霍山石斛多糖研究進展

崔勝文，羅雙群，周婧琪，高愿軍

（1.漯河中德雙成功能食品研究院有限公司，河南漯河462300；2.漯河食品職業學院食品檢測系，河南漯河462300）

霍山石斛（Dendrobium huoshanense）屬于蘭科，多年生草本植物，主要分布于中國安徽省霍山縣，河南省也有分布[1]。霍山石斛是一種珍稀中藥材，傳統醫學認為其具有滋陰消渴、生津潤肺、清音明目等功效[2]。多糖是霍山石斛中最主要的活性成分之一，研究發現霍山石斛多糖（Dendrobium huoshanense polysaccharide，DHP）具有抗氧化、抗白內障、抗肝損傷和肝纖維化、抗疲勞、調節免疫力、抗腫瘤、抗糖基化等生理功能[3]，且藥物毒性極小，從而成為藥物藥效物質基礎研究的熱點。本文擬從DHP的提取、結構特性以及生理功能等進行綜述，為霍山石斛多糖的開發和利用提供參考。

1 霍山石斛多糖的提取方式

DHP的含量受生長部位以及生長年限的影響，在葉中含量最高，莖中含量最低，且兩年生莖中多糖含量最高，但3年生莖中含量減少。當前DHP提取工藝有多種，其中最常用的為熱水提醇沉法[4]，該法提取所需溫度高，時間長，一般需重復提取兩次，經濟效率和提取率均較低。黃森等[5]用該法在提取溫度為69.4℃，pH 值為 5.9，料液比為 1∶20（g/mL），提取次數為 2次，提取時間為1.57 h時所得DHP提取率最高僅為0.1821 g/g。谷仿麗[6]和董澤梁[7]用該法分別從霍山石斛組培苗和新鮮的霍山鐵皮石斛根莖中提取DHP，其得率分別為17.763%和17.45%[8]。若在提取過程中添加超聲波輔助不僅可提升浸提速率，還可顯著提升多糖提取率，劉艷艷等通過比較超聲波輔助提取工藝和熱水浸提工藝對DHP提取率的影響，發現超聲波輔助提取所得DHP得率是傳統熱水浸提工藝的1.70倍。QIN Xia[9]等也通過研究發現，在超聲功率250 W，固液比1∶10（g/mL）條件下提取僅 30min，DHP 的提取率可高達到28.02%。此外，微波輔助法也能有效提高DHP的提取率[10]。近年來出現了酶法提取，該方法條件溫和，提取效率和收率均提升，且多糖活性獲得較大限度保留。魏明等[11]采用超聲波協同纖維素酶法提取DHP，當料液比1∶40（g/mL）、纖維素酶 500 U/g、酶解溫度 40 ℃、酶解時間3 h、超聲波功率為300 W、超聲時間6 min時，多糖提取量可達0.283 g/g。

2 霍山石斛多糖的結構特性

DHP主要是非淀粉類中的中性多糖，多數不含有還原糖[12]。查學強等[13]最早開展霍山石斛活性多糖的分離純化和結構鑒定的研究，已從霍山石斛水溶性多糖中分離出一種具有免疫活性的均一性多糖HPS-1B23。該多糖為α-吡喃構型，平均分子量為2.2×104Da，由葡萄糖、甘露糖和半乳糖按31∶10∶8的分子摩爾比組成，含有以下6個重復單元，見圖1[14]。

圖1 α-吡喃多糖結構式Fig.1 The structure of α-pyran polysaccharides

田長城等[15]發現的DHP1A（分子量為6.7×103Da）也主要由葡萄糖、甘露糖和少量半乳糖組成，其摩爾組成比為 2.5∶16∶0.1，其主鏈由（1→4）-α-D-Glc p、（1→6）-α-D-Glc p 和（1→4）-β-D-Man p，與終端一個分支的β-D-Gal p組成。黃月純等[16]對10批霍山石斛多糖柱前衍生高效液相色譜（High performance liquid chromatography，HPLC）特征圖譜與國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件（2004A版）生成圖譜對比發現，10批霍山石斛多糖柱前衍生特征圖譜標示出6個特征峰，主要由D-甘露糖（71.8%）與D-葡萄糖（27.2%）組成，D-甘露糖與D-葡萄糖峰面積比值為2.05～3.71，此外含微量的D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。與對照圖譜比較，10批霍山石斛的相似度為0.994～1.000，說明霍山石斛多糖提取具有良好的重復性。但是霍山石斛多糖的分子量、化學結構、微觀結構等又受提取方法、提取溫度等的影響。

