閩楠潰瘍病病原鑒定及其生物學特性研究

郭朦朦　陳全助　馮麗貞　楊澤慧　陸芝　馮錦秀　黃捷

摘 要 閩楠（Phoebe bournei），我國Ⅱ級保護瀕危植物，是亞熱帶常綠闊葉林重要組成樹種，而閩楠潰瘍病的發(fā)生嚴重危害其開發(fā)利用。為明確閩楠潰瘍病的致病菌，以便后續(xù)科學的指導病害防治，本文從福建省閩楠病枝中分離純化菌株，通過致病性測定、形態(tài)學觀測以及rDNA-ITS、GAPDH、β-tubulin、Histone3序列分析鑒定病原菌，并分析其生物學特性。結果顯示：從閩楠病枝中分離出4種菌株，分別編號為SS-01、SS-02、SS-03和SS-04，其中菌株SS-03致病菌為粉紅粘帚霉（Clonostachys rosea Schroers， et al.=Gliocladium roseum Bainier）；該菌菌絲在PDA+PBL培養(yǎng)基（pH 6.0）上25 ℃黑暗條件下生長最好；最適菌絲生長碳源為麥芽糖，可溶性淀粉有利于產孢；最適氮源為牛肉浸膏；產孢量在PDA培養(yǎng)基（pH 7.0）上25 ℃全黑暗條件最高。空氣相對濕度≥90%（pH 8.0）時孢子萌發(fā)率最高。高溫高濕以及高郁閉度易于閩楠潰瘍病發(fā)生，故在營林造林以及苗圃撫育時應注意通風透氣，控制溫濕度，防止病害發(fā)生。該研究結果為科學有效地指導閩楠潰瘍病防治提供技術支持。

關鍵詞 閩楠；潰瘍?。徊≡b定；粉紅粘帚霉菌；形態(tài)學特征

中圖分類號 S792.24 文獻標識碼 A

Abstract Phoebe bournei was listed as the second-class important native plants in China. It is an important component of subtropical evergreen broad-leaved forest. But the occurrence of stem canker seriously affects its development and utilization. In order to understand its pathogens and to scientifically prevent the disease， the morphological characteristics identification， rDNA-ITS， GAPDH、β-tubulin， Histone3 genes sequences analysis of 4 different strains from the P. bournei cankered stems， named as SS-01， SS-02， SS-03 and SS-04 were studied. S-03 was indentified as Clonostachys rosea Schroers， et al.=Gliocladium roseum Bainier. The optimal conditions for the mycelium growth was PDA+PBL medium with pH 6.0 cultivated at 25 ℃ in dark. The best carbon source for mycelium growth was maltose， while the best for sporulation was soluble starch. The best nitrogen source for both mycelium growth and sporulation was beef extract. The suitable conditions for spore production was PDA medium with pH 7.0 cultivated at 25 ℃ in dark.The relative humidity was equal or greater than 90% with pH 8.0 and cultivated at 25 ℃ in dark had the highest spore germination. High temperature， high humidity and high canopy density were easy to induce P. bournei stem canker， so it is necessary to pay attention to ventilation， have temperature and humidity controlled to prevent the occurrence of the disease in forest planting and nursing The results provide a technical support for scientific and effective prevention and control of P. bournei stem canker.

Keywords Phoebe bournei； stem canker； identification； Clonostachys rosea； morphological characteristics

DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.08.020

閩楠（Phoebe bournei）系樟科（Lauraceae）楠屬（Phoebe）常綠大喬木，是我國特有用材樹種，因其材質通直、紋理精美、并帶有特殊香味，廣泛用于家具、建筑、雕刻行業(yè)[1-7]。閩楠樹姿優(yōu)美，冠大蔭濃，具有凈化空氣、隔音降噪、殺菌驅蟲等生態(tài)功能，也是優(yōu)良的園林綠化樹種[5-7]。 故閩楠素有“中華第一樹”的美稱[4]，古往今來備受人們的青睞，導致閩楠天然林資源被掠奪式采伐。同時閩楠人工林規(guī)模小、自身繁殖率低下、自然更新周期長等內在因素，使閩楠資源日趨衰竭[7-9]，現(xiàn)已列為國家二級瀕危保護植物[1-2]，閩楠林的保護已經迫在眉睫。然而，隨著人工純林的規(guī)?；l(fā)展，閩楠病害日趨嚴重。2015年，福建各楠木種植區(qū)相繼發(fā)現(xiàn)有閩楠病害危害，之后課題組成員隨福建省林業(yè)廳森林檢驗檢疫局對福鼎、建陽、順昌、明溪縣等閩楠潰瘍病受害區(qū)進行實地調查，發(fā)現(xiàn)受害林分發(fā)病率高達100%，嚴重時造成植株枯死，經濟損失慘重。

