浙南地區(qū)血液核酸集中化檢測(cè)篩查數(shù)據(jù)回顧性分析

黃國(guó)永 張鋒 林碧 蔡淑鋒 朱紫苗 劉燕飛 葉崢嶸

325001 溫州市中心血站

血液核酸檢測(cè)(nucleic acid test, NAT)作為一種新的血液篩查技術(shù)，能有效彌補(bǔ)血清學(xué)檢測(cè)窗口期長(zhǎng)、病毒變異、隱匿性感染、免疫靜默等造成的漏檢問(wèn)題。有資料顯示[1-3]，在目前ELISA檢測(cè)的水平下，通過(guò)增加核酸檢測(cè)，可以將乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV-1，HIV-2)平均窗口期由50、72、22 d縮短至25、59、11 d。因此，核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)是保障血液安全的有效措施，是推進(jìn)血液篩查技術(shù)不斷完善的有效手段。歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家于上世紀(jì)末就將核酸檢測(cè)納入到常規(guī)血液篩查中并率先實(shí)現(xiàn)了集中化檢測(cè)。浙江省于2016年在全國(guó)率先開展血液核酸區(qū)域集中化檢測(cè)，溫州市中心血站承擔(dān)了溫州、臺(tái)州和麗水3地(浙南地區(qū))的血液核酸檢測(cè)工作。本文通過(guò)對(duì)浙南地區(qū)179 369人次無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本血清學(xué)和核酸篩查數(shù)據(jù)的回顧性分析，探討核酸檢測(cè)是否能有效彌補(bǔ)血清學(xué)檢測(cè)的漏檢，保障血液的安全。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源選取溫州、臺(tái)州、麗水2016年1～12月自愿無(wú)償獻(xiàn)血179 369人次，獻(xiàn)血前經(jīng)健康征詢、一般檢查以及初篩檢測(cè)合格。留取樣本于帶分離膠的EDTA-K2抗凝真空采血管中，用于核酸檢測(cè)。

1.2儀器和試劑

1.2.1 儀器：HAMILTON Microlab STAR自動(dòng)混樣儀、Cobas Ampliprep核酸分離純化提取儀、Cobas TaqMan擴(kuò)增檢測(cè)儀(羅氏診斷產(chǎn)品有限公司)；ChiTaS BSS1200核酸提取分析儀(上海浩源生物科技有限公司)、ABI 7500基因擴(kuò)增儀(美國(guó)ABI公司)。

1.2.2 核酸檢測(cè)試劑：羅氏診斷產(chǎn)品有限公司，批號(hào)193607、203640、210761、219656；上海浩源生物科技有限公司，批號(hào) MF20160101、MF20160103。

1.3方法

1.3.1 篩查策略：HIV、HBV、HCV感染性標(biāo)志物采用2遍血清學(xué)檢測(cè)和1遍核酸檢測(cè)，采用血清學(xué)、核酸檢測(cè)同步進(jìn)行以及先進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，剔除血清學(xué)陽(yáng)性樣本，再進(jìn)行核酸檢測(cè)兩種篩查策略相結(jié)合的方式。

1.3.2 血清學(xué)檢測(cè)：采用2種不同廠家試劑進(jìn)行檢測(cè)，2種試劑均有反應(yīng)性，報(bào)告血清學(xué)檢測(cè)雙試劑陽(yáng)性；2種試劑均無(wú)反應(yīng)性，報(bào)告血清學(xué)檢測(cè)陰性；任一試劑有反應(yīng)性，進(jìn)行雙孔復(fù)試，雙孔復(fù)試均有反應(yīng)性或單孔有反應(yīng)性均報(bào)告血清學(xué)檢測(cè)單試劑陽(yáng)性。

