香葉天竺葵花蜜腺形態(tài)結(jié)構(gòu)及發(fā)育解剖學(xué)研究

李 雪，楊明華，夏永學(xué)，劉擁軍，匡海鷗，李佛琳，董 坤，李亞輝，黃云杰，徐 潔，陳 劍

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明 650201；3.云南大學(xué) 現(xiàn)代分析測(cè)試中心,昆明 650091；4.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 煙草學(xué)院，昆明 650201；5.云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心，昆明 650231)

香葉天竺葵(PelargoniumgraveolensL.)又叫摸摸香，原產(chǎn)于非洲南部，屬牦牛兒苗科，天竺葵屬[1-2]。植株基部木質(zhì)化，密被光澤的柔毛，有香味，莖葉可以提取精油[3-4]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)香葉天竺葵的研究多見于香葉天竺葵精油提取[5]、精油成分[6]以及精油利用[4]等方面。此外，也有關(guān)于香葉天竺葵抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[7]、抗細(xì)菌[8]、真菌[9]、病毒[10-11]等藥理作用[6]的研究報(bào)道。楊明華等[12]研究發(fā)現(xiàn)香葉天竺葵花具有蜜腺且泌蜜量較大，并報(bào)道香葉天竺葵開花泌蜜規(guī)律及西方蜜蜂的采集行為，表明香葉天竺葵可以作為一種蜜源植物加以利用。植物蜜腺通過分泌花蜜吸引傳粉者對(duì)其進(jìn)行異花授粉，以保證植物繁殖和種族延續(xù)的順利進(jìn)行，是植物在長(zhǎng)期進(jìn)化過程中形成的適應(yīng)性特征，因此，蜜腺在生物多樣性維持、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和食品科學(xué)中起著極其重要的作用。目前，香葉天竺葵花蜜腺方面的研究尚未見報(bào)道。本研究運(yùn)用掃描電鏡、石蠟切片、組織化學(xué)技術(shù)，對(duì)香葉天竺葵花蜜腺的形態(tài)結(jié)構(gòu)和發(fā)育過程進(jìn)行研究，以期為香葉天竺葵花蜜腺泌蜜機(jī)理的深入研究、香葉天竺葵蜂蜜生產(chǎn)和開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以云南省昆明市石林縣石林耀奇香草谷香葉天竺葵種植區(qū)長(zhǎng)勢(shì)良好的香葉天竺葵花為試材，自2015年4月初起香葉天竺葵花期開始觀察至2015年8月末花期結(jié)束為止，歷時(shí)近5個(gè)月，分別在花蕾期、初花期、盛花期和末花期4個(gè)時(shí)期進(jìn)行取樣，每個(gè)時(shí)期至少取10朵花。

1.2 試驗(yàn)方法

對(duì)香葉天竺葵的花蜜腺及其周圍組織進(jìn)行戊二醛固定、乙醇脫水、干燥，在BAL-TEC SCD005噴金儀中鍍鉑，QUANTA 200掃描電鏡觀察并拍照，以研究香葉天竺葵花蜜腺的超微結(jié)構(gòu)特征。對(duì)不同發(fā)育階段花組織及花蜜腺進(jìn)行乙醇-冰醋酸-福爾馬林(FAA)固定，乙醇脫水、石蠟制片(切片厚度7～8 μm)、染色(其中PAS染色觀察糖類、考馬斯亮藍(lán)染色觀察蛋白質(zhì)分布)、中性樹膠封片[13]、LEICA顯微鏡觀察香葉天竺葵花蜜腺的發(fā)育過程及組織化學(xué)變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 香葉天竺葵花蜜腺的形態(tài)結(jié)構(gòu)

