2016年上海地區肌酐、尿酸、尿素正確度驗證結果分析

金中淦， 居 漪， 李 卿， 唐立萍， 虞嘯炫， 劉文彬， 歐元祝

（上海市臨床檢驗中心，上海 200126）

雖然目前與臨床疾病相關的新的檢測標志物層出不窮，但肌酐（creatinine，Cr）、尿酸（uric acid，UA）、尿素（urea，Urea）這3項指標仍是臨床實驗室常規且實用的檢測指標，對于與腎臟疾病、心腦血管疾病相關的高尿酸血癥等具有重要的臨床價值，因此這些項目的準確檢測對臨床疾病的診斷及監測具有重要意義。上海市臨床檢驗中心于2014年在上海地區開展包括Cr、UA、Urea的小分子正確度驗證計劃，用以評價臨床實驗室檢測結果的正確度。本研究通過分析2016年上海地區小分子正確度驗證計劃的數據，了解目前上海地區Cr、UA、Urea檢測的質量狀況。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 小分子正確度調查樣本 樣本編號分別為2016A、2016B，均為上海市東方醫院檢驗科檢測后剩余的新鮮血清樣本（肉眼可見溶血和脂血樣本排除在外），離心過濾后分裝（0.5 mL/支），每個水平各3支。按照中國合格評定國家認可委員會（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）GL03《能力驗證計劃樣品均勻性和穩定性評價指南》要求評估調查品的均一性和穩定性。

1.1.2 研究對象 參加2016年度小分子正確度調查的二級甲等及以上醫院臨床實驗室以及獨立實驗室共70家。

1.1.3 標準物質 （1）正確度控制物為美國國家標準技術研究院（the National Institute of Standards and Technology，NIST）SRM 909c，材料為冰凍血清，-70 ℃保存，按說明平衡至室溫后使用；（2） Cr純品標準物質為NIST SRM 914a，純度為99.7%，不確定度為±0.3%；d3-Cr標記物購自美國劍橋同位素實驗室，同位素豐度為98 ℃；（3）UA純品標準物質為 NIST SRM 913a，純度為99.6%，不確定度為0.1%；UA標記物為1，3-15N2（豐度＞98atom%，加拿大CDN Isotopes公司）；（4）Urea標準物質為NIST SRM 9l2a，純度為99.9%，不確定度為0.1%；Urea標記物為13C、15N2（美國劍橋同位素實驗室），純度＞98%。Cr、UA、Urea純品標準物質用作參考方法賦值過程中制備校準品。

1.2 儀器與試劑

Agilent 1290超高效液相色譜儀（美國Agilent公司）、API 5000串聯三重四極桿質譜儀（美國AB sciex公司），Agilent G7000B氣相質譜儀（美國Agilent公司）、XP205天平（德國梅特勒-托利多公司）、Thermo Reacti-Therm干浴氮吹儀（美國賽默飛科技公司）。乙酸銨（色譜級）、乙腈（質譜級）、乙酸、無水乙醇等試劑均購自美國Fisher公司，試驗用水由Milli Q純水儀（美國密理博公司）制備。

1.3 方法

1.3.1 正確度樣本處理 將3套共6支樣本（2016A、2016B各3支）通過冷鏈系統運輸到各臨床實驗室，保證樣本在運輸過程中處于冰凍狀態。臨床實驗室收到樣本后立即將其存放在-70 ℃冰箱或-20 ℃冰箱中，在保證當日室內質控在控的前提下，按照各實驗室自己的標準操作規程測定樣本，每個項目每個濃度重復測定2次，記錄測定結果，如Cr-2016A需回報6個數據。將檢測儀器、方法原理、試劑等信息通過網絡回報。檢測剩余樣本按照生物安全要求進行處理。

1.3.2 參考方法檢測樣本 參照檢驗醫學溯源性聯合委員會（the Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine， JCTLM） 公布的參考方法，建立本實驗的參考方法。 Cr 、UA采用同位素稀釋液相色譜串聯質譜法（isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry，ID-LC/MS/MS），Urea采用同位素稀釋氣相色譜串聯質譜法（isotope dilution gas chromatography tandem mass spectrometry，ID-GC/MS/MS）。采用重量法加樣、包括法計算樣本濃度[1-6]。所有樣本、校準物、正確度質控物均重復測定3個批次，計算均值作為最終結果。

1.4 評價標準

評價標準采用WS-T403—2012《臨床化學檢驗常規項目分析質量指標》，Cr的偏移≤5.5%，室內變異系數（coefficient of variation，CV）≤4.0%； UA的偏移≤4.5%，CV≤4.5%；Ur的偏移≤3.0%，CV≤3.0%[5]。

1.5 統計學方法

使用上海市臨床檢驗中心的室間質評管理平臺進行數據的統計處理，以每個樣本的均數為統計值，分析所有回報結果的臨床實驗室3個項目的室內CV、偏移及按不同系統分組后的CV、偏移。

2 結果

2.1 正確度樣本賦值結果

用參考方法為正確度調查樣本賦值的結果分別為142.16 μmol/L（Cr-2016A）、304.27 μmol/L（Cr-2016B）、351.14 μmol/L（UA-2016A）、581.58 μmol/L（UA-2016B）、7.94 mmol/ L（Urea-2016A）、15.63 mmol/L（Urea-2016B）。每個數據均為連續測定3批，每批重復測定3次以上的結果均值。每批分析過程中同時測定NIST SRM 909c，其檢測結果在靶值±不確定度范圍內，則本次實驗結果有效。見表1。