1.3.3 核酸檢測(cè)：先進(jìn)行6或8人份聯(lián)合HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA混樣檢測(cè)，混樣檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性，報(bào)告核酸檢測(cè)陰性；混樣檢測(cè)有反應(yīng)性，進(jìn)行單人份拆分檢測(cè)，拆分檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性，報(bào)告核酸檢測(cè)陰性，拆分檢測(cè)有反應(yīng)性，報(bào)告核酸檢測(cè)陽(yáng)性，給出陽(yáng)性項(xiàng)目及CT值。羅氏核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)為常規(guī)檢測(cè)，浩源核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)為應(yīng)急檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1標(biāo)本檢測(cè)量完成核酸標(biāo)本檢測(cè)179 369人次，其中溫州地區(qū)92 962人次，臺(tái)州地區(qū)52 280人次，麗水地區(qū)34 127人次。其中羅氏分析系統(tǒng)檢測(cè)數(shù)162 209人次，浩源分析系統(tǒng)檢測(cè)數(shù)17 160人次(僅于2016年1～3月應(yīng)急檢測(cè))，各月標(biāo)本檢測(cè)量詳見圖1。

圖1 浙南地區(qū)2016年各月核酸標(biāo)本檢測(cè)量Fig.1 Numbers of nucleic acid specimens each month in 2016 in south Zhejiang province

2.2NAT陽(yáng)性率全年共檢出259例ELISA-/NAT+樣本，陽(yáng)性率為0.14%。其中HBV-DNA+255例，HCV-RNA+5例，其中1例HBV-DNA重HCV-RNA+。各地區(qū)NAT陽(yáng)性率見圖2。

圖2 浙南地區(qū)2016年核酸檢測(cè)檢測(cè)陽(yáng)性率Fig.2 The positive rate of the nucleicacid tests in south Zhejiang province

2.3混檢陽(yáng)性率羅氏核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)全年完成有效pooling數(shù)27 445個(gè)，387個(gè)pooling混檢陽(yáng)性，混檢陽(yáng)性率為1.40%。浩源核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)全年完成有效pooling數(shù)2 210個(gè)，36個(gè)pooling混檢陽(yáng)性，混檢陽(yáng)性率為1.63%。

2.4拆分陽(yáng)性率羅氏核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)全年混檢陽(yáng)性pooling數(shù)387個(gè)，拆分陽(yáng)性數(shù)235個(gè)，拆分陽(yáng)性率為60.72%。浩源核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)全年混檢陽(yáng)性pooling數(shù)36個(gè)，拆分陽(yáng)性數(shù)15個(gè)，拆分陽(yáng)性率為41.67%。

3 討論

NAT已成為避免血清學(xué)漏檢的有效手段[4-5]，但是NAT設(shè)備價(jià)格昂貴、試劑成本高、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人員要求苛刻，制約了該項(xiàng)技術(shù)在基層血站的推廣。通過(guò)區(qū)域性集中化檢測(cè)模式，在全省范圍內(nèi)設(shè)立幾個(gè)有能力開展集中化檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室委托其檢測(cè)，可有效提升血液篩查效率、提高血站管理水平、提升血液檢測(cè)質(zhì)量，同時(shí)有利于促進(jìn)血液檢測(cè)新技術(shù)的引進(jìn)[6]。

血清學(xué)檢測(cè)由于方法學(xué)本身的局限，已不能滿足人們對(duì)血液安全的要求。核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)可以彌補(bǔ)血清學(xué)檢測(cè)的不足，有效降低輸血相關(guān)傳染性疾病的傳播風(fēng)險(xiǎn)，在采供血機(jī)構(gòu)正逐步推廣并體現(xiàn)優(yōu)勢(shì)。從浙南地區(qū)全年179 369人次血清學(xué)、核酸聯(lián)合篩查數(shù)據(jù)看，采供血機(jī)構(gòu)在現(xiàn)有的2遍ELISA檢測(cè)過(guò)程中，如果不開展NAT檢測(cè)，將會(huì)使這部分病毒陽(yáng)性血液發(fā)往臨床，這對(duì)用血安全帶來(lái)了極大的負(fù)面影響，也充分說(shuō)明NAT是提高輸血安全的有效手段?？傮wNAT陽(yáng)性率為0.144%，高于西安地區(qū)的0. 066%[7]和烏魯木齊地區(qū)的0. 11%[8],低于襄陽(yáng)地區(qū)的0. 155%[9]和南昌地區(qū)的0.24%[10]。臺(tái)州地區(qū)在血清學(xué)檢測(cè)過(guò)程中未對(duì)灰區(qū)進(jìn)行設(shè)置，部分ELISA處于灰區(qū)而NAT陽(yáng)性標(biāo)本計(jì)算入內(nèi)，這可能是其陽(yáng)性率高于溫州、麗水地區(qū)的原因之一?；鞓雨?yáng)性率、拆分陽(yáng)性率是監(jiān)控分析系統(tǒng)運(yùn)行狀況是否良好的質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)。一旦指標(biāo)出現(xiàn)異常，需從實(shí)驗(yàn)室人員、環(huán)境、檢測(cè)系統(tǒng)、試劑等方面查找原因，及時(shí)消除異常因素干擾，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠?？傮w而言，全年NAT檢測(cè)系統(tǒng)運(yùn)行平穩(wěn)。

