氟尼辛葡甲胺注射液對靶動物奶牛的安全性研究

孟 芳，鄭 莉，林 紅，馮言言，田振平，孔 梅*，吳連勇*

(1.齊魯動物保健品有限公司，濟南 250100；2.齊魯晟華制藥有限公司，山東德州251500)

氟尼辛葡甲胺，為非甾體類抗炎藥物(NSAIDs)，美國先靈葆雅公司于20世紀90年代將其開發成注射劑并于1998年由FDA[1]批準用于治療由牛呼吸系統疾病、內毒素血癥及急性奶牛乳房炎所導致的發熱。2007年，農業部第865號公告批準氟尼辛葡甲胺注射液用于家畜及小動物發熱性、炎癥性疾患、肌肉痛和軟組織痛。與傳統的NSAIDs相比，氟尼辛葡甲胺化學結構獨特，解熱鎮痛作用強，毒副作用低，在牛奶中代謝迅速，休藥期短[2-3]。NSAIDs由于起效迅速，可解熱、減輕炎癥腫脹及疼痛并能改善功能，對控制疾病的進程乃至預后發揮著至關重要的作用，臨床中常與抗生素聯合使用[4-5]，需求量十分巨大，因此，其在臨床使用中的安全性尤為重要。目前國內尚無氟尼辛葡甲胺注射液對靶動物奶牛安全性的相關研究。本試驗選用健康泌乳奶牛進行氟尼辛葡甲胺注射液的靶動物安全性試驗，以期為臨床用藥提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 藥品 氟尼辛葡甲胺注射液，規格100 mL：5 g；批號：1402001，由齊魯動物保健品有限公司提供；推薦用藥方法：靜脈注射：一次量，每1 kg體重，奶牛2.2 mg/kg，連用不超過5 d。

1.2 儀器 全自動血細胞分析儀(CELL-DYN 400，美國雅培公司)；Technion全自動生化分析儀(RA-1000，美國泰爾康公司)；牛奶體細胞計數儀(KD-400，北京康達智信科技有限公司)。

1.3 動物 從北京市房山區奶牛場的240多頭荷斯坦奶牛(胎次：2～3胎)中隨機選擇泌乳期健康奶牛20頭，體重為400～450 kg。

1.4 試驗分組及給藥[6]20頭奶牛隨機分成4個組，每組5頭。其中3個受試藥物組，即1×(2.2 mg/kg bw)、3×(6.6 mg/kg bw)、5×(11.0 mg/kg bw)推薦劑量組，每日上午8點擠奶后頸靜脈注射給藥1次，連續給藥7 d，并于最后一次給藥后臨床觀察3 d。空白對照組，注射滅菌注射用水。

1.5 觀測指標

1.5.1 奶牛臨床表現和乳房局部癥狀 整個試驗期間，觀察記錄用藥奶牛的精神狀態、采食飲水、糞尿排泄、直腸溫度、呼吸、脈搏、乳房局部癥狀(腫脹、潮紅發熱、疼痛等)等臨床表現，分別在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日和第7日對各組奶牛的上述臨床表現按給定標準進行評分(表1～表2)。

表1 奶牛一般臨床表現觀察Tab 1 General Physical Examination of dairy cow

表2 奶牛臨床癥狀和乳房局部癥狀評分表Tab 2 The score of clinical symptom of mammary gland

1.5.2 血液生理指標 分別在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日和第7日對各組奶牛頸靜脈采血5～10 mL，進行血常規檢查。檢測參數包括紅細胞計數(RBC)、白細胞計數(WBC)、血紅蛋白(HGB)、平均紅細胞體積(MCV)、血小板計數(PLT)等。

1.5.3 血液生化指標 分別在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日和第7日對各組奶牛頸靜脈采血5～10 mL，進行血液生化學檢查。檢測參數包括膽固醇(CHOL)、血尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、肌酐(CREA)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)等。

1.5.4 體細胞數 在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日和第7日對各組奶牛進行桶奶采集，采集為每日擠奶三次的中間一次，即上午給藥后的那一次，進行桶奶牛奶中體細胞數指標測定。

1.6 結果判定、數據處理 觀察記錄各劑量組和空白對照組試驗奶牛用藥前后的臨床癥狀，記錄各試驗組奶牛的血液生理指標和血清生化指標數值，使用SPSS20.0統計軟件計算各指標的平均值與標準差，采用t檢驗比較各指標的差異性。

