C-met蛋白在食管癌組織中的表達及其與臨床特征的關系

陳焱，宋小平，湯小虎，葉博

1北京新里程腫瘤醫院有限公司外科，北京 100169

2清華大學第一附屬醫院胸外科，北京 100081

食管癌是消化系統高發腫瘤之一，全世界每年約有30萬人死于本病。中國是食管癌高發區，年均死亡例數約10萬，并且男性患者多于女性，年齡集中于40歲以下[1]。臨床尚未明確食管癌發病機制，但已有研究證實，癌基因的活化、表達與本病密切相關[2]。肝細胞生長因子受體（C-met）蛋白是一種具有自主磷酸化活性的蛋白，是由一個α亞基和一個β亞基組成的異二聚體[3]。研究顯示，正常細胞的C-met表達情況與腫瘤細胞的C-met表達情況存在顯著差異，提示C-met可能參與了腫瘤的發生發展[4-5]。為探究C-met蛋白在食管癌組織中的表達及其與臨床特征的關系，本研究選取80例食管癌組織標本及其癌旁組織標本進行了如下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2017年3月北京新里程腫瘤醫院手術后獲取的80例食管癌組織標本及其癌旁組織標本。納入標準：①經病理學診斷確診為食管癌；②符合第7版食管癌TNM分期標準[6]；③患者年齡﹤80歲；④在北京新里程腫瘤醫院實施外科手術治療，術中成功獲取食管癌組織標本及癌旁組織標本。排除標準：①手術前已經實施放化療；②合并其他部位惡性腫瘤；③患者各項臨床、病理學資料不詳。80例患者中，男47例，女33例；年齡38～77歲，平均（55.7±10.0）歲；病灶直徑﹥3 cm 50例，≤3 cm 30例；大體分型：浸潤型11例，潰瘍型33例，髓質型26例，蕈傘型10例；病變部位：食管上段14例，食管中段46例，食管下段20例；分化程度：高分化18例，中分化22例，低分化40例；TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期31例，Ⅲ期22例，Ⅳ期9例；發生淋巴結轉移53例，未發生淋巴結轉移27例。

1.2 免疫組化檢測方法

將樣本連續切片后，進行免疫組化檢測。將切片脫蠟至水，10 ml 3%過氧化氫封閉，8 ml檸檬酸緩沖液進行抗原修復操作，反應5 min，選用10%羊血清封閉10 min，加入一抗，4℃孵育過夜，取出后復溫30 min，加入二抗，反應30 min，磷酸鹽緩沖液洗滌，脫水封片，鏡檢。

1.3 判定標準

免疫組化結果判定：C-met蛋白的陽性表達著色于細胞質，呈黃色、棕黃色、褐色。①根據著色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐色、黑色為3分；②根據陽性細胞比例：陽性細胞所占比例≤10%為1分，陽性細胞所占比例11%～50%為2分，陽性細胞所占比例51%～75%為3分，陽性細胞所占比例＞75%為4分。兩種評分相乘總分﹤3分為“－”，3～5分為“+”，6～9分為“++”，﹥9分為“+++”；﹤3分為陰性，≥3分為陽性[6]。

1.4 統計學方法

采用SPSS 16.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）進行統計描述；計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；以P﹤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 C-met蛋白陽性表達率的比較

食管癌組織中C-met蛋白陽性表達率為80.00%（64/80），高于癌旁組織的6.25%（5/80），差異有統計學意義（χ2=88.702，P﹤0.05）。（表1、圖1）

表1 兩種組織標本中C-met蛋白的表達情況

圖1 食管癌組織及癌旁組織中C-met蛋白陽性表達（免疫組化染色，×200）

2.2 食管癌組織中C-met蛋白陽性表達與患者臨床特征的關系

TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、浸潤深度為T3～4期、發生淋巴結轉移的食管癌患者的C-met蛋白陽性表達率高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、浸潤深度為T1～2期、未發生淋巴結轉移的食管癌患者（P﹤0.05）；不同年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、病灶直徑的食管癌患者C-met蛋白陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）。（表2）

表2 食管癌組織中C-met蛋白陽性表達與患者臨床特征的關系[n（%）]

3 討論

C-met是原癌基因編碼的肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）受體，具有編碼酪氨酸激酶活性，主要表達于各種上皮細胞內，可調節腫瘤細胞侵襲性[7]。C-met與HGF可直接作用內皮細胞，促使其增殖、遷移，還可通過增強血管生成因子的表達來增加血管生成[8]。相關研究已經證實，腫瘤細胞可通過釋放白細胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、成纖維細胞生長因子（fibroblast growth factor，FGF）以及血源性單核細胞分泌生長因子等來刺激鄰近成纖維細胞，促進HGF、C-met表達并形成正反饋，導致腫瘤的生長、侵襲[9]。突變型C-met轉染NIH3T3細胞后，NIH3T3細胞轉化率大幅增高，提示C-met基因可通過促進NIH3T3細胞轉化來促進腫瘤形成[10]。C-met除與HGF相互結合形成生物效應外，還可借助非HGF途徑激活，尤其是met過度表達的腫瘤細胞內，C-met基因擴增可促進酪氨酸激酶激活，并促進細胞惡性轉化。部分已有的研究探討了C-met蛋白在食管癌組織中的異常表達，認為高表達的C-met蛋白是促進食管癌病情進展的重要因素。

本研究中，食管癌組織中的C-met蛋白陽性表達率為80.00%，高于癌旁組織的6.25%，差異有統計學意義，提示C-met蛋白是食管癌的重要參與因子。已有研究表明，通過激活的RET及RAS基因轉染腫瘤細胞，可促使C-met過度表達，并增強HGF依賴性的腫瘤侵襲能力[11]。還有研究發現，轉染C-met基因可增強癌細胞的增殖速度，并提高C-met水平，促進癌細胞的HGF敏感性，同時增強癌細胞侵襲性[12]。本研究中，TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、浸潤深度為T3～4期、發生淋巴結轉移的食管癌患者的C-met蛋白陽性表達率高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、浸潤深度為T1～2期、未發生淋巴結轉移的食管癌患者，這表明C-met與食管癌的侵襲性密切相關，佐證了前述結論，提示C-met或可成為食管癌分期、浸潤以及轉移與否的檢測標志物。C-met蛋白作用于食管癌發生發展的機制臨床尚未明確，但可能與以下幾點有關：①侵襲細胞C-met激活后，細胞外基質將隨之降解，細胞外基質蛋白水解相關分子及受體表達水平升高，腫瘤細胞侵襲能力增強[13]。②C-met與HGF結合后將激活結腸癌轉移相關基因MACC1，而MACC1可與C-met啟動子SPI位點結合，并促使其轉錄。MACC1還具有促進腫瘤細胞外基質降解，調節細胞骨架結構等能力[14]。有研究發現，C-met表達與食管癌患者預后有關，提示C-met可進一步增強腫瘤細胞的惡性潛能，提高其活性及侵襲性[15]。本研究還發現，不同年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、病灶直徑的食管癌患者C-met蛋白陽性表達率比較，差異無統計學意義，表明C-met蛋白水平與年齡、性別等因素無關。

本研究對80例食管癌組織標本及其癌旁組織標本內的C-met蛋白陽性表達情況進行了檢測，發現食管癌組織中的C-met蛋白陽性表達率升高，并且與腫瘤臨床分期、浸潤深度、淋巴結轉移有關，提示C-met或可作為食管癌分期、浸潤以及淋巴結轉移與否的檢測指標。

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