FOXP 1在彌漫性大 B細胞淋巴瘤患者體內表達及其臨床意義分析

安冬穎，于軒，李文華，王一凡

朝陽市第二醫院1血液內科，2檢驗科，遼寧朝陽1220000

彌漫性大B細胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤的常見類型，臨床主要表現為侵襲性和中高度惡性，病情發展迅速，嚴重威脅患者健康[1]。DLBCL主要發生于淋巴結內，部分病灶發生于淋巴結外，結外病灶常見于胃腸道、骨和中樞神經系統[2]。DLBCL初期患者常出現快速生長的淋巴結，同時伴有發熱、盜汗和消瘦等癥狀。目前，臨床主要采用基因和蛋白質檢測的方法進行DLBCL的診斷和預后，其中腫瘤標志物對DLBCL診斷有重要的意義[3]。FOXP1是FOXP亞家族轉錄因子成員，FOXP1蛋白是一種轉錄因子，與胚胎正常發育、心肌細胞發育、人類及禽類語言形成等有密切的關系，同時與乳腺癌、子宮內膜癌、卵巢癌和結腸癌等相關[4]。目前，FOXP1與DLBCL關系的研究報道較少，本研究將DLBCL患者與健康人體內的FOXP1水平進行分析，探討DLBCL患者血清FOXP1的表達情況及其對DLBCL患者預后的影響，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2014年6月至2017年6月于朝陽市第二醫院接受治療的80例DLBCL患者（觀察組）和80例同期體檢的健康成年人（對照組）。觀察組患者的納入標準：①年齡≥18歲；②經骨穿刺等檢查確診為DLBCL；③無其他血液系統疾病；④對本研究知情同意。排除標準：①病歷資料不全；②不愿參與本研究；③合并其他系統嚴重疾病。對照組受試者需滿足：年齡≥18歲，對本研究知情同意，無免疫和血液系統等嚴重疾病。觀察組80例患者中，男48例，女32例；年齡32～78歲，平均（50.36±5.27）歲；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期50例。對照組80例受試者中，男40例，女40例；年齡35～78歲，平均（50.32±6.03）歲。兩組受試者的年齡和性別等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經朝陽市第二醫院倫理委員會評審通過。

1.2 檢測指標與方法

兩組受試者血清FOXP1均采用免疫組化法進行檢測。采用酶聯免疫吸附測定法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）檢測C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）細胞因子水平。

1.2.1 免疫組化法 將組織標本固定，石蠟包埋、切片，常規脫蠟10 min、2次，在95%、75%、50%的乙醇溶液中各水化5 min。3%過氧化氫溶液阻斷內源性過氧化物酶，三乙醇胺緩沖鹽水溶液（tris buffered saline，TBS）緩沖液沖洗，枸櫞酸緩沖液抗原熱修復3 min，一抗4℃過夜。取出后置于37℃恒溫箱中復溫45 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗5 min、3次，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）染色，蘇木精復染。FOXP1抗體（武漢博士德生物工程有限公司）按照1∶75稀釋，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 ELISA法 取受試者空腹靜脈血2 ml，乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）抗凝，離心提取血漿，-20℃冷藏箱保存，按照CRPELISA試劑盒（上海藍基生物科技有限公司）操作步驟進行檢測。

1.3 統計學方法

SPSS 11.5統計軟件分析數據，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗；采用Logistic回歸分析法分析影響DLBCL患者FOXP1表達的因素，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組FOXP 1陽性表達率比較

觀察組患者FOXP1陽性表達率為72.5%（58/80），明顯高于對照組受試者的20.0%（16/80），差異有統計學意義（χ2=46.582，P＜0.01）。

2.2 觀察組FOXP 1表達與臨床特征的關系

觀察組臨床特征中年齡≥65歲、Ⅲ+Ⅳ期、CRP≥10 U/L、淋巴瘤國際預后指數（international prognostic index，IPI）高危、有癥狀的患者FOXP1表達陽性率明顯高于年齡＜65歲、Ⅰ～Ⅱ期、CRP＜10 U/L、IPI中低危、無癥狀的患者，差異均有統計學意義（P＜0.01），而不同性別患者的FOXP1表達比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。（表1）