2.1 提取方法對DHP結構特性的影響

提取方法對DHP的微觀結構、分子量、化學結構等影響很大。劉艷艷[17]對超聲波輔助提取法和熱水浸法所得霍山石斛多糖粗提液從分離純化所得多糖組分DHP-1A（熱水浸提所得）和UDHP-1A（超聲波輔助提取所得）進行比較發現，兩種多糖組分粘度都較小，但DHP-1A特性粘度大于UDHP-1A；從結構上看，兩種多糖組分均不含三股螺旋結構，也不含蛋白質和核酸等雜質；但DHP-1A固態聚集體顆粒較大，表面較為平整，而UDHP-1A顆粒較小，表面較為粗糙，呈現出松散的碎片狀堆積；從紅外光譜圖可知DHP-1A中存在β-型糖苷鍵，超聲輔助提取的多糖UDHP-1A這一結構受到影響。高效液相色譜法檢測結果顯示多糖DHP-1A和UDHP-1A均為分子量均一體系，分子量分別為 1.17×104Da和 6.08×103Da。

馮寶軍[18]將熱水浸提法所得霍山石斛粗多糖進行脫蛋白及分離純化所得的分子量為7.3×104Da的DHP-W2經全水解分析表明，DHP-W2主要由葡萄糖（Glc）、木糖（Xyl）和半乳糖（Gal）按 1.1∶1.0∶0.5 的分子摩爾比以及少量的半乳糖醛酸組成。甲基化分析和核磁共振波譜分析表明，DHP-W2的主鏈由1，6-連接和1，4-連接的β-D-glucose組成，分枝點位于O-4/6：DHP-W2 的枝鏈由 1，4-連接的 α-D-xylose、1，2，4-連結的 α-D-xylose以及末端殘基 α-D-xylose、α-D-galactose和α-D-galacturonicacid組成。董澤梁[7]將熱水浸提法所得霍山鐵皮石斛粗多糖（HDCP）經DEAE-52色譜分離可以得到HDCP-W、HDCP-1和HDCP-3這3個組分，將粗多糖及各組分分別進行氣相色譜（GC）分析。GC結果顯示，HDCP含有11.4%的阿拉伯糖、8%的鼠李糖、13.4%的木糖、10.7%的半乳糖、44.5%的葡萄糖和12%的甘露糖：HDCP-W含有38.9%的阿拉伯糖、21.3%的半乳糖、24.2%的葡萄糖和15.6%的甘露糖：HDCP-1含有81.1%的木糖、3.4%的半乳糖和15.5%的葡萄糖；HDCP-3含有23.2%的阿拉伯糖、30%的鼠李糖、15.4%的葡萄糖和31.4%的甘露糖。研究還證明，HDCP-W不含有蛋白質等雜質，其分子量為3.538×105g/mol，分子旋光半徑為51.9 nm，分散系數為1.139，分子構象傾向于無規則線團。經掃描電鏡掃描觀察，發現其微觀形態主要為細線條狀、大小不一的碎片狀和無規則網團狀。肖婧婧[19-20]用水提醇沉法提取總多糖，經分離純化獲得兩種相對均一組分DHP-D1、DHP-D2。采用高效液相測得DHP-D1、DHP-D2 的相對分子量分別為 3.2×103Da、8.09×106Da。DHP-D1主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖組成，摩爾比為 1.023∶0.023∶0.021，同時還存在極少量的甘露糖和木糖：DHP-D1 主鏈主要由 1，4-α-D-Glcp、1，5-α-L-Araf、1，6-α-D-Glcp 和 1，6-α-D-Glap 構成，其中部分1，4-α-D-Glcp的C-6位上連接有1-α-Glcp及微量的1-β-D-Xylp，此外還存在微量的1，3-α-DManp，其的C-6位上連接有1-α-Glcp。DHP-D2主要由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、鼠李糖組成，其摩爾比為 0.896∶0.723∶0.2∶0.072∶0.031∶0.028，其主鏈主要由 1，6-β-D-Galp、1，4-β-D-Glcp、1，6-β-DGlcp、1，5-α-L-Araf和 1，6-α-D-Glcp 組成，其中1，6-β-D-Galp的 C-3位連接有少量的 1-α-D-Manp、1-α-D-Xlyp、3-α-L-Rhap。

