肌酐檢測方法及常見藥物對肌酐檢測干擾的研究進展

王正印， 尹 元， 王偉靈

（上海中醫(yī)藥大學附屬上海市中西醫(yī)結合醫(yī)院檢驗科，上海 200082）

血液中的肌酐水平反映了腎小球的濾過功能，是衡量腎功能的重要指標之一[1]。然而，臨床上常發(fā)現(xiàn)血肌酐的檢測結果與患者的臨床表現(xiàn)不符，這令許多臨床醫(yī)生和患者感到困惑和不解。究其原因，可能與血肌酐的檢測結果會受很多因素，特別是藥物的干擾，且不同藥物對不同檢測方法的干擾方向也不同有關[2]。目前，臨床實驗室檢測肌酐的常規(guī)方法有多種，這些方法都會受到藥物的干擾。因此，本文就肌酐的檢測方法及臨床上常見藥物對肌酐檢測結果的干擾作用作一綜述。

1 肌酐的檢測方法

1.1 堿性苦味酸法

堿性苦味酸法是檢測肌酐最經(jīng)典的方法，由Jaffé最先發(fā)現(xiàn)這種反應過程，故又稱Jaffé法[3]。其原理是在堿性條件下肌酐與苦味酸反應生成橙紅色結合物，在505～520 nm波長處測其吸光度（A）值來反映肌酐的水平。這種方法的特異性不強，抗干擾能力差，易受血中很多“假肌酐”的干擾，如丙酮酸、膽紅素、乙酰乙酸鹽等，這些“假肌酐”也會與苦味酸發(fā)生有色反應，從而影響肌酐的檢測結果[4-5]。室間質(zhì)量評價結果顯示，堿性苦味酸法變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）范圍為1.03%～18.23%，其中 BECKMANCOULTER檢測系統(tǒng)實驗室間的變異情況優(yōu)于其他檢測系統(tǒng)，BECKMAN-COULTER UniCel系列檢測系統(tǒng)的CV范圍為3.13%～4.90%[6]。此外，該方法易出現(xiàn)交叉污染。但由于該方法成本低，故很多臨床實驗室仍一直在使用。雖然有些臨床實驗室使用經(jīng)過改良的堿性苦味酸法，但均或多或少地存在各種問題。因此，肌酐檢測的干擾問題未從根本上得到解決。

1.2 酶法

酶法包括肌氨酸氧化酶法與肌酐亞胺水解酶法。肌氨酸氧化酶法的原理是通過肌酐酶的作用使體內(nèi)的肌酐水解成肌酸和尿素，肌酸又可經(jīng)一系列反應生成H2O2，生成的H2O2偶聯(lián)Trinder反應，再通過比色法測定肌酐水平。有很多研究表明該法的準確度優(yōu)于堿性苦味酸法，抗干擾能力相對較好且交叉污染相對較少，但肌酸、血紅蛋白、維生素C和膽紅素等對該方法的干擾作用較強[7]。室間質(zhì)量評價結果顯示，酶法的CV范圍為1.50%～8.08%，其中日立系列（日立儀器+羅氏試劑）檢測系統(tǒng)的變異情況（CV為1.50%～3.00%）優(yōu)于其他檢測系統(tǒng)[6]。肌酐亞胺水解酶法是通過肌酐亞氨基水解酶將肌酐水解，經(jīng)一系列反應生成谷氨酸，通過測定340 nm處的A值降低速率計算肌酐水平。與肌氨酸氧化酶法相比，該方法穩(wěn)定性更好，不易受血紅蛋白、維生素C和膽紅素等物質(zhì)的影響，但由于試劑的穩(wěn)定性較差，而且價格較高，故使用該方法的實驗室并不多[8]。雖然現(xiàn)在酶法因其較高的穩(wěn)定性和特異性而受到越來越多臨床實驗室的青睞，但仍有很多因素可干擾該方法的檢測結果[9]。

1.3 放射性核素稀釋質(zhì)譜法（isotope dilutionmass spectrometry，ID-MS）

ID-MS的原理是將已知豐度與重量的放射性核素稀釋劑與樣本混合，用質(zhì)譜檢測混合前后樣本豐度的變化，求得樣本中某種元素水平的方法。ID-MS具有很高的特異性，而且精密度與準確度也非常好，不產(chǎn)生系統(tǒng)誤差，是檢驗臨床指標量值最常用的參考方法，但由于該方法的檢測成本較高，目前還未能在臨床上普遍使用。

1.3.1 放射性核素稀釋氣相色譜質(zhì)譜法（isotope dilution-gas chromatography mass spectrometry，ID-GC-MS）