2 結果與分析

2.1 各劑量組奶牛直腸體溫、脈搏和呼吸次數 整個試驗期間，給藥組和對照組奶牛直腸體溫、脈搏和呼吸次數均在正常范圍之內。在不同組別的不同時間以及同一組別不同時間點，上述三個指標差異均不顯著(P>0.05)。

2.2 各劑量組奶牛臨床表現和乳房局部癥狀評分

對泌乳期奶牛連續給藥7 d及停藥后3 d的試驗期間，觀察其精神狀態、采食飲水、糞尿排泄和乳房局部癥狀(腫脹、潮紅發熱、疼痛等)，隨著給藥劑量增加、給藥后體內作用時間延長，不同組別的不同時間以及同一組別不同時間點，所有動物行為未見異常，未見明顯不良反應，也未發現動物死亡。

2.3 各劑量組奶牛血液生理、血清生化指標比較

2.3.1 血液學指標檢查 隨著給藥劑量增加，給藥后體內作用時間延長，各試驗組與對照組奶牛在不同時間點以及同一組別不同時間點的血液學指標平均值未出現異常，均在奶牛正常生理指標范圍之內(表3～表6)，因此，未進行統計學分析，說明即使5×推薦劑量氟尼辛葡甲胺注射液對奶牛血液指標也無顯著影響。

表3 空白對照組給藥后0 d、3 d、7 d時血液學指標值Tab 3 The Hematology of the control group on day 0,3,7 after

紅細胞數(RBC)；平均紅細胞體積(MCV)；紅細胞平均血紅蛋白含量(MCH)；血紅蛋白(HGB)；白細胞(WBC)；淋巴細胞(LYM#)；血小板計數(PLT)(下同)

表4 1×劑量組給藥后0 d、3 d、7 d時血液學指標值Tab 4 The Hematology of the 1× group on day 0,3,7 after

表5 3×劑量組給藥后0 d、3 d、7 d時血液學指標值Tab 5 The Hematology of the 3× group on day 0,3,7 after

表6 5×劑量組給藥后0 d、3 d、7 d時血液學指標值Tab 6 The Hematology of the 5× group on day 0,3,7 after

2.3.2 血清生化指標檢查 1×、3×推薦劑量組奶牛在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日和7日以及5×推薦劑量組奶牛首次給藥前第0日和首次給藥后3 d的血清生化數據與對照組奶牛不同采樣點時間獲得的血清生化指標均在正常范圍之內，之間無顯著差異(表7～表10)，但對于5×推薦劑量組奶牛，首次給藥后7 d，5頭奶牛中有2頭奶牛出現尿素氮和肌酐水平升高，說明5×推薦劑量注射給藥對部分奶牛腎臟功能有影響。

表7 空白對照組奶牛在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日、第7日時血清生化指標值Tab 7 The Blood Chemistry of the control group on day 0,3,7 after

續表

白蛋白(ALB)；堿性磷酸酶(ALKP)；丙氨酸氨基轉移酶(ALT)；天冬氨酸轉氨酶(AST)；血尿素氮(BUN)；膽固醇(CHOL)；肌酐(CREA)；直接膽紅素(DBIL)；葡萄糖(GLU)；總膽紅素(TBIL)；膽堿酯酶(CHE)；總蛋白(TP)(下同)

表8 1×劑量組奶牛在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日、第7日時血清生化指標值Tab 8 The Blood Chemistry of the 1× group on day 0,3,7 after

表9 3×劑量組奶牛在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日、第7日時血清生化指標值Tab 9 The Blood Chemistry of the 3× group on day 0,3,7 after

表10 5×劑量組奶牛在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日、第7日時血清生化指標值Tab 10 The Blood Chemistry of the 5× group on day 0,3,7 after

2.4 試驗奶牛乳汁體細胞數 各組試驗奶牛在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日、第7日采集奶樣進行SCC檢測，統計分析結果見表11。數據可見：在首次給藥前第0日和首次給藥后第3日、第7日各組試驗奶牛的SCC算術平均值均未超過50萬/mL，且組內與組間不同時間點相比，統計學差異不顯著，而且體細胞數均在正常范圍內，說明奶牛乳房處于健康狀態。