有研究表明粘帚霉屬（Clonostachys）可作為植物病害病原菌造成枸杞（Lycium barbarum）、蠶豆（Vicia faba L.）、黃豆（Glycine max）和紫花苜蓿（Medicago sativa）以及仙人掌（Pachycereus pringlei）的根腐，梨（Pyrus spp.）、龍眼（Dimocarp us longan Lour）的爛果[10-15]。還有不少研究表明，粉紅粘帚霉具有生防作用[16-21]，但其在閩楠上的危害卻未見報道。有鑒于此，本文對福建省閩楠種植區(qū)采集的閩楠潰瘍病病原進行分離，在形態(tài)學觀察和分子生物學鑒定的基礎上，研究其生物學特性，旨在為閩楠潰瘍病的科學防治提供技術支持，解決目前閩楠大面積人工栽培所遇到的障礙，促進閩楠產業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 標本采集及預處理

2016年7月自福建南平建陽和寧德福鼎縣閩楠天然林、人工林采集具有典型潰瘍病癥狀的閩楠枝干，切取病健交界處2 mm×2 mm大小組織，經75%酒精、0.1%升汞消毒、無菌水洗脫后置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（Potato Dextrose Agar，PDA）培養(yǎng)基平板，25 ℃黑暗恒溫培養(yǎng)，待產孢后單孢分離獲純化菌株，致病性確認后保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 致病性測定與形態(tài)學特征觀測 依據(jù)柯赫氏法則（Kochs Postulates）進行致病性測定。將純化的單孢菌株接種PDA培養(yǎng)基平板，25 ℃黑暗恒溫培養(yǎng)，以無菌水洗脫孢子，用血球計數(shù)板測定孢子濃度，并用無菌水將孢子濃度調至105個/mL。將閩楠苗莖干經75%酒精表面消毒后，用經高溫高壓滅菌的昆蟲針輕輕刺傷表面，把制備好的分生孢子懸浮液涂布于刺傷部位，用保鮮袋套住接種部位，內放置濕脫脂棉球保濕。另一批不做刺傷，僅進行表面消毒和孢子液涂布保濕。每處理3次重復，設無菌水對照。發(fā)病后從病斑分離病原菌。

將病原菌接種到PDA平板，25 ℃黑暗恒溫培養(yǎng)，觀察菌落培養(yǎng)形狀，待培養(yǎng)菌落20 d后，以水作浮載劑，尼康Nikon Ni-U正置熒光顯微鏡觀察菌株菌絲、分生孢子梗、分生孢子等形態(tài)，測定其大小[22-23]。

1.2.2 分子生物學鑒定 菌株菌絲采用玻璃紙PDA培養(yǎng)基平板培養(yǎng)收集；DNA提取參照CTAB提取法[23]；采用通用引物ITS1/ITS4、GAPDH1a/ GAPDH1b、Bt1a/Bt1b、H3-1a/H3-1b擴增病原菌株核糖體DNA內部轉錄間隔序列（Internal Transcribed Spacer，ITS）[22]GAPDH、β-tubulin以及Histone 3的基因序列[24-25]。引物詳細信息見表1。50 μL的PCR反應體系為：模板DNA 2.0 μL，10 μmol/L上下游引物各1 μL，2×EasyTaq PCR SuperMix 25 μL，加ddH2O補足到50 μL。PCR反應參數(shù)為：94 ℃預變性5 min，94 ℃變性1 min， 50～58 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，72 ℃后延伸10 min，30個循環(huán)后16 ℃保存。擴增后純化產物委托上海生工生物技術服務有限公司測序，序列提交NCBI（https：//blast.ncbi.nlm.nih. gov/Blast.cgi）網(wǎng)站進行序列同源性比對分析，以Botryosphaeria為外群種，應用MEGA 7.0軟件將ITS、GAPDH、β-tubulin、Histone3，4個基因片段拼接并用鄰接法（neighbor-joining，NJ）構建菌株系統(tǒng)發(fā)育樹，Bootstrap法進行檢驗，重復計算1 000次[22-23， 26-27]。

