IL-8、IL-12、IL-17對風濕免疫相關性血細胞減少癥的診斷價值

王振杰，王 菁，劉麗萍，蘇暉瑩，郭培霞，王曉東

(1.濮陽市人民醫院 風濕免疫科，河南 濮陽457000;2.濮陽市醫學高等專科學校 教務科)

風濕免疫相關性血細胞減少癥(RIRH)是一類由骨髓衰竭性疾病分離出的新型疾病體系,發生率呈逐年增長趨勢[1]。研究顯示，RIRH相關發病機制是受到某種未知病原刺激作用后，重要抗原表現為細胞樹突狀細胞亞群發生異常，導致下游相關T淋巴細胞的調控平衡喪失，引起B淋巴細胞功能、數量及亞群異常，從而誘導針對骨髓造血細胞的相關自身抗體產生，并經介導巨噬細胞將補體原位溶血吞噬及激活，或將造血細胞膜上相關功能蛋白封閉，阻止造血細胞增殖、分化，引起骨髓衰竭及無效造血[2,3]。研究發現，一些RIRH患者的血清HLA-B27水平多存在增高情況；同時，隨著端粒酶活性的增強， HLA-B27因子的造血功能會遭受嚴重損害[4]。本研究對炎性因子(IL-8、IL-12、IL-17)在RIRH中的表達以及在人體骨髓中相關狀態進行分析,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選擇2014年10月至2016年12月期間在我院接受治療的60例RIRH患者作為研究組，其中男19例，女41例，年齡14-70歲，平均年齡(52.6±11.3)歲；29例全血細胞減少，31例兩系減少；血紅蛋白(HB)水平35 g/L-102 g/L，外周血WBC水平(0.7-3.2)×109/L，PLT水平為(8-93)×109/L；18例合并有干燥綜合征，16例合并有類風濕關節炎，28例合并有系統性紅斑狼瘡。WBC水平<2.0×109/L者25例，存在尿路感染、肺部感染者血清IgG水平、血沉(ESR)明顯升高；長期或間斷應用糖皮質激素者39例。另選取同期來我院接受健康體檢的60例人員血清標本作為對照組，其中男24例，女36例，年齡20-51歲，平均(38.5±7.1)歲。所有人員對本研究均知情，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1血清細胞因子表達檢測 所有人員在入院后留取空腹狀態下的靜脈血清，放入-80℃冰箱內保存[5]；7 d后采用酶聯免疫吸附法檢測血清IL-17、IL-8、IL-12表達水平，每孔標本設置為3孔，設置波長為450 nm，并讀取3孔的OD值，應用標準曲線進行樣品濃度換算[6]。

1.2.2骨髓免疫細胞的活化狀態表達 取患者骨髓涂片，用聯苯胺法進行過氧化物酶(POX)染色，并對免疫細胞POX的相關活性進行觀察； IgG抗體及IL-17A、IL-17RA、IL-8等相關免疫分子水平用IF法實施檢測[7]。

1.2.3藥物治療原則 給予患者對癥支持治療及免疫抑制劑治療，依據患者具體病情變化給予糖皮質激素治療；在恢復血象后，應用劑量不斷遞減[8]。針對血清HLA-B27、IgG水平增高者，需及時配合口服環孢素A，將T輔助細胞的活化阻斷。針對存在感染灶及WBC水平明顯減少、發熱者，需參照患者藥敏實驗結果選取合適的抗生素進行治療，或配合抗病毒藥物實施對癥治療。針對原發病實施對癥支持治療。同時針對血小板計數>50×109/L且無出血傾向者，加用復方丹參治療，對骨髓血管炎性病變進行干預治療。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 血清炎性因子表達

研究組患者的血清IL-8、IL-12、 IL-17表達水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組人員血清炎性因子表達水平比較

2.2 組織嗜堿細胞(MC)增高和IL-8增高相關性

患者骨髓中組織嗜堿細胞表達增多，其分類約是(3.1±0.1)%，明顯超過對照組(0.5±0.1)%，差異有統計學意義(t=142.408，P=0.001)。活化組織嗜堿細胞經黏附及捕獲、釋放嗜堿性顆粒能對病變血細胞進行攻擊，見圖1A-D；組織嗜堿細胞和血清IL-8水平具有正相關性r=0.885。

