HPLC法測定甲磺酸雷沙吉蘭片的有關物質

周敏 丁云暉 陳紅霞

摘 要 目的： 建立HPLC 法測定甲磺酸雷沙吉蘭片有關物質的方法。方法：采用Eclipse XDB-C18柱、乙腈-高氯酸溶液為流動相、檢測波長為210 nm等條件下進行HPLC測定。結果：在該色譜條件下，主藥和有關物質能較好地分離，雷沙吉蘭濃度和峰面積在0.008 2～3.2 mg/ml內線性關系良好（r = 0.999 5，n=8），而雜質A和B的濃度和峰面積分別在0.001 6～3.2 mg/ml和0.002 1～3.2 mg/ml內呈良好的線性關系 （r =0.999 6，n=8）。結論：本方法簡便、準確、可行、精密度高，可用于甲磺酸雷沙吉蘭片有關物質的質量控制。

關鍵詞 甲磺酸雷沙吉蘭 HPLC 有關物質

中圖分類號：R917 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2018）09-0077-04

Determination of the related substances in rasagiline mesylate tablets by HPLC

ZHOU Min*， DING Yunhui， CHEN Hongxia

（Shanghai Zhongxi Pharmaceutical （Group） Co.， Ltd.， Shanghai 201806， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the determination of the related substances in rasagiline mesylate tablets by HPLC. Methods： HPLC was performed on Eclipse XDB-C18 column with acetonitrile-perchloric acid solution as a mobile phase at the detected UV wavelength of 210 nm. Results： The resolution between rasagiline mesylate and the other peaks met the requirements. The standard curves of rasagiline mesylate and the related substance A and B showed a good linearity over the range of 0.008 2～3.2 mg/ml， 0.001 6～3.2 mg/ml and 0.002 1～3.2 mg/ml， respectively. Conclusion： This method is simple， accurate and feasible with higher precise， and can be used as quality control of the related substances in rasagiline mesylate tablets.

KEy WORDS rasagiline mesylate； HPLC； related substances

雷沙吉蘭是一種有效的、不可逆的、選擇性單胺氧化酶B（MAO-B）抑制劑，能使紋狀體細胞外多巴胺含量升高[1-3]。雷沙吉蘭在多巴胺能神經運動障礙中的療效，可能是間接通過升高多巴胺含量及因此而提高多巴胺能活性所實現[4]。與其他抗帕金森藥物不同的是，甲磺酸雷沙吉蘭還具有保護神經元和長期增效作用[5-6]。本品適用于治療特發性帕金森氏病（不合用左旋多巴胺）或作為輔助治療（與左旋多巴胺合用）治療伴有劑末波動的帕金森氏病[1]。

而本研究建立一個檢測時間短、且使用的溶劑相對環保的有關物質檢測方法。經驗證，該方法精密度高，專屬性強，適合其有關物質的測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1100及1200型高效液相色譜儀、紫外檢測器、1200型DAD檢測器和色譜工作站（美國Agilent公司）；AL104電子天平（梅特勒-托利多公司）；乙腈（色譜純，Merck公司）；純化水、氨水（分析純）、高氯酸（優級純）均購自國藥集團化學試劑有限公司。甲磺酸雷沙吉蘭工作用對照品（批號：GB17-001，含量99.8%）、2，3-二氫-1H-茚-1-酮 （簡稱：雜質A，純度 99.9%，水分未檢出）、2，3-二氫-1H-茚-1-胺鹽酸鹽（簡稱：雜質B，純度99.96%，水分1.15%）、甲磺酸雷沙吉蘭片（批號：T111001、T111002、T111003、20170809，規格：每片1 mg）均由上海中西三維藥業有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 mm）；流動相：緩沖液（高氯酸溶液4.2 ml，加入水1 000 ml，用濃氨水調節至 pH 2.5）-乙腈（75∶25））；流速：1.0 ml/min ；紫外檢測波長：210 nm；進樣量：50 ml；柱溫：25 ℃。

1.2.2 溶液配制

1）供試品溶液 稱取本品細粉適量，加水適量，超聲處理使甲磺酸雷沙吉蘭溶解并制成每1 ml 中約含雷沙吉蘭0.13 mg 的溶液，離心，取上清液用0.45 μm 濾膜濾過，作為供試品溶液。