在花瓣內(nèi)側(cè)子房基部著生有10個(gè)蜜腺，兩兩上下疊加并圍成圓圈將花柱包圍(圖1-1，1-2，1-3)，新鮮的蜜腺呈黃綠色，橢圓形。分泌表皮、泌蜜組織和維管束組成蜜腺，分泌表皮上有泌蜜孔。通過掃描電鏡觀察，蜜腺細(xì)胞呈方形(圖1-4)，排列緊密，蜜腺表面有波紋狀皺折的角質(zhì)層。蜜腺表面分泌表皮上分布有氣孔器(圖1-5，1-6)，氣孔器呈張開狀態(tài)。蜜腺中分布有維管束，與泌蜜組織相連(圖1-8)。末端延伸到蜜腺基部，維管束起到對(duì)蜜腺內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)淖饔谩?/p>

N.蜜腺 Thenectary；A.蜜腺著生位置 Insertion position of nectary；C.蜜腺及其表皮細(xì)胞 Nectary and epidermal cells；S.氣孔器 Stomatal apparatus；V.維管束 Vascular bundle；Cu.角質(zhì)層 Cuticle；R-Cu.破裂的角質(zhì)層 Ruptured cuticle；E.表皮毛 Epidermal hair；1.蜜腺排列情況(110×) Floralnectary arrangement(110×)；2.蜜腺在花朵中的著生位置(65×) Insertion position of nectary(65×)；3.電鏡下的成熟蜜腺(示蜜腺表皮細(xì)胞)(172×) A photograph of a mature nectary under electron microscope, showing epidermal cells of a nectary(172×)；4.蜜腺表皮細(xì)胞及波紋狀皺折(800×) Nectar epidermal cells and corrugated wrinkles(800×)；5.蜜腺氣孔器(2066×) Stomatal apparatus(2066×)；6.蜜腺氣孔器(5580×) Stomatal apparatus(5580×)；7.破裂的角質(zhì)層(2000×) Ruptured cuticle(2000×)；8.蜜腺維管束(4500×) Vascular bundle of nectary(4500×)

圖1香葉天竺葵花蜜腺
Fig.1PelargoniumgraveolensL.nectar

2.2 不同時(shí)期香葉天竺葵花蜜腺發(fā)育解剖

2.2.1 花蕾期 自花蕾期蜜腺細(xì)胞開始發(fā)育，但較周圍的細(xì)胞小得多(圖2-1，2-2)。每個(gè)蜜腺基部均有蜜腺組織與隔膜形成的橢圓形的腔室。腔室的上部，蜜腺組織開始向外凸起，凸起部分將發(fā)育為泌蜜組織。PAS染色顯示該時(shí)期蜜腺已經(jīng)開始形成淀粉粒，淀粉粒主要沉積于子房基部的蜜腺組織。同時(shí)，考馬斯亮藍(lán)染色顯示該時(shí)期開始有蛋白質(zhì)的積累。

紅色代表淀粉粒 Red represents starch grains；藍(lán)色代表蛋白質(zhì) Blue represents protein;1～2.花蕾期蜜腺(200×) Nectary at budding stage(200×)； 3～4.初花期蜜腺(200×) Nectary at early flowering stage(200×)；5～6.盛花期蜜腺(200×) Nectary at full bloom stage(200×)；7～8.末花期蜜腺(200×) Nectary at withered flowering stage(200×)

圖2香葉天竺葵不同時(shí)期花蜜腺
Fig.2PelargoniumgraveolensL.nectarindifferentperiods

2.2.2 初花期 蜜腺組織細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，數(shù)量增多，蜜腺組織明顯膨大伸長(zhǎng)，各蜜腺大小均勻，排列規(guī)則，說明蜜腺發(fā)育已基本成熟，此時(shí)可見每個(gè)蜜腺組織分為內(nèi)、外兩部分，淀粉粒主要集中分布于內(nèi)外兩部分頂端及近子房的基部(圖2-3，2-4)。

2.2.3 盛花期 整個(gè)蜜腺已完全發(fā)育成熟，蜜腺細(xì)胞呈長(zhǎng)方形，緊密地排列在一起(圖2-5，2-6)。蜜腺基部產(chǎn)生的淀粉粒數(shù)量明顯減少，但蜜腺表皮細(xì)胞中的淀粉粒仍較為豐富，該時(shí)期蜜腺內(nèi)蛋白質(zhì)含量達(dá)到最高。