表1 觀察組80例患者FOXP 1表達與臨床特征的關系

2.3 觀察組FOXP 1表達的影響因素分析

將單因素分析有意義的年齡、臨床分期、CRP、IPI是否高危、有無癥狀作為自變量，將DLBCL患者FOXP1陽性表達作為因變量，進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示臨床分期Ⅲ+Ⅳ期和IPI高危為FOXP1表達的影響因素（OR=4.416、4.879，P＜0.01）。（表 2）

表2 觀察組患者FOXP 1表達的影響因素分析

3 討論

DLBCL是一類在臨床表現、組織形態和預后方面具有異質性的淋巴瘤，在中老年人群中比較常見[5-6]。DLBCL發病部位可分為淋巴結內和淋巴結外的器官組織，淋巴結內DLBCL患者的臨床癥狀表現為淋巴結進行性腫大，隨著病情加重DLBCL發生擴散，具有侵襲性；淋巴結外DLBCL涉及的器官和組織較多，因此生物學行為和臨床癥狀比較復雜，但主要表現為組織器官存在迅速增大的腫塊，并伴有一定的癥狀出現。

目前，Ⅰ～Ⅱ期DLBCL患者采用放化療及其他綜合治療，Ⅲ～Ⅳ期主要采用化療。常用的化療藥物包括環磷酰胺、氮芥和甲基芐肼等烷化劑，綜合治療的原理和優勢在于全身化療可以有效地控制遠處器官亞臨床轉移，而放療可以有效地控制局部復發，治療后約50%的DLBCL患者可治愈[7-10]；但仍有部分患者治療效果差或治愈后易復發，因此選擇靈敏準確的分子標志物，識別預后不良的高危患者，對DLBCL患者的治療和預后有重要的意義。然而，目前尚無明確的預后分子標志物[11-16]。國內外研究報道顯示，FOXP1在多種腫瘤組織中高表達，可以作為腫瘤預后的不良指標[17]。FOXP1是FOXP亞家族的成員之一，其在B淋巴細胞的不同時期均有表達，但在漿細胞中不表達[18-21]。有研究表明，在細胞、組織和器官發育的不同時期FOXP1表達或沉默，可以維持或影響機體的不同生理狀態，若這個機制被破壞，機體的正常功能發生紊亂，FOXP1表達異常時，B淋巴細胞分化和成熟受到影響，容易產生B細胞淋巴瘤[22]。但是，目前有關FOXP1與DLBCL相關性以及DLBCL預后中FOXP1作用的研究報道較少。

本研究將DLBCL患者與健康受試者的血清FOXP1表達水平進行對比分析，DLBCL患者的FOXP1陽性表達率明顯高于健康受試者，差異有統計學意義（P＜0.01）。這個結果說明FOXP1可能參與了DLBCL病情發展。已有研究表明，FOXP1陽性表達率越高，腫瘤患者年齡越大、分期越晚、CRP水平越高、IPI高危概率越大[22]。本研究通過對不同臨床特征DLBCL患者的血清FOXP1表達水平比較顯示，年齡≥65歲、Ⅲ+Ⅳ期、CRP≥10 U/L、IPI高危、有癥狀的DLBCL患者FOXP1表達陽性率明顯高于年齡＜65歲、Ⅰ+Ⅱ期、CRP＜10 U/L、IPI中低危、無癥狀者，差異有統計學意義（P＜0.01）。這個結果說明可以通過檢測DLBCL患者的FOXP1表達水平制定臨床治療方案，同時FOXP1表達水平也可以作為評估患者的病情和治療效果的重要指標。本研究分析了DLBCL患者血清FOXP1表達水平的影響因素，臨床分期Ⅲ+Ⅳ期和IPI高危的OR值分別為4.416、4.879，P＜0.01，說明兩者均與FOXP1陽性表達密切相關。

本研究的創新之處是將FOXP1作為DLBCL的分子標志物，研究FOXP1在DLBCL患者體內表達及臨床意義，彌補了以往臨床研究對DLBCL患者分子標志物的空缺。但本研究選取人數較少且范圍較窄，會對研究結果產生一定的影響，需要在后續研究中擴大研究對象的數量和范圍進一步驗證。

綜上所述，DLBCL患者血清FOXP1表達水平較高，且與臨床分期情況、IPI是否高危有關。

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