1.2.3 病原SS-03菌株生物學特性測定

（1）培養(yǎng)基對SS-03菌株菌絲生長和產孢量的影響。供試主要培養(yǎng)基有：水瓊脂（water agar，WA）培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖瓊脂（potato sugar agar，PSA）培養(yǎng)基、PDA+維生素B6瓊脂（PDA+VB6）培養(yǎng)基、300 g/L閩楠葉煎汁瓊脂（P. bournei s Leaf agar，PBLA）培養(yǎng)基、PDA+300 g/L閩楠葉煎汁（PDA+ P. bourneis Leaf，PDA+PBL）培養(yǎng)基、查彼（Czapek）培養(yǎng)基、燕麥瓊脂（Oatmeal agar，OA）培養(yǎng)基，各供試培養(yǎng)基參照前人[29-31]的方法進行制備。將直徑6 mm菌株菌餅接種各供試培養(yǎng)基，25 ℃黑暗條件恒溫培養(yǎng)，15 d后觀察菌落培養(yǎng)性狀，“十字交叉法”測定菌落生長情況，20 d后鏡檢各培養(yǎng)基菌株產孢量，各培養(yǎng)基均設3次重復。

（2）溫度對SS-03菌株菌絲生長、產孢量和孢子萌發(fā)的影響。SS-03菌株菌餅（Φ=6 mm）接種PDA培養(yǎng)基后，分別置5、10、15、20、25、28、30、32、35 ℃不同溫度梯度，黑暗培養(yǎng)，15 d后以“十字交叉法”觀測菌落生長情況，20 d產孢后血球計數(shù)板鏡檢統(tǒng)計不同溫度條件對菌株產孢量的影響。孢子萌發(fā)測定采用懸滴法，濃度1.0×106 個/mL分生孢子懸浮液置上述溫度梯度黑暗恒溫培養(yǎng)20 h后，鏡檢統(tǒng)計分生孢子萌發(fā)率。各溫度處理均重復3次。

（3）pH對SS-03菌株菌絲生長、產孢量和孢子萌發(fā)的影響。采用HCl（1 mol/L）溶液和NaOH（1 mol/L）溶液分別調節(jié)PDA培養(yǎng)基pH至3.0～12.0間10個梯度，取菌株菌餅（Φ=6 mm）接種上述pH的PDA培養(yǎng)基，置25 ℃黑暗恒溫培養(yǎng)，15 d后測定菌落直徑，20 d鏡檢不同pH下的產孢量。上述pH下，濃度1.0×106 個/mL分生孢子懸浮液均勻涂布具同樣pH的瓊脂載玻片，25 ℃無菌狀態(tài)恒溫培養(yǎng)20 h后，鏡檢統(tǒng)計分生孢子萌發(fā)率，每個處理均重復3次。

（4）光照對SS-03菌株菌絲生長、產孢量和孢子萌發(fā)的影響。菌株菌餅（Φ=6 mm）接種PDA平板，置全黑暗（光照/黑暗=0 h/24 h）、12 h光暗交替（光照/黑暗=12 h/12 h）和日光燈連續(xù)照射（光照/黑暗=24 h/0 h）等3種光照處理，25 ℃恒溫培養(yǎng)，15 d后觀測菌株菌落生長情況，20 d后鏡檢統(tǒng)計不同光照對菌株產孢的影響。分生孢子萌發(fā)采用懸滴法，分別置上述3種光照處理，無菌狀態(tài)25 ℃恒溫培養(yǎng)20 h，待分生孢子萌發(fā)后鏡檢統(tǒng)計孢子萌發(fā)率。每處理設重復3次。

（5）C、N源對菌絲生長和產孢的影響。以Czapek培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，葡萄糖、可溶性淀粉、甘露醇、果糖、麥芽糖和乳糖作為碳源，以等質量KNO3、（NH4）2SO4、NH4NO3、牛肉浸膏、蛋白胨為氮源，以不添加C、N源作對照，25 ℃黑暗恒溫培養(yǎng)15 d，分別觀測不同C、N源對病原菌菌絲生長的影響，20 d后鏡檢統(tǒng)計產孢量。每處理重復3次。