2.3.4 末花期 蜜腺組織開始萎縮，蜜腺之間腔隙變小，子房基部組織細(xì)胞完全解體，蜜腺組織也開始解體。蜜腺周圍組織細(xì)胞增多、增厚(圖2-7，2-8)。分泌表皮中仍有一定數(shù)量的淀粉粒。

3 討 論

蜜腺是植物器官表面的某些細(xì)胞轉(zhuǎn)化形成的特殊分泌組織，Zimmerrman[14]將植物蜜腺分為結(jié)構(gòu)蜜腺和非結(jié)構(gòu)蜜腺，結(jié)構(gòu)蜜腺具有分泌表皮和泌蜜組織，而非結(jié)構(gòu)蜜腺僅由分泌表皮組成。按此定義，香葉天竺葵的花蜜腺屬于結(jié)構(gòu)蜜腺，因?yàn)槠溆歇?dú)立的結(jié)構(gòu)，在其分泌表皮下存在形態(tài)與結(jié)構(gòu)不同于周圍組織的泌蜜組織。Fahn 1979年將花蜜腺分為花被蜜腺、雄蕊蜜腺、花托蜜腺、圍繞子房基部的花盤蜜腺、子房蜜腺、花柱蜜腺、柱頭蜜腺、一朵花上具有幾種類型的蜜腺和下位子房上的盤狀蜜腺9類[15-16]。中國(guó)學(xué)者柯賢港[17]將花蜜腺分為16類，分別是位于花被基部、花瓣內(nèi)側(cè)基部、距內(nèi)(萼片向后延伸成一細(xì)管狀體稱為距)、花萼或花冠與雌蕊之間、雌蕊上或雄蕊基部、雄蕊與子房之間、子房基部、花管內(nèi)周、子房頂端圍繞花柱基部、柱頭下面的環(huán)上、子房中隔內(nèi)、花的苞片上、花柄上、花序軸上、花序上的蜜腺；把花外蜜腺分為葉蜜腺(包括葉脈蜜腺和葉緣蜜腺兩類)、托葉蜜腺、葉柄蜜腺等。除此之外，還有莖軸蜜腺(櫻桃)、穎蜜腺、稃片蜜腺[18]。據(jù)此推斷，香葉天竺葵花蜜腺應(yīng)屬花托蜜腺。

Cook[19]和Fahn[16]提出幾種蜜腺分泌花蜜的可能途徑，但認(rèn)同度較高的是蜜汁通過分泌表皮上開放的氣孔排出。在本研究中，香葉天竺葵花蜜腺分泌表皮上分布有氣孔器，且其始終呈張開狀態(tài)，推測(cè)此氣孔器已發(fā)育為變態(tài)氣孔器；此外，本研究發(fā)現(xiàn)香葉天竺葵流蜜期間其分泌表皮的角質(zhì)層有破裂現(xiàn)象，這提示其蜜汁應(yīng)該由變態(tài)氣孔器及角質(zhì)層泌出。結(jié)合香葉天竺葵花蜜腺結(jié)構(gòu)來看，其花蜜產(chǎn)生及運(yùn)輸?shù)耐緩娇赡転椋好诿劢M織合成原蜜汁，經(jīng)維管束運(yùn)送至分泌表皮，通過變態(tài)氣孔器和角質(zhì)層排出，流向子房基部。Robards等[20]在研究茼麻蜜腺分泌蜜汁時(shí)發(fā)現(xiàn)，其蜜汁可由分泌細(xì)胞內(nèi)膜圍成的可透性非質(zhì)體空間進(jìn)入角質(zhì)膜下腔，當(dāng)壓力達(dá)到一定程度時(shí)，蜜汁可通過角質(zhì)層上間隔排列的小孔泌出。本研究之蜜汁通過角質(zhì)層泌出的結(jié)論與Robards等[20]的結(jié)果一致。