2）對照溶液 精密吸取供試品溶液1 ml 置100 ml量瓶中，用水釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

3）系統適用性溶液 分別稱取甲磺酸雷沙吉蘭對照品與雜質A、 B對照品適量，加流動相適量溶解并用水稀釋制成每1 ml 中分別約含2 μg 的混合溶液，搖勻，作為系統適用性溶液。

1.2.3 專屬性實驗

1）樣品 取本品細粉適量（約相當于甲磺酸雷沙吉蘭5 mg），置25 ml 量瓶中，加2 mol/L 鹽酸溶液1 ml，80 ℃條件下水浴加熱3 h，冷卻后，加2 mol/L 氫氧化鈉溶液1 ml 中和，作為酸破壞樣品；加2 mol/L 氫氧化鈉溶液1 ml，室溫放置3.5 h，加2 mol/L 鹽酸溶液1 ml 中和，作為堿破壞樣品；加水適量溶解后，80℃條件下水浴加熱5 h，放冷，作為高溫破壞樣品；加3%雙氧水1 ml，室溫放置5 h，作為氧化破壞樣品；加水適量溶解后，置紫外光（4 500 lx）下直接照射5 h，作為光照破壞樣品；上述樣品均用水稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液用0.45 mm 濾膜濾過，取續濾液50 ml進樣，記錄色譜圖。

2）空白輔料 取空白輔料適量，加水制成每 1 ml中約含空白輔料 8 mg 的溶液，采用上述樣品專屬性試驗方法，對空白輔料用強光照射、高溫、酸水解、堿水解和氧化的方法進行加速破壞，處理后的樣品取續濾液進行HPLC分析，以研究輔料是否干擾樣品有關物質檢查。

2 結果

2.1 方法學考察

2.1.1 系統適用性試驗

取系統適用性溶液進樣測定，在上述色譜條件下，理論板數按雷沙吉蘭峰計10 898，甲磺酸雷沙吉蘭峰與雜質A、B峰間的分離度分別為22.88和10.42（圖1）。

2.1.2 輔料干擾

空白輔料在相對保留時間0.5之前出峰，不干擾主藥的測定。

2.1.3 檢測限定量限

精密稱取甲磺酸雷沙吉蘭、雜質A、B對照品，分別不斷地稀釋后進樣測定，按信噪比S/N=3 計算檢測限，按信噪比S/N=10 計算定量限（表1）。

2.1.4 線性關系

分別精密稱取甲磺酸雷沙吉蘭對照品與雜質 A 和B 適量，分別加水適量使溶解，并用水稀釋成數個濃度的供試品溶液，精密吸取 50 ml 注入液相色譜儀中測定，結果見表2。

2.1.5 校正因子

以表2中的線性方程，計算雜質A、B相對于甲磺酸雷沙吉蘭的校正因子，結果顯示：雜質A、B校正因子范圍均在0.2～5.0之內、0.9～1.1之外[8]（表2），可以采用加校正因子主成分自身對照法計算不在范圍內的雜質A、B的含量。

2.1.6 重復性試驗

取同一批樣品的供試品溶液、對照溶液各6份進行HPLC測定，經計算雜質總量平均為0.015%，RSD為3.8%，具有良好的重復性。

2.1.7 穩定性試驗

取同一批號供試品溶液，在0、2、4、6、8、10 h進樣測定，考察供試品中雜質峰面積的穩定性，結果表明供試品溶液在10 h 內雜質個數沒有增加，雜質總量也基本穩定（表3）。

2.1.8 回收率試驗

精密稱取雜質A、雜質B及甲磺酸雷沙吉蘭對照品適量，按處方量加入輔料，加適量流動相溶解，并用水稀釋至以有關物質對照溶液濃度 50%為基準濃度的50%、100%、150%溶液。進樣進行液相色譜測定，并按外標法以峰面積計算雜質A、雜質B、甲磺酸雷沙吉蘭的測得量和回收率（表4）。結果表明，雜質A、雜質B、甲磺酸雷沙吉蘭的回收率良好。