2.2 提取溫度對DHP結構特性的影響

霍山石斛多糖的結構特性還受提取溫度的影響，江賢敏、王正明等[21-22]研究發現，DHP的特性黏度隨提取溫度的升高而呈現下降趨勢；用HPLC分析表明不同溫度（40、60、80、100℃）條件下水提醇沉法提取的DHP均由高分子質量（higher molecular weight，HMW）和低分子質量（lower molecular weight，LMW）兩種組分所構成，LMW熱穩定性好、主要存在于陰離子交換色譜的水洗脫組分（water-eluted fraction，DHPW），HMW熱穩定性弱、主要存在于陰離子交換色譜的鹽洗脫組分（salt-eluted fraction，DHPS）；GC和FTIR分析顯示，DHPW主要由呈α-構型的葡萄糖所組成、不含糖醛酸，DHPS主要由呈β-構型的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖所組成，且含糖醛酸。由此可見，提取溫度不僅影響DHP的提取量，而且可明顯改變DHP的特性黏度、分子質量分布、單糖組成。

3 霍山石斛的生理功能

大量研究表明，DHP具有廣泛的生理活性，包括：抗氧化、抗白內障、抗肝損傷和肝纖維化、抗疲勞、調節免疫力、抗腫瘤、抗糖基化等生理功能。

3.1 抗氧化

DHP具有體外抗自由基和抗脂質過氧化作用，汪曙等[23]研究發現DHP對·OH的半數清除濃度為6.79 mg/mL，對O2-的半數抑制濃度分別為3.04 mg/mL，且對VC-Fe2+誘導的肝勻漿的脂質過氧化均有一定的抑制作用，并可減輕VC-Fe2+系統誘導所致小鼠肝線粒體氧化損傷程度。DHP的體外抗氧化能力與其相對分子量大小有一定關系。郝杰等[24]分別用40%、50%、60%和80%終濃度的乙醇連續沉淀霍山石斛苗總多糖（ST：2.52×105Da）所得 4 種多糖組分（S1：4.79×105Da、S2：3.16×105Da、S3：3.07×105Da 和 S4：8.59×104Da）為材料，研究DHP體外抗氧化能力。研究發現，不同相對分子質量DHP均有抗氧化作用，其中相對分子量最大的S1對H2O2、·OH的清除作用強于其他多糖組分，IC50分別為0.15 mg/mL和1.81 mg/mL，并具有顯著的還原力和抑制Fe2+-VC誘導脂質過氧化能力，最大效應分別為0.312和45.67%；S3對超氧自由基的清除作用較好，最大清除率達到72%；ST抑制H2O2誘導的紅細胞溶血能力最強，達到67.23%，而在其他抗氧化試驗中效果較差；S2在上述體外抗氧化評價體系中的效果較差。田長城等[15]也通過研究發現低分子霍山石斛多糖DHP1A（分子量6.7×103Da）對FeCl2誘導的脂質過氧化有顯著抑制作用。劑量對抗氧化能力也有一定影響，谷仿麗等[25]研究發現DHP具有降低肥胖小鼠氧化應激的作用，DHP高劑量組[0.2 g/（kg·d）]能顯著降低模型小鼠體重、Lee′s、體脂比、血清游離脂肪酸（free fatty acids，FFA）、血清胰島素（insulin，INS）和丙二醛（malona-ldehyde，MDA），顯著提高肝谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）、肝超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、肝總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）水平（P＜0.05v模型組），空腹血糖（FBG）有降低趨勢，但不顯著。此外，DHP提取方式對其抗氧化能力也有一定影響，用超聲波輔助提取工藝所得DHP還原力和ABTS自由基清除率均優于熱水浸提的多糖[8]。

3.2 抗白內障

DHP是一種良好的糖尿病性白內障防治藥物，它能從氧化途徑和蛋白糖基化途徑兩方面同時抑制晶狀體渾濁進程。DHP可保證注射鏈脲佐菌素（strepto-zotocin，STZ）大鼠正常的生活規律和體重增長，降低血糖水平，并且減緩晶狀體渾濁發生，治療效果隨用藥劑量增加。DHP可顯著降低糖尿病性大鼠NO水平及其合成酶iNOS活性，多色熒光實時定量PCR證實DHP可以下調iNOS基因表達，抑制效果與多糖劑量正相關[26-27]。DHP對STZ大鼠谷胱甘肽家族酶活性有顯著保護作用，它能夠顯著增加糖尿病性白內障大鼠晶狀體組織中谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平、降低MDA及羰基的含有量，提高其GSH-PX、谷胱甘肽還原酶（gutathione reductase，GR）、谷胱甘肽-S-轉移酶（glutathione S-transferase，GST）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、SOD酶活力[28]。此外，DHP還可抑制蛋白糖基化終產物（advanced glycation end products，AGEs）的形成，200 mg/（kg·d）劑量組多糖時抑制率達到了40.2%。