（6）相對濕度對SS-03菌株孢子萌發(fā)的影響。濃度1×106 個/mL孢子懸浮液均勻涂布載玻片，無菌狀態(tài)自然晾干，置于相對濕度分別為50%～ 100%等6種不同梯度的密閉干燥器，以及孢子懸浮液等7種濕度處理，25 ℃黑暗恒溫培養(yǎng)，20 h后鏡檢分生孢子萌發(fā)情況，每處理設重復3次。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用IBM SPSS Statistics 22.0和Office Excel 2007對試驗數(shù)據(jù)進行處理和分析。

2 結果與分析

2.1 病原菌株分離純化及致病性測定

閩楠潰瘍病病組織經病原分離、純化，共獲得SS-01、SS-02、SS-03、SS-04等單孢菌株4株，致病性測定結果表明，細針刺有傷接種和無傷接種僅SS-03菌株能夠侵染閩楠引起潰瘍病，而無傷接種發(fā)病滯后。SS-03菌株有傷接種枝條接種部位初為水漬狀，逐步向接種部位外圍擴展成黑褐色片狀潰瘍狀病斑，表皮壞死，韌皮部發(fā)黑，后期嚴重時包圍整個枝條，導致頂部枝葉枯萎不脫落，潮濕環(huán)境下發(fā)病部位常密布病原菌絲（圖1），這與野外自然發(fā)病癥狀表現(xiàn)一致，且能夠再次從發(fā)病部位分離到相應的接種菌。依據(jù)柯赫氏法則，可確定菌株SS-03為閩楠潰瘍病致病菌。

2.2 病原鑒定

2.2.1 形態(tài)學特征觀測 PDA固體培養(yǎng)基上，SS-03菌株菌落生長緩慢，氣生菌絲致密絮狀，菌落初期白色，后期由菌落中心逐漸變?yōu)殚冱S色，具有橘黃色顆粒，培養(yǎng)基背面由無色逐漸轉為橘黃色。SS-03菌株菌絲無色，具隔膜；具2種分生孢子梗，初級分生孢子梗有1～2輪狀分枝，大小為103.4～200.7 μm×2.0～3.5 μm，瓶梗2～4輪，頂部漸尖。次級分生孢子梗2～4輪分枝，大小為54.2～133.5 μm×2.3～6.2 μm；分生孢子卵狀橢圓形，無色，無隔膜，大小為4.8～7.0 μm × 2.5～4.6 μm（圖2）。根據(jù)培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征，參閱文獻資料[32-34]，初步將閩楠潰瘍病致病菌SS-03菌株確定為粉紅粘帚霉（Clonostachys rosea Schroers， et al.=Gliocladium roseum Bainier），其有性態(tài)為淡色生赤殼菌（Bionectria ochroleuca）。

序列分析和發(fā)育樹構建 首先用通用引物 ITS1/ITS4擴增測序后獲SS-03菌株rDNA-ITS序列，長度542 bp。NCBI在線BLAST比對后，SS-03菌株的堿基序列與粘帚霉屬（Clonostachys）的堿基序列相似度達100%。其次用通用引物 ITS1/ITS4、GAPDH1a/GAPDH1b、Bt1a/Bt1b、H3-1a/H3-1b，PCR擴增均有目的條帶產生，測序拼接后比對，堿基序列與粘帚霉屬（Clonostachys）的堿基序列相似度達97%～99%，用MEGA 7.0軟件NJ法構建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖3，圖4）后發(fā)現(xiàn)發(fā)育樹形成了明顯的分枝，其中SS-03菌株與編號為KU350736.1的粉紅粘帚霉聚為一類，遺傳距離近，其中編號HQ654905.1為有性態(tài)淡色生赤殼菌。結合形態(tài)學特征確定SS-03菌株為粉紅粘帚霉。

2.3 病原菌生物學特性觀測

2.3.1 培養(yǎng)基對病原菌絲生長和產孢的影響 不同培養(yǎng)基對粉紅粘帚霉SS-03菌株菌落生長的影響差異顯著（p<0.05）（表2）。各供試培養(yǎng)基中，SS-03菌絲以PDA+PBL培養(yǎng)基菌落生長最快，直徑最大，其次是PDA+VB6和PBLA培養(yǎng)基，而菌株菌絲在WA培養(yǎng)基中不生長。

