乳腺癌患者核基質結合區結合蛋白 1和核因子相關蛋白κ B的表達水平及其相關性分析

趙莉娟，白中紅，許軟成

解放軍第九十一中心醫院腫瘤科，河南焦作4540030

乳腺癌是指乳腺上皮組織發生的惡性腫瘤。乳腺癌患者中99%為女性，1%為男性。乳腺癌約占女性常見惡性腫瘤的23%，占女性癌癥死亡例數的14%[1]。中國乳腺癌的發病率目前呈逐年上升趨勢[2]。目前乳腺癌的早期診斷和治療雖已取得較大進展，但仍有50%的患者死于乳腺癌。因此，深入研究乳腺癌的發生仍具有重大價值。核基質結合區結合蛋白1（special AT-rich sequence binding protein 1，SATB1）和核轉錄因子-κB p65（nuclear transcription factorr-kappa B p65，NF-κB p65）均參與乳腺癌的發生、發展。目前雖已分別報道了乳腺組織中SATB1和NF-κB p65的表達，但是未同時檢測二者在乳腺癌組織中的表達，未闡明二者之間的關系。

SATB1是一種組織特異性表達的核基質附著區結合蛋白[3]，表達于胸腺細胞[4]。SATB1是乳腺癌轉移機制中的關鍵蛋白[5]。SATB1促使乳腺癌細胞獲得侵襲性表型，促進乳腺癌生長與轉移[6]。張英等[7]采用免疫組織化學法和實時熒光定量PCR（quantificational real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）法發現SATB1蛋白及其mRNA表達水平增高與乳腺癌的發生、侵襲和轉移密切相關。以上研究說明SATB1是乳腺癌生長和轉移中的重要調節因子。NF-κB p65在細胞內信號調控方面發揮關鍵作用，在腫瘤組織中呈活化狀態時，參與調節腫瘤細胞的生長、增殖及浸潤轉移等過程[8]。在乳腺癌中，NF-κB p65參與乳腺癌的發生、發展[9-10]。本研究通過免疫組織化學法同時檢測乳腺癌組織中SATB1和NF-κB p65蛋白表達，分析二者的關系，并結合乳腺癌患者的臨床特征，探討SATB1和NF-κB p65在乳腺癌發生和轉移中的重要作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月至2012年12月解放軍第九十一中心醫院手術切除的80例乳腺癌患者的乳腺標本，均取癌組織及對應癌旁組織（距腫瘤邊緣2 cm）。患者年齡20～76歲，中位年齡47歲；患者術前均未進行任何抗癌治療，所有病例均進行術后隨訪1～5年，采用國際抗癌聯盟（UICC）2003版進行腫瘤TNM分期，根據Patley和Scarff法劃分腫瘤組織級別[11]。

1.2 免疫組化法及評價標準

采用免疫組織化學法檢測SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中的表達。SATB1濃縮型兔抗人多克隆抗體及NF-κB p65濃縮型鼠抗人單克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司，抗體稀釋濃度均為1∶100。即用型SABC免疫組化試劑盒購自武漢博士德有限公司，根據試劑盒說明書開展實驗。采用DAB染色試劑盒染色，每批染色均設陽性對照和陰性對照。

采用雙盲法觀察每張切片。按切片中癌細胞染色強度計分：淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；同時按切片中陽性細胞數所占百分比計分：陰性為0分，陽性細胞百分比≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度與陽性細胞百分比得分的乘積≥3分為免疫反應陽性。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，采用Spearman法分析SATB1和NF-κB p65蛋白表達的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化結果

SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中顯著表達，且定位于細胞核及細胞質，呈棕黃色顆粒，詳見圖1。80例乳腺癌組織中SATB1陽性表達56例，陽性表達率為70.00%；80例乳腺癌組織中NF-κB p65陽性表達45例，陽性表達率為56.25%。

2.2 SATB 1和NF- κB p65表達與乳腺癌臨床特征的關系

圖1 乳腺癌組織和癌旁良性乳腺組織中SATB 1和NF- κ Bp65的表達（DAB染色，×200）

SATB1和NF-κB p65的陽性表達與腫瘤大小、組織學分級、ER受體狀態和腋窩淋巴結轉移有關，與年齡和TNM分期無關。腫瘤越小，組織中SATB1和NF-κB p65陽性表達例數越多；與組織學分級為Ⅲ級的乳腺癌組織相比，Ⅰ～Ⅱ級的乳腺癌組織中SATB1和NF-κB p65陽性表達例數較多；ER陽性組織中SATB1和NF-κB p65的陽性表達例數高于ER陰性組織；出現淋巴結轉移的乳腺癌組織中SATB1和NF-κB p65的陽性表達例數少于未出現淋巴結轉移的乳腺癌組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