香葉天竺葵花蜜腺的發(fā)育始于花蕾期，過碘酸希夫反應(yīng)表明這個(gè)時(shí)期已有淀粉粒形成，同時(shí)，考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)也證明這個(gè)時(shí)期蛋白質(zhì)合成活躍。在初花期蜜腺細(xì)胞數(shù)目增加，蜜腺組織基本成熟，在花蕾期和初花期子房基部的淀粉粒較為豐富，初花期蜜腺內(nèi)外兩部分頂端也已有較多淀粉粒；在盛花期發(fā)育成熟，呈長(zhǎng)方形緊密排列，蜜腺基部產(chǎn)生的淀粉粒數(shù)量明顯減少，但表皮細(xì)胞中的淀粉粒仍較為豐富；末花期時(shí)蜜腺開始萎縮，分泌表皮中仍有一定數(shù)量的淀粉粒。眾所周知，花蜜的主要成分是糖類和水，根據(jù)香葉天竺葵花蜜腺的發(fā)育及糖類物質(zhì)合成過程可以看出，花蜜中的糖分至少部分來自于原蜜中的淀粉粒，且這些淀粉粒是從子房基部開始合成的，在泌蜜期間，通過淀粉粒的降解，形成多糖或單糖，再通過特定方式排出蜜腺。由此可以推斷出香葉天竺葵的花蜜腺應(yīng)屬于淀粉型蜜腺，這種類型的蜜腺及其糖分貯存方式與很多已報(bào)道植物如油菜[21]、荔枝[22]、杏[23]、荇菜[24]等的蜜腺高度一致，也與Rachmilevitz等[25]提出的淀粉是分泌蜜汁的一部分來源的觀點(diǎn)相同，說明這是在長(zhǎng)期進(jìn)化過程中形成的一種普遍方式。在香葉天竺葵花蜜腺發(fā)育過程中，4個(gè)花期均有蛋白質(zhì)的積累，但在盛花期蛋白質(zhì)含量達(dá)到最高，這說明蛋白質(zhì)參與香葉天竺葵花蜜腺的發(fā)育、蜜汁的集聚和分泌等生理生化過程，這與辛華等[26]對(duì)地花椒蜜腺發(fā)育研究和曹玉芳等[27]對(duì)益母草花蜜腺發(fā)育研究中蛋白質(zhì)的變化類似。此外，免疫組化[28]的結(jié)果顯示，在各個(gè)花期蛋白質(zhì)的積累比多糖類物質(zhì)的積累要多，這可能意味著香葉天竺葵花蜜具有較高的氨基酸含量和較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

本研究應(yīng)用掃描電鏡和免疫組織化學(xué)方法，探討香葉天竺葵花蜜腺多糖和蛋白質(zhì)合成的變化規(guī)律及花蜜泌出方式，但要深入、準(zhǔn)確地理解香葉天竺葵花蜜腺的泌蜜機(jī)理，則需對(duì)其不同發(fā)育階段蜜腺細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)如液泡、高爾基體、質(zhì)體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、線粒體等細(xì)胞器及維管束、胞間連絲的數(shù)量及其內(nèi)含物積累與變化的動(dòng)態(tài)變化做進(jìn)一步的研究和分析。

參考文獻(xiàn)Reference：

[1] 王文翠,唐文沖,李云平,等.云南熱區(qū)柑桔套種香葉天竺葵技術(shù)[J].云南農(nóng)業(yè)科技,2010(5):35-37.

WANG W C,TANG W CH,LI Y P,etal.Technology of citrus intercroppingPelargoniumgraveolenyin hot area of Yunnan[J].YunnanAgriculturalScienceandTechnology,2010(5):35-37.

[2] 呂耀優(yōu),羅玉英,和金花,等.香葉天竺葵高產(chǎn)栽培技術(shù)[J].云南農(nóng)業(yè)科技,2010 (1):42-43.

Lü Y Y,LUO Y Y,HE J H,etal.High yield cultivation techniques ofPelargoniumgraveoleny[J].YunnanAgriculturalScienceandTechnology,2010 (1):42-43.

[3] 孫 偉,瞿偉菁.香葉天竺葵的藥理研究進(jìn)展[J].中藥材.2002(8):600-602.

SUN W,QU W J.Pharmacological progress ofPelargoniumgraveoleny[J].ChineseHerbalMedicines,2002(8):600-602.