浙南地區(qū)核酸集中化檢測(cè)模式運(yùn)行平穩(wěn)，有效降低了輸血風(fēng)險(xiǎn)，保障了地區(qū)的血液安全。各血站可針對(duì)本地區(qū)疾病流行特點(diǎn)、經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、血站規(guī)模、交通條件等因素，選擇適合自身的血液篩查方式或委托檢測(cè)方式，因地制宜，更好的保障血液的安全，促進(jìn)無(wú)償獻(xiàn)血事業(yè)的健康發(fā)展。

利益沖突：無(wú)

參考文獻(xiàn)

[1] Zou S, Dorsey KA, Notari EP, et al. Prevalence, incidence, and residual risk of human immunodeficiency virus and hepatitis C virus infections among United States blood donors since the introduction of nucleic acid testing[J]. Transfusion, 2010, 50(7):1495-1504. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2010.02622.x.

[2] AI Shaer L, AbdulRahman M, John TJ, et al. Trends in prevalence, incidence, and residual risk of major transfusion-transmissible viral infections in United Arab Emirates blood donors:impact of individual-donation nucleic acid testing 2004 through 2009[J]. Transfusion, 2012, 52(11):2300-2309. DOI: 10.1111/j.1537-2995.2012.03740.x.

[3] Taira R, Satake Masahiro, Momose S, et al. Residual risk of transfusion-transmitted hepatitis B virus(HBV) infection caused blood components derived from donors with occult HBV infection in Japan[J]. Transfusion, 2013, 53(7):1393-1404. DOI:10.1111/j.1537-2995.2012. 03909.x.

[4] 張鋒, 張瓊, 林碧, 等. 無(wú)償獻(xiàn)血者隱匿性乙肝感染病毒變異檢測(cè)分析[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2017, 27(6): 804-807.

[5] 彭小華, 李麗平, 歐陽(yáng)剛, 等. 核酸檢測(cè)技術(shù)在血液篩查中的應(yīng)用研究[J]. 中國(guó)輸血雜志, 2015, 28(6): 717-720. DOI:10.13303/j. cjbt. issn.1004549x.2015. 06.039.

[6] 周國(guó)平，王迅，任亞娜，等. 血液篩查策略的選擇要因地制宜[J]．中國(guó)輸血雜志，2015，28(1)：108-110. DOI:10.13303/j. cjbt. issn.1004-549x.2015.01.037.

[7] 段勇, 郭逸, 葉世輝. 病毒核酸檢測(cè)技術(shù)在西安地區(qū)血液篩查中的應(yīng)用分析[J]. 中國(guó)輸血雜志, 2014, 27(8): 842-844. DOI:10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2014.08.015.

[8] 周麗君, 張洪斌, 畢新紅, 等. 烏魯木齊市血液中心受委托集中化核酸檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志, 2015, 28(1): 108-110. DOI:10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2016.09.030.

[9] 曹志剛, 李霜云. 核酸檢測(cè)技術(shù)在襄陽(yáng)地區(qū)獻(xiàn)血篩查中的應(yīng)用分析[J]. 臨床輸血與檢驗(yàn), 2013, 15(2): 150-151. DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2013.02.017.

[10] 錢榕, 后平欽, 方昌志, 等. 核酸檢測(cè)技術(shù)在獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)輸血雜志, 2012, 25(3): 246-248. DOI:10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2012.03.024.