3.3 抗肝損傷和肝纖維化

黃靜[29]等發現霍山石斛粗多糖能夠有效增強小鼠對四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）肝損傷的抵抗能力，DHP 各劑量組（200、100、50 mg/kg） 均能降低CCl4致小鼠急性肝損傷血清谷丙轉氨酶（anine aminotransferase，ALT）、谷草轉氨酶（aspartate aminotransferase，AST）的升高，降低肝勻漿中MDA含量，增強SOD的活性，抑制肝細胞中腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）表達，減輕 CCl4對肝組織的病理損傷。田長城等[30]將用熱水浸提法所得霍山石斛粗多糖通過DEAE-纖維素陰離子交換法分離純化所得的 4種多糖組分（DHP1、DHP2、DHP3和 DHP4）用于研究它們對CCl4肝毒性的保護作用。發現口服DHP1顯著降低了CCl4誘導的小鼠血清ALT和AST活性的升高，削弱了肝組織中MDA的表達，同時恢復了肝組織中SOD和CAT的活性。得出DHP1可能是霍山石斛中一種潛在的保肝多糖成分。該學者[31]采用Sephadex G-100凝膠層析對DHP1進一步分離和純化，得到 DHP1A（分子量：6.7×103Da）和 DHP1B（分子量：3.51×103Da）兩種多糖片段。進一步評價了DHP1A的保肝功效，結果表明，DHP1A的攝入可以有效降低CC14肝損傷中各種生化指標的升高，降低了丙二醛和8-羥基脫氧鳥苷（8-hydroxyl deoxyguanosine，8-OHdG）的產生；DHP1A可以調節小鼠肝內各種炎性分子的表達，如 TNF-α、白介素（IL-1β）、單核細胞趨化蛋白（MCP）-1、巨噬細胞炎性蛋白（macrophage inflammatory protein，MIP）-2和CD68。此外，DHP1A還干擾了CCl4誘導的核因子（NF）-κB的激活，緩解了小鼠的肝損傷。

孟海濤等[32]比較了霍山石斛冷凍干燥物、水提物、水提醇溶物、水提醇沉物、水提粗多糖等5種提取物抗小鼠亞急性酒精性肝損傷效果，結果發現，霍山石斛水提醇溶物抗亞急性酒精性肝損傷的活性最差，醇沉物、水提物、冷凍干燥物具有一定的肝損傷保護活性，水提粗多糖各個劑量組均可顯著改善肝臟組織損傷和脂肪變性（P＜0.05），降低血清 ALT、AST、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性和低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）水平，提高血清高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）含量，增強肝組織乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）、乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）、SOD 和 GSH-PX活性，減少肝組織中還原性谷胱甘肽（glutathione，GSH）損耗并抑制肝組織MDA含量增加，這說明多糖是霍山石斛抗小鼠亞急性酒精性肝損傷的功能因子。聶春艷等[33]也證明DHP對亞急性酒精性肝損傷小鼠有顯著的保護作用，能減輕酒精對肝臟的病理損傷。此外，DHP還可以通過輔助飲食調節改善SD大鼠非酒精性脂肪性肝（nonalcoholic fatty liver，NAFL）損傷，這種改善保護作用可能是通過恢復機體脂質代謝平衡而實現的[34]。

潘利華等[35]通過研究發現，DHP對亞硒酸鈉致大鼠肝損傷和肝纖維化也有干預效果，DHP可以明顯改善亞硒酸鈉導致的大鼠體重減輕、肝臟縮小和脾臟增大的癥狀，有效干預肝損傷和肝纖維化的發展，對亞硒酸鈉導致的大鼠血清ALT、AST和LDH活性升高具有顯著的抑制作用：DHP還可以恢復亞硒酸鈉處理的大鼠肝臟內 H2O2、GSH、MDA、SOD、CAT 和 GST 至對照的水平，維持肝實質細胞膜的正常流動性。該學者[36]還通過免疫熒光組織化學分析證明，DHP對肝損傷和肝纖維化的干預和它有效減少轉化生長因子TGF-β1和肝臟內膠原蛋白表達相關。該學者[37]還研究發現霍山石斛均一多糖半乳葡甘露聚糖（GGM）可通過進一步降低轉化生長因子-02051（TGF-02051）和I型膠原的表達來預防亞硒酸鈉誘導的肝損傷和肝纖維化，這意味著GGM可能發展成為一種新型的對肝損傷和肝纖維化有防治作用的抗纖維化劑。