2.3.2 溫度對病原菌絲生長、產孢和孢子萌發(fā)的影響 不同溫度對粉紅粘帚霉SS-03菌株菌落生長、分生孢子形成和孢子萌發(fā)的影響差異顯著（p<0.05）（圖5）。當溫度在10～32 ℃時，菌株菌絲均可以生長，以20～28 ℃時生長良好，其中25 ℃是菌絲生長的最佳溫度，平均菌落直徑達3.92 cm，顯著高于其他溫度處理（p<0.05），而當溫度≤5 ℃或者≥35 ℃時菌絲停止生長；當溫度在10～35 ℃之間，均可以產生分生孢子，最適產孢溫度為25 ℃，產孢量為5.01×108 個/mL，當溫度≤10 ℃或者≥35 ℃時，菌株則不產孢；分生孢子在10～35℃之間，均可以萌發(fā)，最適萌發(fā)溫度為25 ℃，萌發(fā)率達96.3%，當溫度≤10 ℃時，孢無法萌發(fā)。

2.3.3 pH對菌絲生長、產孢和孢子萌發(fā)的影響

不同pH對粉紅粘帚霉SS-03菌株菌絲生長、孢子形成和分生孢子萌發(fā)的影響差異顯著（圖6，圖7）。SS-03菌絲在pH 3.0～12.0之間均可生長，以pH 6.0～8.0時，菌絲生長較快，其中最適生長pH為6.0，而pH 3.0條件下菌株菌落直徑最小。菌株以pH>3.0時開始產孢，以pH 7.0～9.0產孢量較多，最適產孢pH為7.0，產孢量達5.55×108個/mL。pH 3.0～12.0間菌株分生孢子均可萌發(fā)，其中pH 5.0～9.0間孢子萌發(fā)率>70%，最適萌發(fā)pH為8.0，pH 10.0～12.0堿性區(qū)間孢子萌發(fā)率<50%。

2.3.4 光照對菌絲生長、產孢和孢子萌發(fā)的影響

粉紅粘帚霉SS-03菌株菌落直徑和產孢量受

光照條件影響差異顯著（p<0.05）（圖8，圖9）。不同光照條件測定結果表明，黑暗條件下菌株菌落生長最快，高達4.06 cm；光暗交替條件次之，直徑3.88 cm；連續(xù)光照條件菌落生長最慢，直徑為3.12 cm。產孢量測定結果表明，全黑暗情況下菌株菌落產孢量最多，分生孢子濃度5.75× 108 個/mL；黑暗交替處理下產孢量次之，濃度為4.55×108 個/mL；連續(xù)光照處理則產孢量最少，濃度2.64×108 個/mL。全光照培養(yǎng)后期，菌株菌落為橘黃色，顏色較其他光照處理明顯。光照對孢子萌發(fā)具有一定影響，光照時間越長，分生孢子的萌發(fā)率反而降低。

2.3.5 C/N源對菌絲生長、產孢和孢子萌發(fā)的影響 不同C源對粉紅粘帚霉SS-03菌株菌絲生長

和產孢的影響存在一定的差異（p<0.05）（圖10，

圖11）?；A培養(yǎng)基添加不同C源后均能夠顯著促進菌株菌落生長和孢子形成，以麥芽糖為碳源

最有利于菌株菌落生長，平均直徑6.02 cm，而產孢量最多的是可溶性淀粉培養(yǎng)基，其次是甘露醇、葡萄糖，無碳源產孢量最少。菌株菌絲生長最適C源為麥芽糖，最適產孢C源為可溶性淀粉。不同N源對粉紅粘帚霉SS-03菌株菌絲生長和產孢的影響存在一定的差異（p0.05）（圖12，圖13）?；A培養(yǎng)基添加不同N源后，除（NH4）2SO4外，均能夠顯著促進菌株菌落生長，以牛肉浸膏為N源最有利于菌株菌落生長，直徑7.01 cm，最適菌絲生長N源為牛肉浸膏；添加不同N源后，均能夠顯著促進菌株分生孢子形成，亦以牛肉浸膏為N源有最利于菌株分生孢子形成，每皿濃度為2.64×108 個/mL。