2.1.9 專屬性試驗

對破壞后的樣品進行液相色譜分析，結果表明，甲磺酸雷沙吉蘭片在堿、酸、氧化破壞中有明顯降解，在光照和高溫條件下表現出較穩定（圖2）。各破壞條件下物料守恒，產生的雜質峰能與主峰有效分離。經破壞后的空白輔料溶液，均不干擾樣品中雜質的檢查。說明該色譜條件專屬性較強，可有效檢出各破壞的雜質（表5）。

2.1.10 耐用性試驗

取同一批供試品溶液各50 ml 分別于0.8 、1.0 、1.2 ml/min 流速下進樣，測定的有關物質分別為0.48%、0.47%、0.44% ；調節流動相比例為80∶20與70∶30條件下進樣，所測定的有關物質含量分別為 0.49%、0.46% ；將色譜柱更換為Platisil ODS 柱（4.6 mm× 250 mm，5 mm），測定的有關物質含量為0.50%，表明該方法的系統耐用性良好。

2.2 有關物質檢查

按自身對照法檢測并計算三批樣品雜質含量，結果顯示，四批樣品雜質A和B均小于0.50%、總雜質均小于1.0%（表6）。

3 討論

本研究與文獻[7]比較，檢測時間較短，且使用的溶劑相對環保。對雜質A、B和甲磺酸雷沙吉蘭對照品溶液進行DAD掃描，結果表明雜質A、B和甲磺酸雷沙吉蘭均在210 nm處有最大紫外吸收，故選擇210 nm為紫外檢測波長。

單純的酸破壞條件下主峰幾乎沒有降解，故在酸破壞時，增加了80 ℃條件下水浴加熱3 h。在本法的高溫、酸、堿、氧化、光破壞實驗中，均有雜質A、B生成，產生的雜質峰能與主峰有效分離，樣品主峰和各破壞性試驗樣品主峰的純度因子均大于990，表明本法適用于有關物質的檢查。

對有關物質檢查方法進行方法學驗證表明，該方法能較好地分離雜質峰與主峰并能夠定量雜質。本驗證內容符合藥品質量標準分析方法驗證指導原則附錄[9]374，且驗證數據準確可靠。

參考文獻

[1] 劉廷輝. 新型抗帕金森病藥——雷沙吉蘭[J]. 中國藥學雜志， 2006， 41（11）： 877-878.

[2] 謝丹單. 抗帕金森病藥甲磺酸雷沙吉蘭[J]. 世界臨床藥物， 2007， 28（10）： 634-640.

[3] Chen JJ， Swope DM. Clinical pharmacology of rasagiline： a novel， second-generation propargylamine for the treatment of Parkinson disease[J]. J Clin Pharmacol， 2005， 45（8）： 878-894.

[4] 張華. 甲磺酸雷沙吉蘭在中國健康志愿者中藥動學藥效學的研究[D]. 蘇州： 蘇州大學， 2013.

[5] Rabey JM， Sagi I， Huberman M， et al. Rasagiline mesylate， a new Mao-B inhibitor for the treatment of Parkinsons disease： a double-blind study as adjunctive therapy to levodopa[J]. Clin Neuropharmacol， 2000， 23（6）： 324-330.

[6] 廖品君. 甲磺酸雷沙吉蘭聯合左旋多巴治療運動癥狀有波動的原發性帕金森病的療效觀察[J]. 實用心腦肺血管病雜志， 2014， 22（9）： 78-79.

[7] Reddy PS， Sudhakar Babu K， Kumar N. Development and validation of a stability-indicating RP-HPLC method for the simultaneous estimation of process related impurities and degradation products of rasagiline mesylate in pharmaceutical formulation[J]. J Chromatogr Sci， 2013， 51（3）： 242-249.

[8] 張哲峰. HPLC法校正因子研究中的幾個問題[EB/OL].（2011-12-07）[2017-10-13]. http：//www.cde.org.cn/dzkw. do？method=largePage&id;=312552.

[9] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（2015 年版）四部[M]. 北京： 中國醫藥科技出版社， 2015 ： 374-378.