ID-GC-MS以13C和15N2作為標記物，在酸性環(huán)境中通過陽離子交換柱提純樣本中的肌酐，采用三氟乙酸衍生后再用氣相色譜質(zhì)譜法（gas chromatography mass spectrometry，GC-MS）檢測。該方法的準確度較高，但檢測前需要將樣本進行一系列較為復雜的處理，費時費力，不適用于臨床樣本的檢測，所以又促使人們研究出了另一種檢測方法——同位素稀釋液相色譜質(zhì)譜法（isotope dilution-liquid chromatography mass spectrometry，ID-LC-MS）。

1.3.2 ID-LC-MS

ID-LC-MS不需要像ID-GC-MS一樣進行復雜的樣本預處理，只要將樣本進行簡單的離心、沉淀蛋白質(zhì)并過濾，便可直接進行檢測，而且檢測的準確度高、特異性強。目前，國際上已把此方法作為多種臨床指標定值的參考方法[7]。

1.4 高效液相色譜法（high-performance liquid chromatography，HPLC）

HPLC通過陽離子交換層析柱將肌酐分離出來，再測得其在233 nm處的A值，從而檢測出血肌酐水平。該方法的精密度和準確度高于常規(guī)使用的堿性苦味酸法和酶法，但檢測過程比較繁瑣，用時較長，并不適合用于臨床大批量樣本的檢測。

1.5 毛細管電泳法

毛細管電泳法是通過毛細管電泳將血清中的肌酐分離出來，然后檢測234 nm處的A值計算肌酐值。該方法效率高，樣本用量少，分析速度快，并可排除體內(nèi)“假肌酐”對血肌酐測定的干擾。但毛細管內(nèi)壁易吸附蛋白質(zhì)，導致該法的重復性較差[10-11]，因此不適用于臨床常規(guī)檢測。

1.6 拉曼散射法

拉曼散射法是由STOSCH等[12]提出的一種檢測肌酐的方法，該方法使用2-13C和2，3-15N2作為內(nèi)標，計算出天然肌酐和標記物肌酐特征拉曼散射峰的強度比值，原理類似于ID-MS，但檢測成本低于ID-MS，在臨床上可用于常規(guī)檢測。

1.7 電極法

電極法是通過半酶法，利用離子選擇性電極對肌酐進行測定的一種方法。該方法雖然操作比較簡單，速度也較快，但抗內(nèi)源性物質(zhì)干擾的能力較差，故在臨床上也并不常用。

2 常見藥物對肌酐檢測的干擾

藥物對肌酐檢測的干擾已引起臨床越來越多的關注，很多研究也已證實多種藥物對肌酐檢測存在干擾。相關藥物的干擾情況見表1。

3 肌酐檢測的溯源性及標準化

臨床檢驗結果對于疾病的診斷與防治有至關重要的意義。只有保證檢驗結果的準確性，才能在疾病的診斷與防治方面做到更加精準。要實現(xiàn)檢測結果的準確、可靠，最有效的方法是實現(xiàn)檢測結果的溯源性和標準化。目前，國際上非常重視檢測結果的量值溯源，而我國的臨床實驗室在這一方面尚需完善。由于檢測肌酐的方法較多，不同儀器和試劑的檢測結果之間也存在差異，加上藥物等因素的干擾，因此肌酐項目的可比性與互換性較差。國家衛(wèi)生和計劃生育委員會及上海市臨床檢驗中心已針對肌酐項目實施了正確度驗證計劃，并于2013年頒布了我國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T414—2013《血肌酐測定參考方法——同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》。加強與國際同行之間的交流與合作，建立必要的臨床檢驗參考標準，為肌酐檢測試劑和結果制定參考標準，完善我國的臨床檢驗參考體系，是未來的一個發(fā)展趨勢。目前，建立完善的檢驗參考體系尚有很多問題需要解決，如溯源參考物質(zhì)的來源、如何保證參考物質(zhì)的互通性以及溯源鏈和不確定度評估方案的建立等。

表1 常見藥物對肌酐測定的干擾

4 總結

綜上所述，影響肌酐的藥物較多，而藥物引起的假性結果可能會導致臨床醫(yī)生出現(xiàn)誤診，延誤患者病情。因此，深入研究藥物對肌酐檢測的干擾機制，提高檢測方法的抗干擾能力，選擇適合的檢測方法以及加強臨床醫(yī)生與檢驗人員的及時溝通，對提高檢驗質(zhì)量及臨床診療工作具有重要意義。此外，建立檢測系統(tǒng)的溯源鏈和肌酐檢測的參考體系，實現(xiàn)肌酐檢測的標準化勢在必行。

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