3.4 抗疲勞

DHP可有效提高小鼠運動能力，余剛，夏云建等[38-39]從負重游泳力竭時間、血乳酸、血清尿素氮、丙二醛、肝糖元等方面探討了低劑量[150 mg/（kg·d）]、高劑量[450 mg/（kg·d）]DHP抗疲勞作用機制，研究發現，兩種劑量的DHP都能顯著延長小鼠游泳時間，降低運動后小鼠的乳酸累積，降低血清尿素氮、丙二醛含量，增加運動后小鼠的肝糖原儲備值，但高劑量DHP效果優于低劑量DHP。

3.5 免疫調節

Hsieh[40]等分別證實了霍山石斛水溶性總多糖具有促進小鼠巨噬細胞和脾細胞釋放TNF-a、IL-6、IL-1等細胞因子和GM-CSF、G-CSF等造血生長因子的功能，并通過分離純化、結構表征和構效關系的研究表明霍山石斛多糖發揮免疫增強活性需要適度的乙酰化。Lin等[41]研究了DHPS對小鼠體內和體外誘導的細胞因子/趨化因子的影響。研究發現，DHPS在體內和體外均可誘導小鼠TH1、TH2、炎性細胞因子和趨化因子。DHPS能擴增小鼠脾細胞，包括CD4（+）T細胞、CD8（+）T 細胞、B 細胞、NK 細胞、NKT 細胞、單核/巨噬細胞、粒細胞和調節性T細胞，特別是DHPS誘導小鼠和人的免疫細胞（尤其是單核細胞）產生了一種抗炎分子IL-1ra。注射DHPS將使血清IL-1ra水平達到IL-1的10倍以上，提示DHPS誘導的抗炎活性因子可能會過度依賴IL-1介導的炎癥反應。研究還發現，DHPS誘導IL-1ra產生的信號通路包括：ERK/ELK、p38 MAPK、PI3K和 NF-κB。這些結果表明，DHPS可能有改善IL-1誘導的致病條件的作用。查學強等[42]研究了口服 DHP（50 mg/kg～200 mg/kg）對沒有或有氨甲喋呤小鼠腸道、脾臟和肝臟的免疫調節反應。腸道免疫反應顯示，從口服DHP小鼠中分離出的小腸淋巴細胞培養上清液，可使骨髓細胞增殖，這表明所有的DHP治療組都有顯著增強腸道免疫反應的能力：脾臟免疫反應顯示，所有的DHP治療組都能顯著促進脾細胞增殖和分泌干擾素（IFN-γ）；肝臟免疫應答顯示，不僅所有的DHP治療組能顯著刺激肝細胞增殖和IFN-γ的分泌，而且100 mg/kg和200 mg/kg劑量組還能顯著提高IL-4的分泌。此外，DHP還可以恢復氨甲喋呤損傷小鼠小腸免疫功能（100 mg/kg和200 mg/kg），促進氨甲喋呤治療小鼠脾和肝的細胞增殖以及IFN-γ的產生（200 mg/kg）。這些結果表明，口服DHP對小腸免疫系統和全身免疫系統都具有免疫調節能力。

DHP對腸對黏膜免疫調節活性受濃度和溫度的影響，郝冉等[43]通過口服和離體小腸培養以及Peyer’s結細胞培養，用激光共聚焦顯微鏡檢測DHP在小腸內的吸收分布以及與Peyer's結細胞的結合情況，研究發現，DHP具有腸黏膜免疫調節活性，在體內和體外均可通過Peyer's結細胞被小腸吸收，且DHP濃度越高，免疫調節活性越強，在質量濃度為 25、50、100、200 μg/mL時，其腸黏膜免疫調節活性分別提高到對照組的112.8%、131.1%、137.6%和160.5%。江賢敏等[21]發現不同溫度（40、60、80、100℃）條件下水提醇沉法提取的DHP及其陰離子交換色譜水洗脫組分（water-eluted fraction，DHPW）和鹽洗脫組分（salt-eluted fraction，DHPS）均表現出腸道黏膜免疫調節活性，且DHPS比DHPW具有更強的腸道黏膜免疫調節活性，但它們的活性均隨提取溫度的升高而下降。