2.3.6 相對濕度對分生孢子萌發(fā)的影響 相對濕度對粉紅粘帚霉SS-03菌株分生孢子萌發(fā)的影響較大（表3），分生孢子萌發(fā)率隨相對濕度的提高而增加。相對濕度達60%時，分生孢子開始萌發(fā)，萌發(fā)率隨相對濕度的提高而增加，以90%～100%和孢子懸浮液萌發(fā)率最高，但相對濕度60%～80%時分生孢子的萌發(fā)率極低，不超過30%。

3 討論

粘帚霉屬真菌（Clonostachys spp.）廣泛分布于土壤中[35]，嚴林、侯思文、Bienapfl等分別報道了粉紅粘帚霉可致柴達木地區(qū)的枸杞根腐病[11]

及大豆的根腐病[36]、甘肅臨夏高寒陰濕地區(qū)蠶豆根腐病[15]，感病植株根系被病原菌破壞后，水分輸導會大大受阻，光合作用也會受到影響，降低產量[37]。唐建陽等[10]和羅萍[12]的研究表明其還可致龍眼和梨儲藏期間的爛果。我們對閩楠潰瘍病研究確定其致病菌SS-03為粘帚霉屬（Clonostachys）粉紅粘帚霉（Clonostachys rosea），這與周翠等[38]在蘋果枝干發(fā)病部位分離的粉紅粘帚霉菌株類似。在有傷接種和無傷接種下菌株均可侵染，但有傷時病菌更易侵入，自然情況下林分多蟲害時，潰瘍病更易爆發(fā)。同時，通過生物學特性測定結果可知，SS-03菌株在不同培養(yǎng)基中菌落生長速率和生長狀態(tài)有較大差異，在PDA+閩楠煎汁培養(yǎng)基中生長最好，而在WA培養(yǎng)基無法生長，說明菌株需要碳源和氮源來供其生長。在閩楠煎汁培養(yǎng)基中，同樣沒有加入碳源和碳源，但是菌株的菌絲在培養(yǎng)基上長勢較旺，說明閩楠葉片為這種菌株的生長提供了生長所需元素，這也為這種真菌在侵染過程中提供了生存基礎。菌絲在10～32 ℃均可以正常生長，其中溫度在20～28 ℃時生長良好，25 ℃時菌絲的生長速度最快。且隨著濕度的增加，孢子萌發(fā)率越來越高。孢子懸浮液的萌發(fā)率可高達96.7%。符合閩楠潰瘍病在高溫高濕條件下易于流行發(fā)生的規(guī)律。10～35 ℃之間時菌株均可以產生分生孢子，最適產孢溫度為25 ℃，當溫度≤10 ℃或者≥35 ℃時，菌株不產孢。10～35 ℃之間孢子在均可以萌發(fā)，25 ℃為最適萌發(fā)溫度，當溫度≤10 ℃或者≥35 ℃時，孢子無法萌發(fā)，這與現(xiàn)場調查該病害在春夏季為危害高峰期的結果相一致；光照下粉紅粘帚霉菌絲生長緩慢，黑暗條件下菌絲生長最快，光暗交替下生長速率居中，同時光照會促進菌株提前產孢，但會抑制產孢量，且隨著光照時間的增長，孢子萌發(fā)率逐漸降低。可見林分郁閉度高，透光度較差時易于病害傳播，因此對發(fā)病的植株適當?shù)脑黾庸庹諒姸群凸庹諘r間可以抑制菌絲的生長和產孢量。以麥芽糖為碳源的培養(yǎng)基有利于菌株菌落的生長，可溶性淀粉有利于產孢。菌株在牛肉浸膏為氮源的培養(yǎng)基中菌落生長和產孢量均最大。對照在沒有氮源或者碳源時生長速率雖然快，但是菌絲在培養(yǎng)基上生長的十分稀薄，只有表面淺淺的一層菌絲，可能是由于菌絲吸收了局部的營養(yǎng)后快速擴展吸收其他區(qū)域的營養(yǎng)以維持生長所致，這也表明碳源和氮源都是菌絲生存所必需的物質，缺少其中一種元素菌株的長勢勢必會有所下降。