表1 參考方法測定NIST SRM 909c的結果

2.2 正確度調查結果分析

2.2.1 不同儀器系統組的偏移及組內不精密度分析 按儀器進行分組，不同儀器組Cr-2016A測定結果與靶值的偏移為-5.54%～0.62%，90%（9/10）的檢測系統偏移滿足行業標準中的允許偏移，CV為1.71%～6.25%；Cr-2016B測定結果與靶值的偏移為-5.34%～2.89%，100%（10/10）的檢測系統偏移滿足行業標準中的允許偏移，CV為0.92%～4.74%；UA-2016A測定結果與靶值的偏移為-1.43%～2.62%，100%（10/10）的檢測系統偏移滿足行業標準中的允許偏移，CV為0.54%～4.72%；UA-2016B測定結果與靶值的偏移為-1.49%～3.73%，100%（10/10）的檢測系統偏移滿足行業標準中的允許偏移，CV為0.85%～3.84%； Ur-2016A測定結果與靶值的偏移為-1.74%～0.81%，100%（10/10）的檢測系統偏移滿足行業標準中的允許偏移，CV為1.24%～4.98%；Ur-2016B測定結果與靶值的偏移為-0.08%～1.16%，100%（10/10）的檢測系統偏移滿足行業標準中的允許偏移，CV為0.53%～4.15%。見表2。

表2 不同儀器組檢測均值與靶值的偏移、CV分析 （%）

2.2.2 單個實驗室的偏移及室內不精密度 對單個實驗室數據進行分析，實驗室內部3個項目6個檢測結果的室內CV及與靶值的相對偏移見圖1、圖2。根據CrCV≤4.0%、UACV≤4.5%、UrCV≤3.0%的標準[5]，Cr-2016A、Cr-2016B、UA-2016A、UA-2016B、Urea-2016A、Urea-2016B分別有4.29%（3/70）、2.86%（2/70）、0.00%（0/70）、1.43%（1/70）、8.57%（6/70）、7.14%（5/70）的實驗室超過行業標準的要求。以參考方法定值結果為靶值，并以《臨床化學檢驗常規項目分析質量指標》（WS/T 403—2012）中偏移的標準[7]評價回報結果的實驗室的不合格率，結果見表3。

圖1 單個實驗室3個項目6個檢測結果的室內CV

圖2 單個實驗室3個項目6個檢測結果與靶值的偏移

表3 正確度調查不合格率分析

3 討論

和常規室間質評相比，正確度驗證是一種比較理想的質評方法，其使用的樣本和臨床患者樣本接近，實驗室采用多次重復檢測，樣本的指定值采用參考方法測定，不受基質效應、方法特異性等因素的影響，有助于標準化進程的推進。上海市臨床檢驗中心生化實驗室的參考方法經過這幾年的運行，每年參加國際、國內參考實驗室比對，并通過了ISO 15195參考實驗室認可，證明其檢測能力準確可靠，為開展正確度驗證工作提供了保障。目前，多家臨床檢驗中心在開展正確度驗證計劃，為臨床實驗室的質量管理和改進提供多種選擇。

本研究分析了上海地區2016年度小分子正確度驗證結果，按儀器進行分組分析，Cr-2016A、Cr-2016B、UA-2016A、UA-2016B、Urea-2016A、Urea-2016B測定結果與靶值的偏移分別為-5.54%～0.62%、-5.34%～2.89%、-1.43%～2.62%、-1.49%～3.73%、-1.74%～0.81%、-0.08%～1.16%，總體情況較好。在測定方法的CV方面，實驗室內CV的中位數均在1%左右，表明上海地區大多數實驗室檢測結果具有較好的精密度，優于全國調查的結果[8]。

正確度是指多次測量均值與靶值（參考值）的接近程度，一般用偏移來評價。從單個實驗室檢測結果的偏移來看，2個批號樣本Cr的不合格率分別為17.14%、7.14%，UA的不合格率分別為10.00%、14.29%，Urea的不合格率分別為41.43%、37.14%，表明部分實驗室的正確度還需改進，其標準化程度還不夠。Cr的情況好于張傳寶等[8]的研究結果，而Urea的情況與他們的研究結果較接近，存在大量偏移不合格的實驗室。當臨床實驗室未能通過正確度驗證時，一般要從校準品入手查找問題，如校準品的定值是否存在問題，或是否使用了無溯源性的非配套標準品；另外，應注意實驗室使用的檢測方法是否具有特異性，試劑是否在有效期內以及人員、設備問題，逐一排查，發現問題并加以改進。

Urea出現的高不合格率情況應引起注意。對于評價標準的制定，國際臨床化學和檢驗醫學聯合會組織的國際參考實驗室比對制定的Cr、UA、Urea的允許偏移分別為5%、3.25%、5%。國家衛生計生委臨床檢驗中心組織的臨床檢驗室間質評計劃中正確度驗證制定的Cr、UA、Urea的允許偏移分別為6%、6%、4%[10]，比國際標準中的偏移標準稍寬松。因此，我們目前評價采用的標準是否適用還需要在實際工作中加以驗證。因此對于質評機構來說，一個合適的評價標準的確定是至關重要的，需要在實踐中不斷探索。

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