3.6 抗腫瘤

黃森等[44]優化了霍山石斛多糖的提取工藝，純化分離了多種多糖組分，重點研究了霍山石斛多糖對人胃腺癌細胞SGC-7901的抑制作用，探討了多糖抗腫瘤作用與腫瘤相關基因之間的相關性。通過單因素試驗結合Box-Behnken設計和響應曲面分析，建立了提取溫度、提取pH和提取時間與霍山石斛多糖提取率間的數學模型。水提獲得的霍山石斛粗多糖HDP通過DEAE-纖維素離子交換色譜分離得到多糖HDP-1，HDP-2，HDP-3，HDP-4，HDP-5，HDP-6。其中抗胃癌活性最強的多糖HDP-2經Se：phacryl-200HR色譜后，又獲得HDP-2-A和HDP-2-B兩種多糖組分，經UV掃描不含蛋白。多糖組份HDP-2對胃腺癌細胞SGC-7901的作用在熒光定量RT-PCR下檢測得到，多糖組份HDP-2明顯下調胃腺癌細胞SGC-7901中原癌基因c-myc的表達，僅為對照組表達率的42.34%。同時大幅提高腫瘤抑制基因野生型p53的表達，為對照組表達率的2.042倍。鮑麗娟[45]研究發現，霍山石斛多糖具有良好的抑制HelaS3人宮頸癌細胞和HepG2人肝癌細胞毒性作用，在試驗濃度范圍內呈劑量依賴性。DHP具有顯著的抗心肌缺血-再灌注損傷的作用，其作用機制可能是激活GSK-3β信號通路發揮抗氧化、抗炎和抗凋亡作用。房雪等[46]采用Langendorff離體灌流系統建造大鼠離體缺血-再灌注損傷模型，研究DHP 低、中、高濃度（0.1、0.5、1.0 mg/L）對抗心肌缺血-再灌注損傷的影響，發現與模型組相比，DHP中、高劑量組的心肌壞死程度、梗死面積和細胞凋亡率顯著降低，心功能顯著改善：冠脈流出液中乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）水平逐漸降低：心肌組織中MDA以及TNF-α和白介素6（IL-6）含量顯著降低，SOD活性和還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）比值顯著升高（P＜0.01）。高劑量DHP可顯著降低心肌細胞凋亡指數，升高心肌組織中GSK-3β磷酸化水平。

3.7 抗糖基化

肖婧婧[19]以體外蛋白質非酶糖基化反應體系為試驗模型，研究DHP及其硫酸化衍生物的抗蛋白質非酶糖基化活性。結果表明，在培養的前21天，DHP及其硫酸化衍生物對蛋白質非酶糖基化初期產物Amadori的抑制率呈上升趨勢，隨后下降至不同水平。DHP及其硫酸化衍生物對蛋白質非酶糖基化中期產物二羰基化合物和末期產物AGEs形成的抑制作用均存在劑量依賴關系，在培養的第28天抑制率最大。研究還表明，硫酸化修飾可提高DHP對蛋白質非酶糖基化的抑制作用，其抑制活性的高低與取代度的大小呈一定的正相關關系，并且6-O-硫酸化霍山石斛多糖衍生物對蛋白質非酶糖基化的抑制活性強于2，2’，4-O-硫酸化霍山石斛多糖衍生物。

3.8 其他

孟鴿等[47]研究發現DHP對嗜酸乳桿菌生長有一定的影響作用，當添加DHP濃度為6 g/L時，嗜酸乳桿菌生物量及生長速度較對照組明顯提高。此濃度下，還原糖的利用和蛋白質及乳酸的合成量也均高于對照組：同時發現添加多糖提高了嗜酸乳桿菌LDH、SOD、GSH-Px 3種酶活力。王長順[48]以霍山石斛原球莖中提取的DHP與牛血清白蛋白偶聯后作為抗原，免疫小鼠獲得單克隆抗體，以獲得的單克隆抗體為一級抗體對小鼠進行免疫組織化學試驗。證實了CDAP活化法可有效偶聯多糖與蛋白質，且以制備的偶聯物能引起小鼠免疫反應從而制備出所需的單克隆抗體，利用獲得的活性較高、特異性較好的單克隆抗體得到多糖在小鼠組織的分布圖，該方法可為霍山石斛多糖進入機體后分布情況提供科學依據。

4 發展方向

當前，針對DHP的研究以成為熱點研究，DHP的提取工藝被不斷改進，提取效率和提取率也有了極大提高，DHP的分子量與化學成分間的關系也被進一步明確。目前，眾學者對DHP的生理功能研究仍停留在動物試驗階段，且其具體作用機制仍有待進一步研究。此外，DHP進入機體后的分布情況目前也尚不明確，對DHP生理功能的人體試驗更是尚未涉及。

參考文獻：

[1]張煒玲,王新生,戴亞峰,等.霍山石斛最新研究進展[J].安徽農業科學,2010,38(36):20661-20663,20719

[2]童晨曦,齊蕾.霍山石斛的研究進展及可持續發展[J].醫學綜述,2015,21(24):4512-4514

[3]司華陽,陳乃東,陳乃福.霍山石斛多糖的分離鑒定及藥理活性研究進展[J].天然產物研究與開發,2016(28):467-470,445

[4]ZHANG Wei-lin,WANG Xin-sheng,DAI Ya-feng,et al.Optimization of Extraction Process for Polysaccharides from Dendrobium huoshanense by Response Surface Methodology[J].Medicinal Plant,2012,3(7):48-52