表11 試驗奶牛首次在給藥前第0日和首次給藥后第3日、第7日乳汁SCC檢測值比較Tab 11 The SCC in milk of each group on day 0 and 7 after

3 結 論

本試驗評估了氟尼辛葡甲胺注射液對奶牛的靶動物安全性，為該制劑在奶牛臨床中的使用提供了科學依據。美國食品藥品監督管理總局(FDA)報道了先靈葆雅公司開發的氟尼辛葡甲胺注射液對肉牛靶動物安全性試驗研究[1]，試驗中分別給予1×(2.2 mg/kg bw)、3×(6.6 mg/kg bw)、5×(11.0 mg/kg bw)推薦劑量，每日靜脈注射1次，連續給藥9 d，結果顯示，3×和5×給藥劑量組動物的尿液中血細胞比例明顯增加，甚至出現尿液潛血的現象，這說明高劑量給藥對牛腎臟功能有影響。本研究中，氟尼辛葡甲胺注射液對奶牛的臨床癥狀、乳房局部癥狀、血液學指標無影響，僅5×推薦劑量組在給藥后7 d，有2頭奶牛出現尿素氮水平升高，說明高劑量給藥對奶牛的腎臟功能有顯著影響，與FDA的報告基本一致。

國內尚無氟尼辛葡甲胺注射液在奶牛上使用的安全性研究。吳文學[7]等的研究中采用15頭長白雜交商品豬，分為1×(1.1 mg/kg bw)、3×(3.3 mg/kg bw)、5×(5.5 mg/kg bw)推薦劑量組三個組，給藥后進行臨床觀察、顯微病理和血液生化檢查，3×、5×劑量組豬注射部位局部輕度腫脹，5×劑量組豬的血紅蛋白值、淋巴細胞百分數和肌酐水平下降，丙氨酸氨基轉移酶和天門冬氨酸氨基轉移酶升高，可見高劑量的氟尼辛葡甲胺會對豬的肝臟功能造成一定程度的影響。

在本文研究中，1×、 3×推薦劑量組奶牛分別給予2.2、6.6 mg/kg bw劑量的氟尼辛葡甲胺注射液，每日1次，連用7 d，所有奶牛的臨床癥狀、乳房局部癥狀、血液生理指標和血清生化指標均未受到影響，說明氟尼辛葡甲胺注射液臨床應用于奶牛是安全的，不影響奶牛的正常生理功能，不會對奶牛產生治療外的影響。需要注意的是5×推薦劑量組給藥7 d后有2頭奶牛出現尿素氮、肌酐水平升高，尿素氮和血肌酐是腎功能的兩個重要指標，這兩個指標升高可能是由于微小循環損傷、腎小球損傷和基底膜損傷等主要病理變化所引起，由于未進行病理剖檢，因此，未最終確診病理改變。由此得出，氟尼辛葡甲胺注射液超劑量長期使用會對奶牛的腎臟功能造成一定程度損傷，因此，在臨床使用中嚴禁超劑量長期使用。

參考文獻：

[1] https://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/Products/ApprovedAnimalDrugProducts/FOIADrugSummaries/ucm064905.pdf.

[2] http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Maximum_Residue_Limits_-_Report/2009/11/WC500014324.pdf.

[3] https://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/Products/ApprovedAnimalDrugProducts/FOIADrugSummaries/ucm064910.pdf.

[4] Thiry J,Gonzalez-Martin JV,Elvira L,et al. Treatment of naturally occurring bovine respiratory disease in juvenile calves with a single administration of a florfenicol plus flunixin meglumine formulation[J]. Vet Rec,2014,174(17):430.

[5] Guzel M, Karakurum M C, Durgut R, et al. Clinical efficacy of diclofenac sodium and flunixin meglumine as adjunts to antibacterial treatment of respiratory disease of calves[J]. Aust Vet J,2010,88(6):236-239.

[6] https://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/GuidanceComplianceEnforcement/GuidanceforIndustry/UCM052464.pdf.

[7] 吳文學，王中杰，李金祥.新獸藥氟尼辛葡甲胺的研究[J]中國獸醫雜志，2006，42(1)：51-53.

WU wenxue,WANG zhongjie,LI jinxiang.The study of the new animal durg flunixin meglumine[J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine，2006,(42)1:51-53.