和組織學分型與肺癌患者的CK7、TTF-1、p63的陽性表達等關系密切，進一步提示了CK7、TTF-1、p63與非小細胞肺癌的關系。

綜上所述，本研究的創新性在于探討了CK7、TTF-1、p63與非小細胞肺癌患者臨床病理特征的關系。CK7、TTF-1、p63在非小細胞肺癌患者體內高表達，且與患者的淋巴結轉移情況和組織學分型密切相關。

[1]吳家園,萬崇華,胡利人,等.可手術非小細胞肺癌的預后相關因素分析[J].廣東醫學,2015,36(13):2049-2052.

[2]Skrzypski M,Dziadziuszko R,Jassem E,et al.Main histologic types of non-small-cell lung cancer differ in expression of prognosis-related genes[J].Clin Lung Cancer,2013,14(6):666-673.

[3]趙丹,尹春嶺,王重利,等.細胞角蛋白7、甲狀腺轉錄因子1、新天冬氨酸蛋白酶A、細胞角蛋白5/6、p40、p63在肺腺癌及鱗狀細胞癌鑒別診斷中的價值[J].中國綜合臨床,2015,31(7):593-596.

[4]張旭剛,李維青,高穎,等.肺腺癌組織中TTF-1表達變化及其與EGFR基因突變、患者預后的關系[J].山東醫藥,2017,57(31):44-46.

[5]劉江,胡靜,任偉,等.COX-2、TTF-1及p63蛋白在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[J].現代腫瘤醫學,2015,23(1):70-74.

[6]李波,趙妍妍,吳開松.甲狀腺轉錄因子-1在非小細胞肺癌組織中的表達及意義[J].醫學新知雜志,2014,24(2):93-94;97.

[7]方強,劉寧.TTF-1、CK7、P63、CK5/6免疫組織化學染色在非小細胞肺癌鑒別診斷中的價值[J].中國醫師雜志,2015,17(3):391-394.

[8]曾少波,阮曉嵐,翁鴻,等.p63蛋白表達與非小細胞肺癌風險相關性的Meta分析[J].湖北醫藥學院學報,2015,34(4):371-376.

[9]FCB Abdallah,GB Ali,MS Boudaya,et al.Traitement et pronostic du cancer bronchique non à petites cellules au stade avancé[J].Revue des Maladies Respiratoires,2014,31(3):214-220.

[10]Wang L,Hu H,Pan Y,et al.PIK3CA mutations frequently coexist with EGFR/KRAS mutations in non-small cell lung cancer and suggest poor prognosis in EGFR/KRAS wildtype subgroup[J].PLoS One,2014,9(2):e88291.

[11]王東來,李增懷,馮建剛,等.非小細胞肺癌胸椎轉移外科治療及預后分析[J].中華腫瘤防治雜志,2014,21(19):1529-1533.

[12]許麗萍,孫翠云,王新允,等.檢測三種轉錄調節因子的表達在鑒別非小細胞肺癌病理類型中的作用[J].中國中西醫結合外科雜志,2015,21(3):227-230.

[13]吳琳,張蘇寧.非小細胞肺癌組織EGFR、TTF-1、CK7表達及其意義[J].山東醫藥,2017,57(20):49-51.

[14]殷金蘭,李瑩,陳金梅,等.4項腫瘤標志物檢測在晚期非小細胞肺癌治療中的意義[J].國際檢驗醫學雜志,2017,38(14):1985-1987.

[15]王紅莉,曲延剛,李虹.甲狀腺轉錄因子1、細胞角蛋白7及抑癌基因p53在非小細胞肺癌中的表達及與臨床病理的關系[J].醫學綜述,2016,22(5):1012-1014.

[16]田亮,郭效忠,苗志剛,等.聯合免疫標記物在非小細胞肺癌中的表達及意義[J].診斷病理學雜志,2017,24(9):693-696.

[17]劉君,李高峰,陳楠,等.P63蛋白在宣威與非宣威地區非小細胞肺癌中表達的對比研究[J].昆明醫科大學學報,2014,35(1):37-41.

[18]劉君,李高峰,陳楠,等.P63蛋白在非小細胞肺癌中表達研究[J].昆明醫科大學學報,2014,43(1):62-65.

[19]賀新愛,鄒明雷,呂晶晶.血清中多種標志物聯合檢測在非小細胞肺癌預后判斷中的價值[J].中國腫瘤臨床與康復,2015,22(5):529-531.

[20]官廷華,俞永康,姜建青,等.細胞因子與非小細胞肺癌術后復發的相關性[J].檢驗醫學與臨床,2017,14(14):2067-2070.

[21]胡鴻波,苑鳳芹,趙春玲.非小細胞肺癌患者化療前后血清癌胚抗原細胞角蛋白19片段和糖類抗原125的變化[J].中國腫瘤臨床與康復,2016,23(12):1417-1420.