“互聯網+”時代迅速發展，互聯網融資平臺猶如雨后春筍般爭先恐后般進入市場，政府應與時俱進，對大學生創業融資制度進行優化升級，降低大學生互聯網創業融資的風險；相關政策制定部門要與政府、高校、銀行建立起大學生創業互聯網融資服務網站，充分利用新媒體傳播途徑，加大力度宣傳互聯網創業融資模式，讓大學生正確看待互聯網創業融資的諸多方式，降低融資風險；另外，互聯網融資平臺迅猛爆發，致使其信用程度良莠不齊，甚至會坑蒙拐騙。相關部門的監管力度，未能提供良好的互聯網融資環境；最后，政府部門應適度降低融資門檻，對大學生創業應采取更加科學、便捷的審批措施。

[5]黃森,查學強,羅建平.等.Box-Behnken法優化提取霍山石斛活性多糖的研究[J].中藥材,2007,30(5):591-594

[6]谷仿麗,陳乃富,戴軍.霍山石斛組培苗多糖的提取工藝研究[J].宿州學院學報,2011,26(11):68-70

[7]董澤梁.霍山鐵皮石斛多糖的提取優化、分離純化及結構特征的研究[D].合肥:安徽農業大學,2014

[8]劉艷艷,魏明,孟鴿.等.超聲波輔助提取霍山石斛多糖及其抗氧化活性研究[J].食品科技,2016(5):213-218

[9]QIN Xia,DONG Hai-li,LIU Hong.Optimization of the Ultrasonic Assisted Extraction of Polysaccharides from Dendrobium huoshanense by Response Surface Method[J].Medicinal Plant,2012,3(8):78-80

[10]Guihua XIAN,Bin LI,Hengchang ZANG.Microwave Technique for Polysaccharide Extraction from Dendrobium huoshanense[J].Agricultural Science＆Technology,2014(8):1304-1307,1367

[11]魏明,邵平,姚紅.等.超聲波協同纖維素酶法提取霍山石斛多糖的研究[J].食品工業科技,2009,30(3):199-201

[12]盧榮德,陶小平,孫晴.等.霍山石斛的生化特征及光合過程的研究進展[J].中草藥,2010,41(11):1917-1921

[13]Zha X Q,Luo J P,Luo S Z.Structure identification of a new immunostimulating polysaccharide from the stems of Dendrobium huoshanense.Carbohydrate Polymers[J].Carbohydrate Polymers,2007,69(1):86-93

[15]Tian C C,Zha X Q,Pan L H,et al.Structural characterization and antioxidant activity of a low-molecular polysaccharide from Dendrobium huoshanense[J].Fitoterapia,2013,91:247-255

[16]黃月純,葉家宏,戴亞峰,等.霍山石斛與美花石斛多糖柱前衍生HPLC特征圖譜比較[J].中藥新藥與臨床藥理,2014,25(6):725-730

[17]劉艷艷.超聲波輔助提取霍山石斛多糖及其對多糖理化性質和抗氧化活性的影響[D].蕪湖:安徽工程大學,2016

[18]馮寶軍.霍山石斛多糖的分離純化及結構鑒定[D].合肥:合肥工業大學,2010

[19]肖婧婧.基于硫酸化修飾的抗蛋白質非酶糖基化活性霍山石斛多糖的構效關系[D].合肥:合肥工業大學,2013

[20]Li X L,Xiao J J,Zha X Q,et al.Structural identification and sulfated modification of an antiglycation Dendrobium huoshanense polysaccharide[J].Carbohydr Polym,2014,106:247-254

[21]江賢敏,王正明,潘利華,等.提取溫度對霍山石斛多糖理化性質及腸道黏膜免疫活性的影響[J].食品科學,2017,38(7):176-181

[22]王正明.提取溫度對霍山石斛多糖理化性質及腸道粘膜免疫活性的影響[D].合肥:合肥工業大學,2013

[23]WANG Shu,WEI Feng-juan,CAI Yong-ping,et al.Anti-oxidation Activity in Vitro of Polysaccharides of Dendrobium Huoshanense and Dendrobium moniliforme[J].Agricultural Science＆Technology,2009,10(6):121-124