2.3 SATB 1和NF- κB p65在乳腺癌組織中表達的相關性

在乳腺癌組織中，56例陽性表達SATB1的樣本中，有38例NF-κB p65表達陽性，24例陰性表達SATB1的樣本中，有7例NF-κB p65表達陽性。經Spearman相關性分析，SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中的表達呈正相關（r=0.357，P=0.001）。（表2）

3 討論

SATB1和NF-κB p65是乳腺癌發生中重要的調節因子。SATB1為一種特異性核基質結合區結合蛋白。NF-κB p65存在于細胞質中，以p50/p65異二聚體形式特異性結合免疫球蛋白的輕鏈基因增強子κB序列。SATB1參與調節乳腺癌發生相關的1000余個基因[5]，上調參與細胞轉移的基因，下調抑癌基因，從而改變乳腺癌細胞的基因表達譜。Ordinario等[12]發現SATB1促使非惡性乳腺上皮細胞株惡性化，而沉默具備侵襲轉移特性的乳腺癌細胞MDA-MB-231中SATB1的表達，可以改變其侵襲表型并抑制腫瘤生長。涂剛等[13]采用Western blot法和凝膠電泳遷移率法發現乳腺癌組織中 NF-κB p65蛋白表達水平及 NF-κB p65的DNA結合活性均明顯高于癌旁組織。盧勇[14]采用免疫組織化學法發現NF-κB p65在乳腺癌組織的表達水平顯著高于乳腺良性組織。姚志強等[15]采用免疫組織化學法發現NF-κB p65在乳腺癌組織、癌旁乳腺組織、乳腺增生組織中表達的陽性率分別為42.4%、13.6%、7.14%。韓中保等[16]采用免疫組織化學法發現NF-κB在乳腺癌和乳腺導管內癌中的陽性表達率與正常乳腺組織有明顯差異。以上研究說明NF-κB p65是乳腺癌生長和轉移中的重要調節因子。Biswas等[17]證實了NF-κB在乳腺癌形成中的促細胞增殖作用。研究發現NF-κB p65可能通過調控與細胞增殖、抗凋亡、血管生成和轉移的相關基因，加快腫瘤的惡性化[18]。進一步研究發現NF-κB p65的組成型激活與致瘤性轉化有關[19]。Hou等[20]的研究結果表明NF-κB活化能夠促進乳腺癌細胞的轉化和遷移。本研究同時檢測了SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中的表達，SATB1和NF-κB p65的表達與腫瘤大小、組織學分級、ER受體狀態和腋窩淋巴結轉移有關，與年齡和TNM分期無關。經Spearman相關性分析，SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中的表達呈顯著正相關。以上結果提示SATB1和NF-κB p65在乳腺癌的發生中具有相關性，調節癌癥的發生。

表1 乳腺癌組織中SATB 1和NF-κ B p65表達與乳腺癌臨床特征的關系

表2 乳腺癌組織中SATB 1和NF-κ B p65表達的關系

通過泛素化、乙酰化和磷酸化修飾，SATB1可調節其DNA結合能力和細胞核內亞結構的定位，SATB1通過與多種蛋白相互作用，募集組蛋白修飾酶和染色質重塑復合物，參與組蛋白乙酰化、染色體重塑和甲基化等過程，并且與脫氧核糖核酸酶Ⅰ超敏感位點具有密切的相關性[20-21]。通過以上作用，SATB1特異性調控目標基因的表達，進一步調節癌細胞的生長、分化、凋亡與轉移。這可能是SATB1在乳腺癌中發揮作用的機制。當受到外源性刺激時，NF-κB則由細胞質中轉移至細胞核內發揮功能[22]。NF-κB p65在受到適宜刺激或存在組成型表達時，在細胞質中與其抑制劑IKB分離，p65/p50轉位至細胞核，調控其下游基因的表達，從而調節癌細胞生長分化相關通路。通過統計學分析發現SATB1和NF-κB p65呈正相關，說明二者在癌癥發生中協同發揮作用。SATB1屬于上游調控因子，而NF-κB p65是核內信號調控的主要因子。因此，SATB1發出的調節信號，進入核內后會激活NF-κB p65，從而使調節信號到達核內，發揮作用。

綜上所述，SATB1和NF-κB p65在乳腺癌中的表達與腫瘤大小、組織學分級、ER受體狀態和腋窩淋巴結轉移有關，且二者顯著相關。

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