尖銳濕疣皮損中Brn?3α的表達及意義

汪小柳，劉志軍（南華大學附屬第一醫院皮膚科，湖南衡陽421001）

尖銳濕疣（CA）是人乳頭瘤病毒（HPV）感染人生殖器及附近表皮引起的皮膚、黏膜良性增生性疾病[1]，是臨床最常見的性傳播疾病之一[2]。目前，該病在治療方面尚無有效的抗病毒藥物，且多數治療為有創性療法，且疼痛大、復發率高[3]，皮損長期反復發作加之各種療法的不斷刺激還可能誘發癌變[4]。有關CA疣體的發生、發展、復發乃至惡變的機制仍不清楚。如何有效抑制疣體形成，減少復發，一直是困擾臨床醫生的難題，而進一步闡明CA的發病機制顯然是解決這一問題的關鍵。

Brn?3α 基因是 POU（Pit?Oct?Unc）轉錄因子家族成員之一[5]，在成人周圍和中樞神經系統特定區域高表達[6]。有研究表明，Brn?3α 能激活 HPV16、18 上游調控區域的表達，后者可激活HPV E6、E7致癌基因轉錄，可能在宮頸細胞早期惡化過程中發揮關鍵作用[7]。但Brn?3α是否與CA的發生、發展相關，目前尚無文獻報道。因此，本研究檢測了CA和正常皮膚組織中Brn?3α表達水平的變化，并探討了其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2017年1月本院門診或病房未接受過任何治療的CA患者皮損25例，并經組織病理學檢查證實。患者年齡18～50歲，平均（29.7±8.21）歲。正常皮膚組織取自同期在本院門診接受包皮環切術患者 20例，年齡 15～35歲，平均（28.30±7.88）歲。所有研究對象均簽署了本研究知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用免疫組織化學SP法。取CA患者皮損和正常皮膚組織以4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續切取5μm厚切片。石蠟切片按常規脫蠟至水、抗原修復、通透。再加用正常山羊血清在37℃水洛鍋中孵育20 min。最后按免疫組織化學試劑盒說明書常規進行免疫組織化學染色。抗Brn?3α抗體為l∶100。

1.2.2 判斷標準 免疫組織化學染色顯示有棕色或有棕色顆粒的細胞為陽性細胞。光鏡下觀察[在高倍鏡（400×）下隨機選取5個視野]計數陽性細胞數的平均百分比。定義0～5%為0分，＞5%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%～75%為3分，≥75%為4分；細胞染色強度判定：未染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；二者相乘所得總分小于或等于3分為陰性，＞3～6 分為弱陽性，＞6～9 分為陽性，＞9 分為強陽性。統計比較CA患者皮損和正常皮膚組織Brn?3α染色陽性率和染色強度。

1.3 統計學處理 應用SPSS13.0統計軟件進行數據處理，計量資料以±s表示，采用t檢驗；計數資料以率或構成比表示，采用 Kruskal?Wallis檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組研究對象Brn?3α蛋白表達陽性率比較 CA組患者皮損Brn?3α表達陽性率與對照組比較，差異無統計學意義（χ2=0.002，P=0.965）。見表1。

表1 兩組研究對象Brn?3α蛋白表達陽性率比較

2.2 兩組研究對象Brn?3α表達強度比較 兩組研究對象Brn?3α均表達于細胞膜、細胞質中。見圖1。CA組患者皮損Brn?3α表達水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（T=167.5，P=0.0068）。見表2。

圖1 兩組研究對象Brn?3α表達比較（免疫組織化學，400×）

表2 兩組研究對象Brn?3α表達強度比較

3 討 論

CA是一種臨床常見性傳播疾病，增生快、復發率高，臨床治療較棘手[7?9]。由于皮損長期反復發作及各種療法不斷刺激，甚至有可能誘發癌變，如宮頸癌[10?11]。

有研究發現，CA的發生是一個極其復雜的多基因調控異常的過程，不僅與細胞異常增殖有關，還涉及細胞異常凋亡[12?13]。多種基因參與了調控細胞的增殖、分化與凋亡，其中Brn?3α基因是參與細胞調控的重要基因，在人類宮頸細胞中，Brn?3α發揮激活編碼HPV E6、E7蛋白基因轉錄的作用，在宮頸轉化過程中發揮著關鍵作用。

Brn?3α是一種細胞轉錄因子，屬于POU家族。POU家族有一段結合DNA的區域，稱為POU結構域。Brn?3α屬POU家族轉錄因子第Ⅳ亞類。其POU結構域具有高度保守的DNA序列，氨基酸序列有95%同源[14]。

既往對Brn?3α的研究主要集中于神經系統，Brn?3α主要表達于周圍神經系統的神經元亞群中，主要參與神經元生存和分化相關基因的激活[5]。近年來，有研究發現，Brn?3α在宮頸涂片中容易測得，且與宮頸病變級別明顯相關。Brn?3a在原位癌Ⅲ級患者宮頸活檢組織中表達水平升高，可作為HPV致癌基因轉錄活化的生物標志物[15]。

本研究結果顯示，作為宮頸癌的癌前病變，CA的發生也與Brn?3α異常表達相關。Brn?3α在正常皮膚的基底層細胞和CA疣體細胞中均有表達，二者表達陽性率分別為 80%、84%，差異無統計學意義（P＞0.05）。然而，CA 組患者皮損Brn?3α表達水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。因此，檢測Brn?3α在CA損害中的表達水平可作為臨床篩查和CA隨訪的輔助工具，也有望成為治療宮頸病變的靶點。因此，Brn?3α在CA病變過程中的具體作用及其在診治中的應用尚有待于進一步研究。

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