[24]郝杰,查學強,鮑素華,等.霍山石斛不同分子量多糖體外抗氧化研究[J].食品科學,2009,30(15):94-98

[25]谷仿麗,陳乃富,余茂耘,等.霍山石斛多糖對肥胖小鼠氧化應激的影響[J].皖西學院學報,2016,32(5):4-7

[26]Luo J-P,Deng Y-Y,Zha X-Q.Mechanism of Polysaccharides from Dendrobium huoshanense on Streptozotocin-Induced Diabetic Cataract[J].Pharmaceutical Biology,2008,46(4):243-249

[27]鄧媛元.霍山石斛多糖抗糖尿病性白內障的研究[D].合肥:合肥工業大學,2007

[28]李秀芳,鄧媛元,潘利華,等.霍山石斛多糖對糖尿病性白內障大鼠眼球晶狀體組織抗氧化作用的研究[J].中成藥,2012,34(3):418-421

[29]黃靜,李勝立,趙宏偉,等.霍山石斛多糖對四氯化碳致急性肝損傷小鼠的保護作用[J].中國中藥雜志,2013,38(4):528-532

[30]田長城,羅建平.霍山石斛中不同多糖組分的保肝活性[J].食品科學,2015,36(7):162-166

[31]田長城.霍山石斛保肝多糖的結構表征與功效評價[D].合肥:合肥工業大學,2014

[32]孟海濤,汪鶴,查學強.霍山石斛不同提取物抗小鼠亞急性酒精性肝損傷活性的比較研究[J].食品科學,2015,36(13):229-234

[33]聶春艷,汪鶴,潘利華,等.霍山石斛水溶性多糖抗亞急性酒精性肝損傷研究[J].安徽農業科學,2017,45(17):100-105

[34]姜蘇薇.霍山石斛多糖對非酒精性脂肪性肝損傷的干預及改善作用研究[D].合肥:合肥工業大學,2012

[35]潘利華,陸俊,羅建平.可食植物霍山石斛多糖對大鼠肝損傷和肝纖維化的干預[C].北京:中國食品科學技術學會年會,2010

[36]陸俊.霍山石斛多糖干預亞硒酸鈉致大鼠肝損傷和肝纖維化的研究[D].合肥:合肥工業大學,2010

[37]Pan L H,Lu J,Luo J P,et al.Preventive effect of a galactoglucomannan(GGM)from Dendrobium huoshanense on seleniuminduced liver injury and fibrosis in rats[J].Experimental and toxicologic pathology:official journal of the Gesellschaft fur Toxikologische Pathologie,2012,64(7/8):899-904

[38]余剛,夏云建,尹航.霍山石斛多糖抗運動性疲勞實驗研究[J].運動,2013(2):52-54

[39]夏云建,余剛.霍山石斛多糖干預對力竭運動小鼠BUN、MDA、BLA、肝糖原影響的研究[J].湖北體育科技,2012,31(6):650-653

[40]YS Hsieh,C Chien,SK Liao.etal.Structure and bioactivity of the polysaccharides in medicinal plant Dendrobium huoshanense[J].Biorganic and medicinal chemistry,2008,16(11):6054-6068

[41]Lin J,Chang Y J,Yang W B,et al.The multifaceted effects of polysaccharides isolated from Dendrobium huoshanense on immune functions with the induction of interleukin-1 receptor antagonist(IL-1ra)in monocytes[J].PloS one,2014,9(4):1-12

[42]Zha X Q,Zhao H W,Bansal V,et al.Immunoregulatory activities of Dendrobium huoshanense polysaccharides in mouse intestine,spleen and liver[J].International journal of biological macromolecules,2014,64:377-382

[43]郝冉,王正明,查學強,等.霍山石斛多糖的腸黏膜免疫調節活性及在小腸中的吸收分布[J].食品科學,2014,35(9):256-259

[44]黃森.霍山石斛多糖提取分離以及抗腫瘤活性的研究[D].合肥:合肥工業大學,2007

[45]Bao L J,Wang J H,Luo J P.Inhibitory effects of water extracts from four species of Dendrobium on HelaS3 Cells and HepG2 Cells[J].J Anhui Agric Sci,2008,36:15968-15970

[46]房雪,韓吉春,李德芳,等.霍山石斛多糖通過激活GSK-3β信號通路減輕大鼠心肌缺血-再灌注損傷[J].中藥材,2017(4):926-931

[47]孟鴿,魏明,趙世光,等.霍山石斛多糖對嗜酸乳桿菌生理特性影響研究[J].食品科技,2017(4):184-187,193

[48]王長順.霍山石斛多糖單克隆抗體的制備及多糖組織分布研究[J].安徽農業科學,2016,44(21):100-103,147