[4] 易清元,江 明,楊艷瓊,等.香葉天竺葵多倍體精油的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2014,30(3):244-249.

YI Q Y,JIANG M,YANG Y Q,etal.The analysis of chemical constituents of essential oil inPelargoniumgraveolenspolyloid seedlings[J].ChineseAgriculturalScienceBulletin,2014,30(23):244-249.

[5] 潘如舟.香葉天竺葵的栽培和利用[J].中國(guó)野生植物資源,1990 (4) :42-44.

PAN R ZH.Pelargoniumgraveolenycultivation and utilization[J].ChineseWildPlantResources,1990(4):42-44.

[6] 孫 偉,徐志敏,王淳凱,等.香葉天竺葵精油及單體抗氧化能力比較[J].中藥材,2005,28(2):87-89.

SUN W,XU ZH M,WANG CH K,etal.Study on antioxidant activity of essential oils and its monomer formPelargoniumgraveolens[J].JournalofChineseMedicinalMaterials,2005,28(2):87-89.

[7] 黨 璇,張曉珍,姚 默,等.香葉天竺葵藥學(xué)研究概況[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(31):19095-19096.

DANG X,ZHANG X ZH,YAO M,etal.Overview of pharmaceutical research onPelargoniumgraveolensL[J].JournalofAnhuiAgricuturalSciences,2011,39(31):19095-19096.

[8] 周仲良,管秀鸞.香葉天竺葵抗腫瘤有效成分研究[J].中國(guó)中藥雜志,1982,7(4)：31.

ZHOU ZH L,GUAN X L.Study on anti-tumor effective components ofPelargoniumgraveoleny[J].ChineseJournalofTraditionalChineseMedicine,1982,7(4):31.

[9] 湯秀蘭,林特夫,倪語星,等.香竺葵油抗細(xì)菌作用的研究[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1981(4):257-260.

TANG X L,LIN T F,NI Y X,etal.Bacteriocidal action of essence ofPelargoniumgraveolens[J].JournalofBengbuMedicalCollege,1981(4):257-260.

[10] 林特夫,湯秀蘭,張?jiān)?等.香竺葵油抗真菌、鉤端螺旋體及肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)研究[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1981(4):261-263.

LIN T F,TANG X L,ZHANG Y H,etal.Effect of essence ofPelargoniumgeraveolenson fungus,leptospira and hepatits B virus [J].JornalofBengbuMedicalCollege,1981(4):261-263.

[11] 富抗育.中草藥和天然藥物中的抗病毒活性物質(zhì)及其作用原理[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,1988(4):195-199.

FU K Y.Antiviral active substances in Chinese herbal medicines and natural medicines and their action principle[J].ChinesePharmaceuticalJournal,1988(4):195-199.

[12] 楊明華,匡海鷗,夏勇學(xué),等.香葉天竺葵開花泌蜜規(guī)律及西方蜜蜂采集行為研究[J].中國(guó)蜂業(yè),2017(7):42-45.

YANG M H,KUANG H O,XIA Y X,etal.Study on regularities of blooming and nectar secretion inPelargoniumgravelensand gorging behavior ofApismellifera[J].ChinaApiculture,2017(7):42-45.

[13] 崔愛萍.取材于植物葉片的石蠟制片[J].科技情報(bào)開發(fā)與經(jīng)濟(jì),2009(21):169-170.

CUI A P.Talking about the paraffin sectioning based on plant leaves [J].Sci-TechInformationDevepmentEconomy,2009(21):169-170.

[14] ZIMMERRMAN J G.über die extrafloralen nektarien der angiospermen[J].BeihefteZumBotanischenZentralblatt,1932,49A:99-196.

[15] 王康才,張榮榮,盧秋文,等.芍藥蜜腺及泌蜜規(guī)律研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2008(3):142-146.

WANG K C,ZHANG R R,LU Q W,etal.Peony nectary and secretion of honey law[J].JiangsuAgriculturalSciences,2008(3):142-146.