故在閩楠苗木培養(yǎng)時期，應注意播種密度，保證苗木通風度和見光度，科學合理的控制灌溉濕度，避免濕度過大，或者積水過多。營造閩楠林分時，合理密植，通風透光，控制林內溫濕度。還應提前做好病害防御，避免昆蟲抓傷或啃食樹皮造成損傷，從而增加病害發(fā)生概率，必要時可以采取提取噴施化學藥劑的措施，防止病害大規(guī)模爆發(fā)。此外，若發(fā)生病害，應科學處理病枝，防止病枝侵染健康樹木。因粉紅粘帚霉菌具有生防效果，后期研究可考慮將因其發(fā)病的病枝進行加工處理，作為生防藥劑，環(huán)保處理病枝的同時，變廢為寶，一則發(fā)酵可為植物提供營養(yǎng)，二則可以對由黃單胞桿菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo）引起的水稻白葉枯病以及金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）有較好的拮抗作用[16-18]。

參考文獻

[1] 李賢碧， 李昌權， 馮邦賢. 貴州思南縣楠木群落類型研究[J]. 種子， 2015， 34（6）： 57-60.

[2] 李 朗， 李 捷， 李錫文. 國產樟科楠屬五種植物之分類修訂[J]. 植物分類與資源學報， 2011， 33（2）： 157-160.

[3] 曾祥謂. 我國多功能森林經營中的珍貴樹種問題研究[D]. 北京： 中國林業(yè)科學研究院， 2010.

[4] 賈 賢， 黃秋生， 劉光華， 等. 我國楠木資源的研究現(xiàn)狀[J]. 中國園藝文摘， 2014， 30（10）： 55-59.

[5] 劉志雄， 費永俊. 我國楠木類種質資源現(xiàn)狀及保育對策[J]. 長江大學學報（自然科學版）， 2011， 8（5）： 221-223.

[6] 胡永顏. 不同坡位對21年生閩楠人工林生長及生物量分配的影響[J]. 江蘇林業(yè)科技， 2012， 39（4）： 6-8， 34.

[7] 任維儉， 溫鳴章， 肖順昌， 等. 楠木種皮精油化學成分的研究[J]. 天然產物研究與開發(fā)， 1990（3）： 59-62.

[8] 江香梅， 吳 晟， 楊剛華， 等. 楠屬主要樹種的資源狀況及研究、護存對策[J]. 江西林業(yè)科技， 2000（2）： 30-32.

[9] 吳興盛. 閩楠的生態(tài)特性及栽培技術[J]. 林業(yè)勘察設計. 2002（2）： 67-69.

[10] 唐建陽， 車建美， 劉 波， 等. 龍眼采后腐爛相關細菌與真菌的分離與鑒定[J]. 保鮮與加工， 2013， 13（5）： 9-14.

[11] 陳伶俐. 柴達木地區(qū)枸杞根腐病病原菌生物學特性及藥劑防治研究[D]. 西寧： 青海大學， 2015.

[12] 羅 萍. 梨儲藏期病害生防菌及防腐保鮮的研究[D]. 雅安： 四川農業(yè)大學， 2009.

[13] HolguinPe?a R J， HernándezMontiel L G， Latisnere H， et al. First report of a Bionectria sp. associated with a stem rot of cardon cactus （Pachycereus pringlei） in Baja California Sur， Mexico[J]. Plant Disease， 2012， 96： 292.

[14] 安歡樂. 甘肅省紫花苜蓿根腐病的病原研究[D]. 蘭州： 蘭州大學， 2016.

[15] 侯思雯. 甘肅高寒陰濕地區(qū)蠶豆苗期根腐病的研究[D]. 蘭州： 甘肅農業(yè)大學， 2011.

[16] 劉琴英， 蔣冬花， 齊育平， 等. 淡色生赤殼菌Bo-1菌株拮抗物質的分離純化、解析及活性分析[J]. 植物保護學報， 2014， 41（1）： 41-44.

[17] 趙 帥， 王永宏， 田義新， 等. 平貝母內生菌抑菌活性菌株篩選和鑒定[J]. 時珍國醫(yī)國藥， 2016， 27（7）： 1 736-1 738.

[18] 李丹陽， 鄧啟得， 雍明麗， 等. 稻曲病菌菌核降解微生物的篩選與作用機制分析[J]. 中國生物防治學報， 2016， 32（2）： 258-264.