A：常規組織嗜堿細胞；B：活化MC通過粘附攻擊病變血細胞；C：活化MC通過捕獲攻擊病變血細胞；D：活化MC通過釋放堿性顆粒攻擊病變血細胞；

2.3 嗜酸性細胞(EOS)增生活躍

RIRH患者的骨髓中EOS相關分類約是(7.3±3.2)%，明顯超過對照組(2.5±1.5)%，差異有統計學意義(t=10.521，P=0.000)。而活化EOS相關特異性顆粒POX的活性顯示增強，其病變中性粒細胞、血小板及紅細胞的粘附與捕獲、吞噬情況，見圖2E-G；而受到攻擊的相關病變中性粒細胞POX的活性明顯降低，見圖2H。

E：病變的中性粒細胞；F：病變的血小板；G：病變的紅細胞；H：病變中性粒細胞POX活性減弱

2.4 巨噬細胞(Mj)的形態奇異

一些RIRH患者因間斷接受糖皮質激素治療，患者的骨髓中Mj多顯示為陽性形態怪異，而合并感染者的骨髓中多顯示巨大活化狀態Mj將多種炎性細胞募集情況。見圖3A-D。

A：EOS特異性顆粒；B：MC特異性顆粒；C：活化的DC；D：巨大活化狀態的Mj募集各種炎性細胞

2.5 IL-17A、IL-12與其受體

RIRH患者的骨髓中DC及EOS、Mj胞漿中出現分泌樣IL-12表達，而缺鐵性貧血者的骨髓中無表達或存在弱表達DC、EOS，存在灶性弱表達Mj，見圖4E-H。且缺鐵性貧血、血清IgG水平增高的骨髓表現為體液免疫活化優勢情況的相關RIRH患者，其DC無IL-17A表達，但血清HLA-B27水平增高者的骨髓中，相關活化DC及EOS、Mj具有IL-17A高表達，而缺鐵性貧血患者的骨髓中存在少數造血細胞IL-17RA表達，合并感染者的骨髓細胞中IL-17RA具有廣泛表達，見圖5I-L；說明感染能增多IL-17A、IL-17RA結合細胞數量，使其介導的相關炎性反應放大。

3 討論

風濕免疫系統疾病是一種較為常見的自身免疫性疾病，致病因素眾多，會對患者機體免疫系統誘導，進而促使其免疫應答中出現障礙[9,10]。研究發現，因疾病遷延較慢、頻發性復發，加之自身抗體相關分子模擬、抗原表位出現擴展，能侵及造血系統，造成機體內一些血細胞膜抗原的相關結構產生變化，導致RIRH處于超敏反應疾病狀態中，而感染免疫活化能導致造血細胞免疫受損加重[11,12]。

E：EOS強陽性表達；F：Mj低表達；G：FcγⅡR數量增多；H：巨大的 Mφ 型造血細胞島；I：骨髓中DC增多；J：骨髓中 DC 和 Mφ 呈顆粒狀弱表達 MR；K：骨髓中EOS增多；L：高表達 MR 的 Mφ 與病變血細胞組成的造血細胞島；

研究顯示，RIRH患者存在自身免疫性疾病，多伴有外周血兩系、三系表達降低等主要臨床表現，且骨髓出現增生活躍，活化組織樹突狀細胞及嗜堿細胞、巨噬細胞、嗜酸性細胞等相關免疫細胞[13]。而一些患者因間斷接受糖皮質激素治療，導致骨髓中相關漿細胞、巨噬細胞出現形態異常，影響功能，同時，存在WBC水平降低患者的骨髓中，為主要的RIRH患者骨髓特征[14]。本研究結果顯示，RIRH患者血清中IL-17、IL-12表達水平均高于正常對照組人員；提示介導自身免疫的IL-17等炎性因子表達水平和RIRH患者的造血細胞炎性受損相關病變過程關系密切[15]。一些患者因WBC表達下降，加上間斷接受糖皮質激素治療，易導致感染風險增加，使病情進一步加重。同時，研究發現RIRH患者的骨髓中具有高表達活化免疫細胞IL-12及IL-8；說明RIRH患者骨髓可能存在分泌IL-8、IL-17等炎性介質的相關功能，能對骨髓造血微環境相關血管炎性病變進行介導，對造血細胞相關生長發育進行影響，對病變造血細胞進行損害、破壞，是破壞RIRH患者骨髓造血細胞的重要因素[16]。

綜上所述，風濕免疫相關性血細胞減少癥患者的骨髓中存在多種免疫細胞活化，且表達、分泌多種相關免疫分子，介導炎性反應、ADCC效應及細胞免疫功能，是導致損傷病變造血細胞的主要免疫機制，臨床可根據炎性因子表達水平能為臨床診斷RIRH提供參考。

作者簡介：王振杰(1975-)，男，副主任醫師，研究方向：類風濕關節炎。

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