[16] FAHN A.Secretory Tissue in Plants[M].London,New York,San Franciseo,Academic Press,1979:51-113.

[17] 柯賢港.蜜腺及其分類[J].蜜蜂雜志,1993,7(1):14-16.

KE X G.Classification and nectary[J].BeeMagazine,1993,7(1):14-16.

[18] 毛學(xué)文.植物的蜜腺[J].生物學(xué)教學(xué),2003,28(11):56-57.

MAO X W.Plant nectary[J].BiologyTeaching,2003,28(11):56-57.

[19] COOK W S.The structure of some nectar glands of Iowa honey plants.Proc.[J].ProceedingoftheLowaAcademryofScience,1923;30:301-329.

[20] ROBARDS A W,M STARK.Nectar secretion in Abutilon:a new model[J].Protoplasma,1988;142(2/3):79-91.

[21] 鄧彥斌,胡正海.油菜花蜜腺發(fā)育過程的超微結(jié)構(gòu)變化與泌蜜機(jī)理的研究[J].西北植物學(xué)報(bào),1996,16(2)：94-100.

DENG Y B,HU ZH H.Studies on the ultrastucture and of nectar secretion in floral nectaries ofBrassicacampestrisLinn. at different stages[J].ActaBotanicaBoreali-OccidentaliaSinica,1996,16(2):94-100.

[22] 寧熙平,吳 鴻.荔枝花蜜腺的結(jié)構(gòu)發(fā)育特點(diǎn)及其生物學(xué)意義[J].植物分類學(xué)報(bào),2006,44(5)523-537.

NING X P,WU H.Anatomical study on the development of floral nectary inLitchichinensis[J].ActaPhytotaxonomicaSinica,2006,44(5):523-537.

[23] 王 虹,吳 晶,鄧彥斌.杏花蜜腺的發(fā)育解剖學(xué)研究[J].植物研究,2002,10,22(4):456-459.

WANG H,WU J,DENG Y B.The development and anatomical studies on the floral nectar inArmeniacavulgaris[J].BulletinofBotanicalResearch,2002,10,22(4):456-459.

[24] 丁小余,施國(guó)新,常福辰,等.荇菜成熟花蜜腺的形態(tài)及其泌蜜過程的超微結(jié)構(gòu)研究[J].西北植物學(xué)報(bào),1996,16(4):421-427.

DING X Y,SHI G X,CHANG F CH,etal.Studies the morphology and the ultrastructure of the mature floral nectar ofNymphoidespeltaturm(Gmael.) O.Kuntz during the nectar secretary period [J].ActaBotanicaBoreali-OccidentaliaSinica,1996,16(4)：421-427.

[25] RACHMILEVITZ T,FAHN A.Ultrastructure of nectarines ofVincarsaL.,VincamajorL.andCotrussinensisOsbeck cv.ualencia and its relation to the mechanism of nectar secretion[J].AnnalsBotany,1973,37(149):1-9.

[26] 辛 華,初慶剛,胡正海.地花椒蜜腺發(fā)育的解剖學(xué)觀察[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào).2000,9(1):43-46.

XIN H,CHU Q G,HU ZH H.Anatomical studies on the development of the floral nectary inThymusquinquecostatusCelak[J].JournalofPlantResourcesandEnvironment,2000,9(1):43-46.

[27] 曹玉芳,辛 華,王奎玲,等.益母草花蜜腺發(fā)育解剖學(xué)研究[J].西北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,28(12):36-42.

CAO Y F,XIN H,WANG K L,etal.Developmental and anatomidal studies on the floral nectary inLeonurusartemisia[J].TheJournalofNorthwestAgriculturalUniversity,2000,28(12):36-42.

[28] 羅燦燦,沈家葆,黃小芳,等.甘藍(lán)型油菜MSL不育系花藥發(fā)育的細(xì)胞學(xué)研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2017,26(10):1470-1476.

LUO C C,SHEN J B,HUANG X F,etal.Cytological observation on anther development of genic male sterile line MSL inBrassicanapusL.[J].ActaAgriculturaeBoreali-occidentalisSinica,2017,26(10):1470-1476.