[19] 謝 津， 李 靖， 黃 偉， 等. 云南榧內生放線菌FTY2的分子鑒定及其抑菌活性[J]. 貴州農業(yè)科學， 2015， 43（3）： 102-105.

[20] 曹晉忠， 鄭朝輝， 劉艷云， 等. 4個黃芩內生真菌菌株的鑒定及抗菌活性研究[J]. 安徽農業(yè)大學學報， 2011， 38（3）： 393-399.

[21] 王 騰， 逯 丹， 朱麗靜， 等. 板栗外生菌根中真菌的分離鑒定及其拮抗作用[J]. 北京農學院學報， 2017， 32（4）： 70-74.

[22] 管 斌， 徐 超， 張紅巖， 等. 紅葉石楠葉斑病病原菌分離鑒定及致病性測定研究[J]. 西部林業(yè)科學， 2013， 42（2）： 56-61.

[23] 陳全助， 郭文碩， 葉小真， 等. 福建省桉樹焦枯病菌分類鑒定[J]. 福建林學院學報， 2013， 33（2）： 176-182.

[24] 孫 華， 郭 寧， 石 潔， 等. 海南玉米穗腐病病原菌分離鑒定及優(yōu)勢種的遺傳多樣性分析[J]. 植物病理學報， 2017， 47（5）： 577-583.

[25] Glass N L， Donaldoson G C. Development of primer sets designed for use with the PCR to amplify conserved genes from filamentous ascomycetes[J]. Applied and Environmental Microbiology， 1995， 61（4）： 1 323-1 330.

[26] 陳玉璽， 張利平， 呂志堂. 10株鐮刀菌rDNA內轉錄間隔區(qū)（ITS）序列分析[J]. 安徽農業(yè)科學， 2008， 36（12）： 4 886-

4 887.

[27] 曲文文， 劉 霞， 楊克強， 等. 山東省危害核桃的鏈格孢屬真菌鑒定及其系統(tǒng)發(fā)育[J]. 植物保護報， 2012， 39（2）： 121-128.

[28] White T J， Bruns T， Lee S B， et al. Amplification and direct seauencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics[M]// Innis M A， Gelfand D H， Sninsky J J， et al. PCR Protocols：a guide to methods and applications. San Diego： Academic Press， 1990： 315-322.

[29] 方中達. 植病研究方法[M]. 第3版. 北京： 中國農業(yè)出版社， 1998.

[30] 陳全助， 陳慧潔， 郭文碩， 等. 桉樹焦枯病菌（Calonectria pseudoreteaudii）生物學特性測定[J]. 福建林學院學報， 2014， 34（4）： 328-332.

[31] 馬 瑜， 柯 楊， 王 琴， 等. 核桃潰瘍病癥狀及其病原菌鑒定[J]. 果樹學報， 2014， 31（3）： 443-447， 525.

[32] 劉琴英， 謝祥聰， 齊育平， 等. 抗水稻白葉枯病菌植物內生真菌的篩選、鑒定[J]. 微生物學雜志， 2013， 33（4）： 4-8.

[33] 張 陽， 劉正坪， 魏艷敏， 等. 北京昌平地區(qū)草莓根腐病菌種類鑒定[J]. 中國農學通報， 2015， 31（18）： 278-284.

[34] 莊文穎. 中國真菌志 第四十七卷： 叢赤殼科、生赤殼科[M]. 北京： 科學出版社， 2013.

[35] Vargas G S， Pastor S， March G J. Quantitative isolation of biocontrol agents Trichoderma spp.， Gliocladium spp. and actinomycetes from soil with culture media[J]. Microbiological Research， 2009， 164（2）： 196-205.

[36] Bienapfl J C， Floyd C M， Percich J A， et al. First report of Clonostachys rosea causing root rot of soybean in the United States[J]. Plant Disease， 2012， 96（11）： 1 700.

[37] 董 鮮， 馬曉惠， 陳傳嬌， 等. 三七根腐病尖孢鐮刀菌分離鑒定及致病作用研究[J]. 中藥材， 2018（1）： 8-12.

[38] 周 翠. 粉紅粘帚霉的形態(tài)特征及分子生物學鑒定[J]. 山東林業(yè)科技， 2017， 47（4）： 61-62， 73.